水果及蔬菜组织和自由基中1-甲基环丙烯的吸收作用 1-甲基环丙烯酶促反应的症状.doc

水果及蔬菜组织和自由基中1-甲基环丙烯的吸收作用: 1-甲基环丙烯酶促反应的症状 1-甲基环丙烯的详尽吸收都是为了许多水果和蔬菜组织聚集，在实验测试中比较1-MCP空气的吸附作用（765umol m3，18.2ul/L-1）和在全部苹果类水果的进程，吸收数据从完整的水果中的30+0.2ngkg增加到个别刚切成两半的楔形水果中的13.8+2.4和28.2+1.5ngkg。巨大提高的吸收作用也在所有水果削下的皮当中被观测到，表明吸收作用在表皮组织中受限制或者在伤口处组织中提高，鲜切苹果在组织加热后吸收作用降低了接近90%，1-MCP吸收作用的高温失活不是一连串小单元被破环所致，由于冷冻溶解的组织保留了大约76%的最初吸收数据，95%的吸收量超过了6h。强大的1-MCP吸收作用在芦笋茎尖中也被证实。芦笋茎尖的吸收数据和吸收量不被伤口组织影响但极个别的在冷冻溶解循环下会被抑制50%到54%。就苹果的组织而言，芦笋茎尖对1-MCP的吸收作用在组织加热情况下是不活跃的（90%）。加热有很强的抑制想象表明组织消耗的1-MCP参与了新陈代谢，随后分析表明来自苹果组织的同类自由单元代谢1-MCP数据接近80ng kg-1s-1，在缓冲可溶物中的余渣的活力是可忽略的。1-MCP的代谢标准化验是从5.0g组织中提取的10ml同类自由基和10ml 125mol m-3 PH=5 的Na-MES混合，这种解决办法是在密闭在244ml的广口瓶中装入420.5u.mol m-3气态1-MCP。苹果中同类自由基的1-MCP代谢展示了饱和的动力，即160mmolm-3最大aKm和4.12u mol kg-1 s-1的最大体积,最佳的发生时间是PH=5时，在加热后被抑制90%,在4mol m-3抗坏血酸盐中含83%,缺氧情况下.(0.25kpa氧气中有45%),以及硫化钠(SDS,63%在34mol m-3).1-MCP的代谢也在果皮而非果肉的CFH中被发现,无论各个组织的容量是大是小,芦笋茎尖中的大量组织含有物没有在CFH中被显现,这就说明没有1-MCP代谢.芦笋中的CFH肥肉1-MCP代谢比苹果类水果减少了75%,明显说明芦笋中的化合物抑制了1-MCP的代谢.这一数据提出相关的薄膜,氧化酶对于蔬菜和水果组织的构成比物理组织构成1-mcp主要框架更实用.1. 简介通过研究1-MCP，发现了一个潜在抑制剂乙烯的活动，继续把主要精力放在跃变型水果上，发现它完美的适用于这项技术的商业要求。然而， 跃变型水果中1-MCP是十分多种多样的。对许多跃变型水果来说，较早的1-MCP出现在成熟初期会引起不完全成熟或者不同于适当的成熟期的现象。苹果表现的可能是较早成熟中优先处理的个别例外是有益于收割期后的坚实保持能力，这是消费者对苹果的参数参考的一个基本因素。对于另外的跃变型水果来说，当1-MCP在最初成熟是实用的时候，正常的成熟是最好的目标。不仅如此，一些水果包括香蕉和鳄梨在成熟期被提前时变得对1-MCP的需求急剧迟钝。对于导致这种跃变型水果的变化的因素，回应是1-MCP有未知的残余。最近的报告表明成熟西红柿对1-MCP的敏感度是短暂的失效或者提高，这就对其个别个体体内乙烯水平短期的增长或者减少做出了回应， 另外的进程将会影响包括1-MCP组织靶子甚至乙烯受体在内的反应。根据已经在鳄梨、油以及一系列不同的水果和蔬菜中表现出来的乙烯受体的预测水平， 可知道1-MCP的吸收作用在数量上超出了预期 。Choi和Huber 宣称一些水果和蔬菜的特殊组织的吸收作用特性和包括木质素、高效甲基果胶酶，和油质在内的疏水受体的数量多少有联系，所有这些在试管内都呈现出高的吸收作用。虽然没有直接的现象，然而，这些聚合物直接说明了水果以及其他园艺产品对1-MCP的反应。 在苹果对1-MCP的吸收试验测试中，组织被切开后吸收显著提高。但是，组织加热后吸收就被消除了，这就提高了全部组织的吸收是导致1-MCP代谢的原因的可能性。目前这个研究的目的是决定水果和蔬菜组织中1-MCP的代谢是否是由1-MCP的吸收引起的。2 原料和方法 2.1. 植物原料 从当地零售店里就能获得的苹果、车前草和芦笋茎尖。2.2未处理过及加工过的苹果和芦笋茎尖对1-MCP的吸收2.2.1 苹果： 苹果有处理过的和未处理的，处理的有对半切和鲜切楔形块，把水果半切、切成16小块分别放在1.76L的玻璃广口瓶中，并用盖子隔绝外界。注入浓度为765umol m-3的气态1-MCP。在每个试验中，上部气层应优先充满充足的1-MCP。 上层1-MCP的含量水平在23下用气体层析法监测6h。广口瓶中充满不受组织控制的1-MCP。在另外的试验中，未处理过的水果或者用蔬菜削皮刀削下3mm厚的水果表皮的组织分别放到1.76L的玻璃广口瓶中,将其密封并供给765umol m-3的1-MCP。用在-30冷冻溶解的苹果测试断裂组织的1-MCP吸收作用，以及把小块在94的微波炉中加热，苹果内部温度用配有直径为5mm传感器的数字温度计测量。 在加热的每段时间，传感器要插入组织小块的吸收部位。在冷冻溶解或者加热的组织恢复到室温时，16小块状的要分开控制，同时加热过的组织要放入1.76L的广口瓶中并注入765umol m-3的1-MCP。所有对于苹果和组织的每个处理都是利用三个重复，取最接近的两个结果。22.2 芦笋茎尖新鲜的芦笋茎尖用小刀切成长度为6-7cm的小段，把最底端部分丢掉每35g放在一个244ml瓦罐中，这就用苹果为试验提供了相同容积或比重的材料，而对于苹果组织无论是在冷冻溶解循环下或者大约94加热下的都是相同的。用锋利的刀片把芦笋茎尖切成1cm厚的切片来表征切面上1-MCP的吸收面积的影响。把芦笋的茎尖部分密封到244ml的广口瓶中并注入765umol m-3的1-MCP， 顶部1-MCP的含量在23温度下用空气检测仪监测6h以上。把35g芦笋茎尖密封在244ml的广口瓶中，用盖子分生两个隔离区，用100的氮气或空气净化出口和入口30分钟，这样就可以测试出缺氧对芦笋吸收1-MCP的影响。以后，瓶子里在缺氧的环境下注入765umol m-3的1-MCP 用checkmate Head Space9900测量氮气净化后的含氧量，6h内从大约0.06Kpa下降到几乎为零。芦笋的试验每个处理利用了三个重复，取两个相似值中较小的一个作为最终结果。2.3 自由细胞匀浆的准备。新鲜苹果、削下的果皮和果肉，以及芦笋茎尖和同等体积的Na-MES混合,PH调到5，再用搅拌机以最大速度搅拌45秒钟。把混合物放在冰块里直到渗透出交替的两层，在4下以15000转每秒的速度离心10分钟，CFH通过过滤或者15000转每秒下离心来展示和1-MCP吸收相同的特征。因此，样本用过滤器快速过滤，设置大量样本和重复。不能溶解的残渣在从苹果组织中收集CFH时被排除，研究1-MCP代谢有如下描述。 2.4 1-MCP代谢的研究 10ml的CFH加入10ml 125mol m-3的Na-MES，在244ml的瓦罐中把PH调到5。在沸水中加热CFH10分钟，样品中包含有20ml 125mol m-3的Na-MES，每个实验都要把PH控制在5.广口瓶要密封并注入浓度大约为420.5umol m-3的气态1-MCP。上部1-MCP的含量在23下用空气检测仪监测6h以上。1-MCP代谢总是在混合物过滤后剩下的残渣中被检测到，而从5g苹果混合物组织中收集的不溶解残渣可用200ml 125mol m-3 PH=5的Na-MES冲洗掉，不溶解的残渣被转移到244ml装的广口瓶中并供给420.5umol m-3的1-MCP。 1-MCP代谢中PH决定于CFH用250mol m-3 Na-MES的准备或者250mol m-3的Na-MOPS，10mlCFH的每一PH下加入10ml缓冲液并密封在广口瓶中，注入420.5umol m-3的1-MCP。在控制范围内每一ph值下CFH在沸水里加热,得到的PH值和最初的值的偏差不到0.15个单位。另外的研究是利用从苹果中提取的10mlCFH和10ml PH=5 125mol m-3浓度的Na-MES混合，另外补充维生素C盐，1%硫化钠，牛肝脏消化酶，或者马肝脏消化酶。用4L 125mol m-3的Na-MES层析10ml从苹果或者芦笋中得到的CFH 12小时，PH为5，在4时优先增加10ml PH为5 浓度为125mol m-3的Na-MES，用以分析1-MCP的代谢。用10ml苹果CFH和10ml ph为5， 125molm-3 Na-MES的混合物或者10ml苹果CFH、3ml芦笋CFH和7ml ph为5， 125molm-3的Na-MES的混合物的反应来测试芦笋CFH中抑制剂的存在。 把10ml苹果CFH和10ml ph为5， 125molm-3的Na-MES放入244ml广口瓶中用磁性棒搅拌并用盖子密封，这样一个设计用以研究低氧对1-MCP代谢的影响。这一样本用100%氮气或空气净化出口和入口指针（21计量器，长152.4mm）。把入口指针轻轻的放在溶液表面，而流动的空气能使样本上避免出现泡沫。当溶液轻微的搅拌后，维持流动30分钟。然后，指针就会移动，在低氧的环境下提供此样本420.5umol m-3的1-MCP，如下文所描述，这就是100%的氮气对压强为0.25Kpa的氧气上层处理的结果。1-MCP代谢也是取决于芦笋CFH以11000转速下高速离心30分钟后得到的上清液，所有对于描述苹果的试验,车前草和芦笋CFH的每个处理都是利用三个重复，然后重复做最接近的两次。Kinetic分析1-MCP代谢之所以像上述文章中那样例外的发生，是因为这个反应在130ml的广口瓶中发生，其内有相当于0.5g苹果组织的缓冲物。在上部空间注入1-MCP气体，浓度集中在4.0，39.0，104.0，192.0和285.0mmol m-3四个浓度，一定数量的1-MCP消耗30分钟以上得到速率数据，单位为nmol kg-1 s-1. Kinetic的试验的每一个1-MCP浓度点设置四个重复，相似的结果执行三次。 2.5.1-甲基环丙烯的制备 Choi和Huber详细描述了组织和CFH吸收作用利用气态1-MCP的研究的形成，暂时地，增施1.5g1-MCP粉末到装有20ml蒸馏水的500ml派热科斯玻璃制的厄伦美厄细净瓶中形成浓度为67.3mmol m-3的气态1-MCP，此时立刻用橡皮塞密封并配备一个橡胶隔板。在23条件下放置4小时产生的1-MCP气体最少时分别加入1.76L或244ml罐装的浓度为765umol m-3的组织或者420.5umol m-3的CFH。所有的试验研究都控制瓶子里包含1-MCP，但没有组织或者CFH。准备实验中用层离法分析了1-MCP确定了组织或者CFH并没有产生挥发物。如上所述，1-MCP被用于低氧实验是把1-MCP放在密封的长颈瓶中，用100%氮气净化出口和入口指针（21计量器，长152.4mm）30分钟，最初的实验证明了用氮气净化环糊精-1-MCP对水合作用中释放的1-MCP的品质没有影响，水用来形成缺氧，把气态1-MCP加热煮沸30分钟用以去氧。然后，用30ml注射器立刻抽出20ml，针管要插入到橡皮塞中，并让水恢复到