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样品类型状态示例峰图 菌样 质粒 测序成功 收费 测序失败 不收费 非单克隆 收费 特殊结构 收费 PCR已 未纯化 测序成功 收费 测序失败 不收费 菌样 质粒 特殊结构 收费 测序双峰 收费 PCR已 未纯化 测序失败 不收费 原因分析 测序成功峰图如图所示 1 质粒本身或提取的质粒浓度较低 无法达到测序要求 2 自带测序引物质量较差 测序反应结束之后没有产生足够的模板量 导致测 序信号较弱 3 质粒模板与使用的测序引物存在多个结合位点 导致测序过程中扩增出多套 模板 出现重叠现象 4 载体信息提供错误或是设计引物存在问题 选用的测序引物与质粒没有结合 位点 测序结果在载体序列之后出现重叠的杂峰 这种情况是由于实验过程中存在污染 提供的测序样品并非单克隆导致 建议 重新挑取单克隆样品提供给我们进行测序 测序样品序列中含有特殊结构区域 Poly A T C G 会影响测序仪器对序列 的读取 结构后峰形重叠 建议 从另外一个测序方向进行尝试 测序样品序列中含有特殊结构区域 微卫星 会影响测序仪器对序列的读取 结构后峰形重叠 建议 从另外一个测序方向进行尝试 测序样品序列中含有特殊结构区域 回文结构 会影响测序仪器对序列的读取 结构后峰形重叠 建议 从另外一个测序方向进行尝试 测序成功峰图如图所示 PCR样品测序结果基本以 A 结尾 如图260bp短片段 末尾会显示 A 1 测序模板浓度较低 无法达到测序要求 2 模板或引物已经降解 3 引物Tm值太低不适合于测序 测序反应的退火温度为52 延伸温度60 4 测序引物不是PCR产物的扩增引物 引物和模板本身没有结合位点 测序样品序列中含有特殊结构区域 Poly A T C G 会影响测序仪器对序列 的读取 结构后峰形重叠 建议 从另外一个测序方向进行尝试 1 已纯化PCR产物 客户回收过程中未有效去除非特异性条带 2 未纯化PCR产物 目的片段附近含有大小相近的非特异性条带 我们通过琼 脂糖凝胶回收无法有效去除这种非特异性条带 3 引物与模板存在多个结合位点 建议 进行克隆测序或是重新提供模板引物进行尝试 1 测序模板浓度较低 无法达到测序要求 2 模板或引物已经降解 3 引物Tm值太低不适合于测序 测序反
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