发酵岗位标准操作规程.doc

SOP-P-IF-003-03 共3页 第3页 生物工程股份有限公司发酵岗位标准操作规程文件编号共 3页 第 1 页颁发部门制定人制定日期年 月 日审核人审核日期年 月 日批准人批准日期年 月 日生效日期年 月 日分发部门1.目的 建立GM-CSF工程菌发酵岗位标准操作规程。2.范围实用与GM-CSF工程菌从二级种子培养液上罐、发酵、离心收菌的操作。3.职责发酵岗位操作人员、车间负责人及QA生产区检查员对本规程实施负责。4.规程4.1.生产前的准备：4.4.1.根据生产指令开出领料单。领取时，核对物料名称、数量、批号、有效期等，然后将其送到传递窗。 4.1.2.岗位生产操作人员按进出十万级洁净区更衣标准操作规程进行更衣，然后进入岗位。4.1.3.岗位生产操作人员检查设备、设施完好性，设备、容器、工具、室内卫生是否有清洁合格证，清洁合格证是否在有效期内，如不合格按其清洁标准操作规程重新清洁。4.2操作方法4.2.1培养基配制 LB培养基按比例配制（100L） 蛋白胨 16g/L 酵母粉 10g/L 氯化钠 5g/L4.2.3 实罐灭菌4.2.3.1 按BI0SATA-D型发酵罐标准操作规程将配制好的培养基加入到发酵罐中,加入5ml消泡剂,121、30min灭菌。 设定搅拌速度为150rpm左右，保证培养基加热均匀。 4.2.3.2灭菌时当温度升至 121时，打开DO电极电源，设定DO电极零点。当灭菌温度降至30时，设定DO电极百点。4.3上罐4.3.1 调节通气量到15L/min，搅拌速度为150rpm，稳定3分钟后设定DO电极 100%。4.3.2 调节通气量，使罐内保持正压。4.3.3 通过接种管道从种子管向发酵罐中打入二级种子液，整个过程注意无菌操作。4.3.4 取样测OD600值。4.4培养4.4.1 上罐后，设定通气量为10L/min、搅拌速度为150rpm、温度为30，开始 培养。4.4.2 培养过程中，注意DO值和pH值的变化，调节通气量和搅拌速度使DO值为40%。4.4.3 每隔1小时取样测量OD600值。取样前后取样管用纯蒸汽流通灭菌10分钟。 做好生产记录。4.4.4 生产过程中，注意及时用蘸有0.1%新洁尔灭溶液的抹布擦去洒落在不锈钢 罐体表面及地面的液体,维持发酵罐清洁和生产车间的整洁。4.4.5 诱导4.4.5.1培养8-10小时后，OD600为2左右时，将温度在3分钟内升高至42，继续培养4小时。4.4.5.2 培养过程中，注意DO值和pH值的变化，调节通气量和搅拌速度使DO值为35%。4.4.6 收菌4.4.6.1 诱导培养4小时后，OD600值为5-6，取1ml菌液检测。4.4.6.2 降低搅拌速度为120rpm、通气量为10L/min。4.4.6.3 连接发酵罐和离心机之间的软管。4.4.6.4 按Z61型管式离心机标准操作规程安装离心机，确认安装正确后，试启动离心机，确认无异常声音。4.4.6.5 待转速达到恒定后，打开发酵罐下料阀，发酵液在压力的推动下进入离心机，离心收菌。4.4.6.6 调节下料阀，控制发酵液的流出速度，使上清液的OD6000.1。4.4.6.7 收菌完毕后，上清液重新泵入发酵罐中，经过121灭菌30分钟后排放。4.4.6.8 菌体离心后装入灭菌后的不锈刚容器内称重，-20冻存。4.5.清场：4.5.1.每次操作完成后，按照清场标准操作规程和发酵罐清洁标准操作规程进行清场、清洁。 4.5.2.清场结束后填写清场及清洁记录,并由QA检查员检查确认清场合格后,贴挂清洁合格标志。4.6物料平衡的计算按物料平衡管理规程计算。4.7注意事项4.7.1发酵罐长期不用时，应卸下电极，将pH、DO电极放入电极液中进行保养。 同时对罐体进行彻底的清洗，加入约30升去离子水，灭菌一次，将水放掉。4.7.2发酵罐更换菌种发酵时，应对罐体进行彻底的清洗，加入约30升去离子水， 灭菌一次，将水放掉。进行新菌种发酵。4