BIO-RAD VII仪器SOP.doc

版 本：第1版页11/9 有效日期：Variant II糖化血红蛋白A1c测定仪标准操作程序 执行日期：2006年7月标准操作规程操作规程文件号：第1版（共9页）标题：VARIANT II糖化血红蛋白A1c测定仪标准操作程序目的：建立操作VARIANT II糖化血红蛋白A1c测定仪分析过程启用日期： 年 月 日 批准日期： 年 月 日编辑者： 审批者：使用对象：实验室技术人员作废日期: 年 月 日 代替版本文件号：VARIANT II糖化血红蛋白A1c测定仪标准操作程序型号：Bio-Rad Variant II 仪器序列号： 安装日期： 年 月1目的：VARIANT II（VII）糖化血红蛋白A1c测定仪用于报告个体EDTA抗凝静脉全血样本的糖化血红蛋白A1c的实验结果，用于个体糖尿病辅助诊断和治疗监测。2 原理：VARIANT糖化血红蛋白测试系统是一台全自动化的、高吞吐量的血红蛋白分析仪。它由两个模块构成 VARIANT层析站（VCS）和VARIANT取样站（VSS）。另外，该系统利用一台个人计算机和临床数据管理（CDM）软件来进行系统控制。VARIANT II糖化血红蛋白A1c测定仪应用高效液相色谱法（HPLC）对人全血糖化血红蛋白A1c的自动化和准确的测定。标本在VARIANT II 取样站(VSS) 自动混合并稀释，之后注入分析柱。VARIANT II层析站的双泵将预先编程设置的由低到高离子浓度的缓冲液注入系统，在这一过程中，血红蛋白经和柱中物质离子反应后达到分离。处理好的样本自动被注入分析通路，分离的血红蛋白随后在流经光感测量计时，测量其在415nm光波吸收情况；由690nm进行校正。VARIANT II临床数据处理软件(CDM) 将每次分析过程中收集到的数据还原。中间要经过两个水平的计算，用来校正血红蛋白的计算数值。然后CDM打印出分析结果和分析谱图，A1c的峰被标注，该面积计算使用了指数模式的高斯对数，这样计算已经排除了可变A1c的影响。VARIANT糖化血红蛋白A1c测定仪可从全血管中自动吸取标本，随后进行稀释和分析，每个样本在3分钟内即可完成测定。3仪器使用环境：1 无尘、换气良好的环境。2 避免阳光直接照射。3 室内相对湿度2080% 4 电源电压变动在220V10V之内5 有保护性接地4安全条款：1 使用对人体有危险或发生感染的样品时，请使用橡胶手套，不要直接接触。如操作人员直接被污染时，用大量的水冲洗、消毒，必要时应及时看医生。仪器污染时应随时清洗干净且消毒。2 仪器上面和周围不要放置或使用易燃、易爆物品，避免引起火灾、爆炸。3 仪器的操作、保养按规定程序进行。5标准操作过程5.1开机程序：1) 确认试剂量充足，废液桶倒空2) 依次开启VSS、VCS、电脑电源（注意：必须按此顺序开启电源）3) 待VSS、VCS自检结束后，双击 启动Variant II应用程序4) 双击左上侧#1的 ，选择Return to Ready，仪器连接完成后，系统显示Ready5) 在Maintain/Instrument菜单中从Execute Commands中选择Do Startup actions选项 ，按下Start 运行一次Startup 程序6) 运行Startup 程序时，观察屏幕下方显示的仪器压力是否稳定。5.2 关机程序1) Maintain/Instrument菜单中从Execute Commands中选择Do shutdown actions选项， 按下Start 运行shutdown程序2) shutdown完成后，选择 将仪器状态转换为Inactive3) 关闭应用程序软件，关闭计算机、VCS、VSS电源开关注: 建议仪器在不使用时保持inactive状态，并且尽量避免在Running状态突然关机下列情况建议关机： 当更换系统零件时 当需要将系统移动到新位置时 当实验室要断电时5.3 常规样本实验 Variant II常规样本采用EDTA抗凝真空采血管，采血量2ml。1）运行前检查- 记录分析柱的批号和注入次数在SETUP/Test界面选择Cartridges 按纽，如果分析柱的注入次数超过500，需要更换新的分析柱。- 检查缓冲液和洗液瓶的液面高度- 有无漏液现象- 检查泵头连接塑料管道中有无液体（必要时进行活塞/密封圈清洗）- 废液桶的液面高度2）样本顺序1. Blank（必须做，可用稀释好的校正液或一个手工稀释的样品）2. 质控品, Level 13. 质控品, Level 24 to N* 病人样本N + 1 质控品, Level 1 (可不用)N + 2 质控品, Level 2 (可不用)N + 3 STOP管*N指操作中最后病人的样本号。3）工作表建立及开始实验将仪器转换到Ready状态，将排好样本的样本架放到自动进样架上（注意样品管的条形码方向），在RUN/Worklist 界面的下方点击Start/Stop 按纽，显示对话框点击Start开始实验。使用工作表控制（Worklist Control）对话框，工作表可被暂停（Pause）和继续（Continue），停止（Stop）。运行时可从RUN/Graph屏幕中监测当前正在分析样本的图谱。刚开始运行时建议从屏幕下方监测系统压力稳定，质控通过后再离开。4）样品ID号的解释和编辑工作表中会显示样品ID号的类型之一：Blank（空白）， Cal1和Cal2（校正1和校正2），Unknown*（病人样本），CTRL (低质控)，CTRH(高质控)和Prime（全血灌注管）。如样品号需要编辑，当该样品实验完成后，可使用滚动条到要编辑的样品。双击编辑区并输入纠正。先前的内容被覆盖（此编辑操作只能执行一次）。5.4 安装新试剂和分析柱5.4.1更换试剂在缓冲液和稀释液使用前应使之达到室温，液体与室温温差在4C以内，防止产生气泡。1）当屏幕左下角的3种试剂瓶显示液面低时，证实系统处于inactive或manual状态，从试剂瓶上松开瓶帽并小心地将试剂管线垂直拿出试剂瓶。不要在Running状态换试剂。2）撤出空瓶并将其放在一边。3）去除新试剂瓶的瓶帽。将帽拧紧在空瓶上并将空瓶合适地处理。4）将新瓶放在试剂瓶隔间。将试剂管线放入新瓶。拧紧试剂瓶帽。5.4.2更换新的分析柱和过滤片每500人份需更换一个新的分析柱和过滤片。1）打开层析站的白门。找到位于层析站中央的分析柱电热模块。拧松蝶形螺钉，把盖子打开。2）从电热模块上取出分析柱筒座。逆时针方向旋开，取出旧的分析柱。3）把新分析柱的两端的绿色保护套去掉。把分析柱按流向的箭头方向向上放置。把分析柱用力推入筒座的下端直至稳定地嵌入分析柱座中。把筒座的另一端盖上，顺时针方向旋紧。4）把分析柱筒座放到电热模块上，注意应把上端的管路放入槽中。把住上方管路，关闭电热模块的盖子。按顺时针锁紧蝶形螺丝。5）松开下方预过滤器的外壳。拿掉旧的预过滤片。装上新的预过滤片。注意要旋紧。 5.4.3试剂信息更新： 1整套试剂的信息更新 选择SETUP/Test界面有一个Update Kit 按纽，在CDM Update Kit 界面显示之后，把分析参数光盘插入合适的光驱驱动器中。选择合适的驱动器（光驱）和文件名（A1c），然后点击OK按钮。所有的试剂（不包括质控信息）和分析柱的信息将被载入。退出光盘。2单独更换分析柱1）在SETUP/Test界面选择Cartridges 按纽。2）在“In Use”框中，将用完的分析柱的“Yes”改为“NO”；3）上方新出现的空格中输入新分析柱的批号。在“In Use”框中，选择“Yes”；4）当使用一个新分析柱时，注射数是“0”。在使用过程中注射数将会增加。一旦注射计数达到为每个分析柱规定的预定限制500时，软件会提醒使用者更换新分析柱。 5.4.4 试剂复溶全血Primer的复溶: 加入1ml蒸馏水，室温静置10分钟后轻轻混匀后使用。溶好的全血Primer 4C可保存21天。VariantII需复溶两支。校正品的复溶：加入5ml冷的校正缓冲液/水平，室温静置10分钟后轻轻混匀后使用。溶好的校正品 4C可保存1周。质控品的复溶：加入0.5ml蒸馏水/水平，室温静置10分钟后轻轻混匀后分装。20ul/支，-20C C可保存3个月。使用时取5ul用1ml wash液稀释在紫盖小样品管中。5.4.5分析柱的灌注 更换新的分析柱后，先进行一次系统冲洗（system flush），之后做一次全血Prime和校正（每个柱子只作一次即可）。校正不用每次实验均做。1. 按如下顺序放置样品：1 全血Prime2 全血Prime3 蒸馏水4 蒸馏水5 蒸馏水6 STOP管 2将仪器转换到Ready状态，将排好样本的样本架放到自动进样架上（注意样品管的条形码方向），在RUN/Worklist 界面的下方点击Start/Stop 按纽，显示对话框点击Start开始灌注实验。分析柱经过灌注后，才可以正常使用。5.4.6 分析柱的校正和样本实验1 按如下顺序放置样品：1 Blank2 Calibrator Level 13 Calibrator Level 24 质控品, Level 15 质控品, Level 26 to N* 病人样本N + 1 质控品, Level 1 (可不用)N + 2 质控品, Level 2 (可不用)N + 3 STOP管 2确认仪器在Ready状态，将排好样本的样本架放到自动进样架上（注意样品管的条形码方向），在RUN/Worklist 界面的下方点击Start/Stop 按纽，显示对话框点击Start开始实验。5.5 数据管理数据（Data）界面允许查看或打印保存在数据库中的样本信息。1DATA/Select界面可设定查看条件，以选择查看所有、特定日期或特定运行内的运行和样品信息。 2DATA/View Run界面允许显示和打印当前保存在数据库中的任何满足于DATA/Select界面运行设定条件的运行。选择Print按纽去打印当前被选择的运行的报告摘要（只有HbA1c%值无图谱）。3DATA/View Sample界面显示样本在选择的View Run界面下设定运行的带图谱的样本结果。选择Print可打印选中的样本的完整报告。4质控数据的查询 DATA/QC Data界面，选择要观看的QC data（按照日期或运行等方式），Start Query。 在查询完成后，一个QC Data界面被显示在主屏上（包括Levey-Jennings图，平均值和变异系数等）。从这个界面上使用者可通过点击低或高质控按纽来选择质控水平。5.6 数据库的备份和恢复5.6.1 CDM数据库容量1 CDM数据库的最大容量是350MB.当数据库达到最大容量时，软件将会提示：“There is not sufficient disk space to begin this run,the system will delete the oldest runs until sufficient disk space exists” (没有足够的磁盘空间开始本次运行。系统将会删除最老的运行直到充足的磁盘空间存在。)2 如果希望软件删除最早的运行数据，请选择“OK”，软件将提示你哪些运行数据将被删除并返回Ready状态。3如果不希望软件删除最早的运行数据并备份它们，选择“Cancel”。5.6.2数据库的备份 注意：做完数据库备份后，一定要重新做校正5.6.2.1 第一种备份方式将数据备份在光盘上，首先进行光盘格式化在备份前可能需要对光盘进行格式化，CD-R或CD-RW光盘（推荐使用CD-R）1) 如果计算机安装的是HP的刻录光驱，请按照以下说明操作插入空白CD在“Create a CD”窗口，选择Direct CD在下一个窗口，选择CD类型(推荐使用CD-R)，选择在Welcome 窗口，Next，在Driver information(驱动器信息)窗口，Next在Format Disc(格式化光盘)窗口，Next在Name your Disc(为光盘命名)窗口，为光盘命名，Finish将显示正在格式化（Formatting Disc），当完成后，点击OK2) 如果计算机安装的是Plextor的刻录光驱，请按照以下说明操作插入空白CD在“Select a Project”窗口，选择”Make a data CD”在下一个窗口，选择”Format CD”为光盘命名选择“Start Format”将显示正在格式化（Formatting Disc），当完成后，点击OK将数据库备份到光盘上1）首先确认有一个空白的已经被格式化的CD-R或CD-RW光盘（推荐使用CD-R）2）确认仪器在Inactive状态（如果没有第二台VII仪器与电脑连接，左上角的Instrument#2必需在Inactive状态）3）在Setup/Configuration窗口，选择右上角的“Backup Database”按钮4）选择 “Backup and clear”点击OK。推荐Backup and clear。5）CDM窗口将会关闭，DBBackup窗口将会出现，通过下箭头去选择光驱，不需要改变默认的文件名，数据库文件名将为*zephyr.db(或类似的)6）单击OK，将开始备份，依据数据库的大小不同而时间长短不一，大概持续15分钟。7）备份完成后，需要重新做一次校正。5.6.2.2 第二种备份方式将数据库备份到电脑硬盘上确认仪器在Inactive状态（如果没有第二台VII仪器与电脑连接，左上角的Instrument#2必需在Inactive状态）1）在Setup/Configuration窗口，选择右上角的“Backup Database”按钮2）选择 “Backup and clear”点击OK。推荐Backup and clear。3）CDM窗口将会关闭，DBBackup窗口将会出现，通过下箭头去选择硬盘，不需要改变默认的文件名，数据库文件名将为*zephyr.db(或类似的)4）单击OK，将开始备份，依据数据库的大小不同而时间长短不一，大概持续15分钟。5）备份完成后，需要重新做一次校正。6. 仪器保养（详细内容请看仪器说明书） 6.1 每日保养: - 检查每瓶试剂和废液瓶的液面：必要时更换和倒空 - 清洁样品架 - 实验后，用蒸馏水冲洗活塞/密封圈清洗端口：在注射器中注入10毫升蒸馏水，然后把注射器插入活塞/密封圈清洗端口。缓慢压下注射器的柱塞，直到注射器中的全部液体注入清洗端口。拔掉空注射器。 6.2 每月保养：1外表面的清洁使用沾湿的布或海绵擦拭仪器的外表面。不要使用带有腐蚀性的清洁剂。必要时，可以使用稀释的肥皂液清洗表面，然后使用湿布或海绵擦掉肥皂残留。2内表面的清洁使用柔软的一次性毛巾或织物擦掉内表面上的液体。注意，应该按照由下到上的顺序擦拭。拧紧任何泄漏的接头。3清洁传送带在“MAINTAIN/Instrument”屏幕上选择 “Execute Commands”框中选择“Cleaning belts”）来启动取样站传送带。使用软布或海绵沾水擦拭传送带。4消毒加样通路1) 将分析柱换为假柱（灰色塑料柱）。2) 从“Setup/Test”屏幕中选择“V2_DECON”程序。TestReagentV2_DECONDefault3) 在“Test”对话框中单击“确定”按钮。4) 在样品架的前5个位置放盛有5%次氯酸钠的5支样品管，后5个位置上放盛有蒸馏水的5个样品管。5) 把 “Stop”管放到第二个样品架上，把两个样品架放到取样站上。开始工作单6) 当仪器的状态返回到“Ready”时，拿掉塑料假柱，使用棉签沾少许脱离子水再次擦拭分析柱座，然后重新安装好分析柱。7) 从“Setup/Test”屏幕中选择“V2_A1c”程序。8) 重新做一次校正。5. 清洁条形码读取器应每月对条形码读取器清洁一次。从取样站上将前方的黑色罩门取下。使用一块软棉布轻轻擦拭条形码读取器的读取屏。注意不要划伤读取屏。6. 清洁稀释池应每月对取样站上的稀释池进行一次清洗。1) 关闭VARIANT 取样站（VSS）的电源。2) 拿掉黑色罩门。3) 把针架向后推，使用棉签沾少许蒸馏水擦拭稀释池。向稀释池中加一些蒸馏水，冲掉其中可能残留的颗粒，然后使用棉签擦拭并去掉残存的颗粒。4) 重新装上黑色罩门。5) 为取样站通电，等待取样器完成初始化和冲洗循环过程。6) 在电脑上提示的CDM通信错误、取样器复位和架子复位，均单击“确定”按钮。7清洁加样针 1）在“MAINTAIN/Instrument”屏幕上选择Replace Needle。 2）等待加样臂移动完，将取样站（VSS）前方的黑色罩门拿掉。 3）用酒精棉签擦拭加样针。 4）在“MAINTAIN/Instrument”屏幕上选择Move Needle Home。 5）屏幕出现提示是否冲洗加样针的信息，选择Yes。6.3 每季度保养：比色池清洗维护1) 订购专用的比色池清洗溶液及配套工具（注射器、清洗液和连接管）；比色池清洗溶液及配套工具，订货号270-01972) 用一个干净的小烧杯，按照3份比色池清洗溶液+7份蒸馏水稀释，总量20ml；3) Variant II在Ready状态，打开层析站的门，将连接上部比色池的进口接头旋开。4) 将连接管与比色池的进口连接；5) 用注射器从进口打入20ml稀释好的清洗液，等待20min；必要时可重复一次6) 用注射器打入至少40ml 蒸馏水来冲洗比色池，可重复一次。7) 重新连接好比色池的进口接头。7常见故障的解决办法7.1 系统压力低从MAINTAIN/Instrument界面，缓冲液2设为0%，流速为2ml/min；按按纽。监测A泵压力3到4分钟，Stop pump来关闭A泵。再将缓冲液2设为100%，流速为2ml/min；按按纽，监测B泵压力3到4分钟，Stop pump来关闭B泵。确定是A泵还是B泵压力不稳定。可通过手动排气泡来排除此故障。1）取50mL注射器并将其放入A或B泵下部的插口中。逆时针转一圈半打开插口。慢慢的回抽注射器抽出大约20mL的缓冲液。将插口顺时针旋紧，从插口中取出注射器并赶出空气。重新将注射器放回插口并逆时针转一圈半打开插口，同时用扳手将泵顶端的两个螺丝旋松。缓慢的推注射器使试剂从顶端流出，大约要从注射器中推出10mL的溶液。不要使用注射器中最后几毫升的溶液以免重新加入额外的气泡。2）关闭泵插口并取出注射器。重新连接顶端的连接，用扳手拧紧，不要拧过紧。从MAINTAIN界面重复步骤1。监测压力输出和监测器记录值5分钟。在这5分钟内，检查泵连接以察看是否有漏液。3）假如压力波动超过5%，重复上述步骤。假如压力继续波动，请联系技术服务部门寻求技术支持。7.2系统压力高 -更换一个新的分析柱或新的过滤片-检查废液桶的管路是否被挤压。7.3 运行中电源故障导致运行中断- 关闭取样站和层析站的电源- 重启电脑，等待自检通过- 按“Ctrl+Alt+Del”去登录- 按“Enter”键进入Windows- 打开CDM软件，将提示“Communication error”的信息，OK- 打开VSS和VCS，等待3分钟自检通过 - 在RUN/Worklist 界面的下方点击Start/Stop 按纽，如果运行进入“End of gradient”状态，等待该状态完成并从下一个样本（从Data/View Run界面查看）开始一个新的运行，否则可点击Continue重新开始运行。8.1 参考范围 3.9%-6%（各实验室应根据自己的实际情况制定适应本科室的参考范围）8.2临床意义： a:糖尿病人：下述范围可作为结果并加以解释。然而糖尿病病程，治疗好坏，发病年龄等因素在评估血糖控制程度时亦应加以考虑。这些结果 均为非孕妇的数值。“应采取的措施”应视个人具体情况而定。这引起措施包括糖尿病病人加强教育，与医疗小组的协作，参考内分泌医师的意见，改变治疗方式，加强自我血糖监测（SMBG）,更多接触病人等。 HbA1c(%) 血糖控制程度 8 建议增加措施+ 7-8 控制良好 7 控制达标+ 6-7 接近正常 6% 糖化血红蛋白增高，有糖尿病可能， 3.9%-6% 正常糖化水平 3.9% 较少见，一般为长期彽血糖人可能9参考文献1.中国临床检验技术操作规程第三版。2. Watts, N.B. “Diabetes Mellitus: Diagnostic and Monitoring Techniques,” Lab Management, 1982, 43-45.3. Forsham, P.H. “Diabetes Mellitus: a Rational Plan for Management,” Postgraduate Medicine 1982, 71, 139-154.4. Hollander, P. “The Case for Tight Control in Diabetes,” Postgraduate Medicine 1984 , 75, 80-87.5. Baynes, J.W. et al. “National Diabetes Data Group: Report of the ExpertCommittee on Glycosylated Hemoglobin,” Diabetes Care 1984, 7, 602-606.6. Nathan, D.M. et al. “The Clinical Information Value of the GlycosylatedHemoglobin Assay,” N. Eng. J. Med. 1984, 310, 341-346.7. Mayer, T.K. and Freedman, Z.R. “Protein Glycosylation in Diabetes Mellitus: a Review of Laboratory Measurements an