DNA倍体

DNA倍体定量分析在宫颈癌早期诊断中的应用 XXXXX 10055632355XXXX XXXXX COM 子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一 全球范围内 每年约有20多万妇女死于子宫颈癌 是仅次于乳腺癌位居第二的恶性肿瘤 而在发展中国家 子宫颈癌占恶性肿瘤发病率的第一位 我国目前约有宫颈癌患者40万人 每年新发现病例为13 51万 农村多于城市 约有8万人死于宫颈癌 宫颈癌是由人类乳头瘤病毒 humanpapillomavirus HPV 特别是高危型病毒引起 其发展是一个缓慢的过程 一般要通过宫颈癌前疾病到原位癌 0期 发展到浸润癌 期 从宫颈癌前疾病发展到浸润癌一般需要5 10年的时间 期间宫颈细微变化都可以通过细胞学方法检测出来 宫颈癌是怎么发生的 宫颈癌是感染疾病 可预防的的疾病 也是世界目前唯一可以早期发现并治愈的癌症 防治的关键在于早期筛查 脱落细胞学 exfoliativecytology 1928年希腊医生PapanicolaouGN首次发表了用阴道抺片诊断宫颈癌的文章 1943年希腊医生PapanicolaouGN提出巴氏五分级分类法 三阶梯 检查 宫颈细胞学 阴道镜检查 病理组织检查 复层鳞状上皮 stratifiedepithelium 内底层细胞圆形或卵圆形 12 16mm 核居中 染色质细而均匀 胞质为深蓝色 核浆比约1 0 5 1外底层细胞圆形或椭圆形 15 25mm 核圆形 居中位 染色质疏松细颗粒状 胞质较内底层淡染呈浅蓝色 核浆比约1 2中层细胞菱形或舟状 30 60mm 核居中 5 8mm 染色质疏松 胞质明如婵翼样 浅蓝色或绿色 核浆比约1 5 8角化前表层细胞多边形或多角形 40 60mm 核 5 8mm 核染质较疏松 胞质蓝色或淡红色 角化表层细胞多边形或多角形 40 60mm 核固缩 有时甚至消失 胞质红色或橘红色 宫颈脱落细胞形态学 良性反应性细胞改变 炎性反应性细胞 上皮胞核增大为正常中层鳞状上皮的1 2 5倍 柱状上皮胞核增大1 4倍 核轻度深染 核染色质细颗粒状均匀分布 胞质丰富 可见空泡和核周晕萎缩反应性细胞 核增大而不深染 裸核 核碎裂常见 可见大量外底层细胞 炎性渗出物 嗜蓝颗粒状背景 但无癌细胞或变性的癌细胞 细胞排列较规则宫内节育器的反应性细胞 柱状上皮细胞呈小团 核质比增高 胞质量不等 呈印式样外观 核染色质粗其他各种类型感染 滴虫 霉菌 单纯疱疹 衣原体以及放疗等 级 未见异常细胞 级 发现异常细胞 但均为良性 级 发现可疑恶性细胞性质不明细胞细胞形态明显异常 难于肯定其良 恶性 需要近期复查核实未分化或退化的可疑恶性细胞与恶性裸核 级 发现待证实的癌细胞 高度可疑的恶性细胞 具有恶性特征但不够典型 或更典型但数目太少 需要复核 例如高度可疑的未分化或退化癌细胞 或少数低分化癌细胞 级 发现癌细胞 其恶性特征明显或数目较多 可作互相比较以确定为恶性者 例如高分化的鳞癌或腺癌细胞 成群未分化或低分化癌细胞 巴氏结果判断 正常细胞学涂片良性细胞学改变 包括各类微生物感染 炎症 宫内节育器及放疗后的反应性和修复性改变上皮细胞异常 TBS结果判断 ASCUS 不能明确诊断的非典型鳞状上皮细胞ASC US 不能明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞 ASC H 非典型鳞状上皮细胞 不除外高级别鳞状上皮内病变 LSIL 低度鳞状上皮内病变 包括HPV感染的细胞改变或轻度不典型增生 CIN HSIL 高级别鳞状上皮内病变 包括中 重度不典型增生及原位癌 CIN 鳞癌 SCC 包括非角化型鳞状细胞癌 角化型鳞状细胞癌 小细胞型鳞状细胞癌 上皮细胞异常 宫颈癌及癌前病变的组织结构示意图 无临床症状 肿瘤早期检测技术可诊断 治疗费用少 可痊愈 宫颈细胞病理学分类和宫颈上皮变化 宫颈癌发病原因 行为危险因素生物学因素遗传易感性 HowinducesHPVcervicaldysplasiaandcancer Normally onlyparabasalcellsproliferate DysplasticcellsmoveupandreachsurfaceAfter 2 4weeks JanBaaketal 早期诊断的有利条件 宫颈有利的解剖学基础 条件一 条件二 前驱病变阶段长 约10年 易暴露 易观察 易触诊 无创性取材 宫颈癌普查细胞学技术 DNA倍体定量分析原理 DNA倍体定量分析原理 癌细胞癌变过程DNA含量改变在前 形态改变在后 宫颈癌染色体的改变 正常细胞核内有23对染色体 又称为DNA二倍体 2c细胞 有固定数量不变的DNA含量 7 6pg 其DNA指数为1 DNA定量细胞学常用c content 作为单位来衡量DNA含量 正常G0 G1细胞DNA含量的一半为1个c 正常细胞 即DNA二倍体细胞 2C细胞 及肿瘤细胞在生长增殖时 细胞核内DNA结构及含量都会发生变化 正常细胞增殖周期DNA指数的改变在1 2之间 而肿瘤细胞常 2 5 通过对细胞核内DNA含量的测定及特征的分析能了解正常细胞周期变化及发现恶性增殖的肿瘤细胞 正常细胞核内均有23对染色体 DNA指数 DI 为1 癌变细胞核内染色体数量发生异常改变DNA指数 DI 多大于2 5 常规细胞学诊断方法与细胞DNA定量分析方法敏感性和特异性的比较 孙小蓉 李玉兰 车东媛等 JDiagPathol 2005 12 12 6 细胞学筛查制片技术诊断敏感性比较 巴氏染色 显微镜 TBS细胞学诊断 DNA染色 全自动细胞图象分析仪 定量细胞学诊断 特有的宫颈普查诊断程序 不同DNA指数 DI 在宫颈癌普查中的临床意义 综合诊断意见及临床建议 DNA图像分析仪与流式细胞仪的比较 DNA定量技术在宫颈癌普查中的优势 细胞DNA定量分析方法用于 表面刮取标本涂片 例如阴道 宫颈 口腔 肛管 鼻咽部 眼结膜 体表病灶溃面等处 分泌物或排泄物涂片 例如痰液 尿液 前列腺液 肛肠脓血排泄物 肿瘤之漏管分泌物 乳头溢液等 体表 体部和体腔内和液体或肿瘤实体的针吸穿刺检查 例如胸腔 腹腔 四肢 躯干 肺 肝脾 肾等器官 光纤内窥镜直视下的刷片和组织印片 例如食管 胃 支气管 泌尿道 结肠 直肠等 宫颈刷取材注意事项 取材前阴道 宫颈不得使用任何润滑剂妊娠期妇女不宜使用宫颈刷如发现可疑宫颈癌的临床体征 应迅速活检 宫颈细胞学检查与活检同步 月经期不得使用宫颈刷病人在受检前48小时 不得作阴道冲洗及任何阴道治疗病人在受检前48小时 不得使用避孕剂急性宫颈炎及各种阴道炎的急性感染期 经治疗后再作宫颈细胞学检查取材后若发生活动性渗血 应压迫止血人流后月经未来潮前 不做检查 注意 患者刮片前要禁用阴道外用及激素类药物 以防细胞形态的改变 给诊断带来困难 宫颈标本的收集管理 标本管请放置于阴凉处保存 并注明识别标志 姓名 编号等 当室温超过30摄氏度或因故不能及时送检时 请放入冰箱内 4 保存 一般不超过10天请将标本管与申请单放在一起一并交往指定地点取报告时间及方式与有关专业人员联系 取材后的标本保存条件 存放时间 十天内存放温度 或室温 存放方式 标本管直立 临床常见的几个问题 标本不合格 细胞数量不够需重复取材出现DNA异倍体细胞时 活检后病理未发现异常 39 为