高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定.doc

编 号JHZJY/BP(SL)-02-2009金华市质量技术监督检测院页码第1页共6 页类 别不确定度评定报告编制版本及修订次数第G版第0次修订高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定审核指 导 场 所食品理化检测中心批准适 用 岗 位食品理化检测岗位批准日期 年 月 日作 业 指 导 书 内 容近年来, 脱氢乙酸被广泛的用做食品中的防腐剂, 其特别对霉菌和酵母的抑菌能力强, 为苯酸钠的210倍。目前测定饮料中脱氢乙酸的方法为: GB/T23377- 2009食品中脱氢乙酸检测高效液相色谱法。该方法操作简便, 测定结果准确。不确定度是检测技术的重要概念, 也是保证检测结果质量的关键要素。随着经济发展全球化, 不确定度是国际检测实验室之间互认和通用准则接轨的基础。本报告对使用高效液相色谱法测定果汁饮料中脱氢乙酸的结果进行了不确定度评估, 并对影响不确定度评估因素进行了逐项分析。一、实验部分(一)仪器1.测试仪器:Agilent 1200series2.色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(二)测试过程采用GB /T 23377- 2009食品中脱氢乙酸的测定高效液相色谱法测定饮料中的脱氢乙酸含量。样品的处理与测定: 精密称取3 g试样, 置于50 ml量瓶中, 加入10 ml水, 加入2%的氢氧化钠溶液调pH 值至7 8,加水稀释至刻度, 摇匀。再精密量取20 ml至25 ml量瓶中, 加10%甲酸溶液调pH 值至4 6, 加水稀释至刻度, 摇匀。取5 ml过已经活化的固相萃取柱, 用5 ml水淋洗, 再用70%的甲醇溶液洗脱, 收集洗脱液约8 ml至10 ml量瓶, 并用70%的甲醇溶液定容, 摇匀即得。对照品贮备液配制: 精密称取对照品92.78 mg, 置于100ml容量瓶中, 用10 ml 2% 的氢氧化钠溶液溶解, 加水稀释至刻度, 摇匀即得。线性标准溶液的配制: 精密量取对照品贮备液5 ml、5 ml分别置于( DZ1) 50 ml、( DZ2) 100 ml量瓶中, 用水稀释至刻度, 再从DZ2 中精密量取5 ml、5 ml、1 m l分别置于10 ml、50 ml、100 ml量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀即得。二、不确定度评定过程(一)数学模型式中: X为样品中脱氢乙酸的含量（g /kg），Cs为样品供试溶液中脱氢乙酸的浓度（ g /ml）；m为样品取样量（g）; V50、V25、V20为分别为样品稀释所用量瓶和单标线吸管体积50 ml、25 ml、20 ml。 数学模型中各项的值列在表1中：编 号JHZJY/BP(SL)-02-2009金华市质量技术监督检测院页码第2页共7 页类 别不确定度评定报告编制版本及修订次数第G版第0次修订高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定审核指 导 场 所食品理化检测中心批准适 用 岗 位食品理化检测岗位批准日期作 业 指 导 书 内 容用HPLC法测定上述五种线性标准溶液中脱氢乙酸的峰面积，每个浓度测定2次，结果见表2。(二)不确定度分量的主要来源由测试过程以及数学模型可知，样品中脱氢乙酸测量结果不确定度来源主要有以下几个方面：（1）Cs引入的不确定度。（2）20ml单标线吸管引入的不确定度。（3）25ml量瓶引入的不确定度。（4）50ml量瓶引入的不确定度。（5）样品取样量m引入的不确定度。(6)其他不确定度来源。(三)不确定度分量的评定1. Cs的不确定度Cs的不确定度由两个部分构成, 一是由标准曲线求得Cs时产生的不确定度；二是由对照品配制成五种质量浓度标准溶液时产生的不确定度。 由标准曲线求得Cs时产生的不确定度对表2中的数据进行线性拟合得直线方程:：C-标准溶液的质量浓度；A-标准溶液的峰面积对Cs进行2次HPLC测量，由峰面积通过直线方程求得Cs= 3.048 g /m l，则Cs的标准不确定度为：编 号JHZJY/BP(SL)-02-2009金华市质量技术监督检测院页码第3页共7 页类 别不确定度评定报告编制版本及修订次数第G版第0次修订高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定审核指 导 场 所食品理化检测中心批准适 用 岗 位食品理化检测岗位批准日期作 业 指 导 书 内 容将上述各值代入Cs的标准不确定度公式中得出:由对照品配制成标准溶液时所产生的对Cs的测量带来的不确定度Urel2Cs由标准溶液浓度可计算为：C-标准溶液浓度；Ms-称取对照品的质量；f-对照样品稀释倍数；p-对照品纯度故：a)纯度p的标准不确定度供应商证书上给出脱氢乙酸对照品纯度为99. 50. 5%。因此p是0. 9950. 005, 假设为均匀分布, 则相对标准不确定度：b) 对照品质量M s的标准不确定度称量系减重法完成, M s= 92. 78 mg。称量不确定度来自两个方面(不考虑浮力修正)：1)为天平称量误差：电子天平在d =0.1 mg档, 检定证书给出在95%置信概率时天平示值误差为0.1 m g, 换算成标准偏差为：2) 重复性: 通过反复称量得到重复性标准偏差为0.02 m g。所以: u2 (M s) = 0.02 mg由于是减重法2次称量, 以上2项合成得：相对标准不确定度:编 号JHZJY/BP(SL)-02-2009金华市质量技术监督检测院页码第4页共7 页类 别不确定度评定报告编制版本及修订次数第G版第0次修订高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定审核指 导 场 所食品理化检测中心批准适 用 岗 位食品理化检测岗位批准日期作 业 指 导 书 内 容c) 稀释倍数f的相对标准不确定度线性标准溶液稀释过程使用的玻璃量器计有: 5 ml、1 ml单标线吸管(分别使用4次、1次) , 10 ml、50 ml、100 ml容量瓶(分别使用1次、2次、3次)1) 5 ml单标线吸管引起的标准不确定度u(V5)经检定5 ml单标线吸管为A级, 容量允差为0. 02ml，按均匀分布：重复性：根据实验数据统计得到不确定度为：温度变化：实验中, 控制温度变化为3 , 水的体积膨胀系数为2.110- 4/,按均匀分布评定，体积变化的不确定度为：合成得：2) 1 ml单标线吸管的不确定度u(V1)1 ml刻度移液管为A级, 容量允差为0. 007 ml，按均匀分布,重复性: 根据实验数据统计得到不确定度为:u2 (V1) = 0. 0011 ml温度变化：同上按均匀分布评定为：合成得：3) 10 ml容量瓶的标准不确定度u( V10 )10 ml容量瓶为A级，容量允差为0. 020 ml，按均匀分布：重复性：根据实验数据统计得到不确定度为：温度变化：同法按均匀分布评定, 体积变化的不确定度为：合成得到体积V10的标准不确定度为编 号JHZJY/BP(SL)-02-2009金华市质量技术监督检测院页码第5页共7 页类 别不确定度评定报告编制版本及修订次数第G版第0次修订高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定审核指 导 场 所食品理化检测中心批准适 用 岗 位食品理化检测岗位批准日期2009年03月12日作 业 指 导 书 内 容4) 100 ml容量瓶的标准不确定度u(V100)经检定100 ml容量瓶为A级, 容量允差为0.10 ml，按均匀分布：重复性：根据实验数据统计得到不确定度为：u2 ( V100 ) = 0. 022 ml温度变化：同法按均匀分布评定，体积变化的不确定度为：合成得到体积V100的标准不确定度为:5) 50 ml容量瓶的标准不确定度u(V50)经检定50 ml容量瓶为A级, 容量允差为0.05 ml，按均匀分布：重复性：根据实验数据统计得到不确定度为：u2 ( V50 ) = 0. 012 ml温度变化：同法按均匀分布评定，体积变化的不确定度为：合成得到体积V50的标准不确定度为:6)稀释倍数f的相对标准不确定度将1) 5)各项合成, 得到稀释倍数f的相对标准不确定度:将各值代入, 合成得到Urel2(Cs)：编 号JHZJY/BP(SL)-02-2009金华市质量技术监督检测院页码第6页共7 页类 别不确定度评定报告编制版本及修订次数第G版第0次修订高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定审核指 导 场 所食品理化检测中心批准适 用 岗 位食品理化检测岗位批准日期2009年03月12日作 业 指 导 书 内 容由于Cs= 3.048g /ml所以u(Cs) = 3.048 0.062= 0.086g /ml2. 20 m l单标线吸管的不确定度u( V20 )经检定20 ml单标线吸管为A级，容量允差为0.03 ml，按均匀分布：重复性：根据实验数据统计得到不确定度为: u2( V20 ) = 0. 022 ml温度变化：同上按均匀分布评定, 体积变化的不确定度为：合成得到体积V20的标准不确定度为：3. 25 m l量瓶的不确定度u(V25)经检定25 ml量瓶为A级，容量允差为0.03 ml，按均匀分布：重复性：根据实验数据统计得到不确定度为: u2( V25) = 0. 012 ml温度变化：同上按均匀分布评定, 体积变化的不确定度为：合成得到体积V25的标准不确定度为：450 m l量瓶的不确定度u(V50)上文已评估u(V50) = 0. 040 mlUrel(V50) = 0. 00085 样品取样量m 的不确定度称量是由减重法得到的, m = 3.1001 g,电子天平在d= 0. 1 mg 档, 检定证书给出在95%置信概率时天平示值误差为0.5 m g, 换算成标准偏差为:u1 ( m ) = 0. 5 /1. 96= 0. 26 m g= 0. 00026 g检定证书给出天平重复性标准偏差为0. 4 mg= 0. 0004 g由于是减重法2次称量, 以上2项合成得:编 号JHZJY/BP(SL)-03-2009金华市质量技术监督检测院页码第7页共7 页类 别不确定度评定报告编制版本及修订次数第G版第0次修订高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸不确定度评定审核指 导 场 所食品理化检测中心批准适 用 岗 位食品理化检测岗位批准日期作 业 指 导 书 内 容（四）合成标准不确定度观察表(1) 发现, 与Urel (Cs)相比, 其他因素引入的不确定度均可忽略不计, 故得, 脱氢乙酸含量的相对合成标准不确定为:Urel (X) = Urel (Cs) = 0. 062根据数学模型和所得峰面积计算脱氢乙酸的测量结果为123.03 mg/kg, 则脱氢乙酸含量的合成标准不确定度为:以上是基于一份样品的测定结果而言。由于我们采用了双样平行测定, 采用了相近的取样量, 相同的稀释和计算方法, 因此可以估计另一份样品的合成标准不确