植物化学保护实验指导.doc

植物化学保护实验指导实验一 农药制剂的配制及其质量鉴定目的要求学习农药几种常用制剂的加工方法、质量要求与有关使用的物理性状。一、西维因(或多菌灵)可湿性粉剂及粉剂1实验用具 粗天平、研钵(或球磨机)、铜筛(40、60、80、200号筛目)、铜(或钢)圈内径20mm(标准应为50mm)、宽6mm、边厚2mm，量筒、水浴锅、80目金属筛、平口刀、秒表。2材料原药 西维因(或多菌灵)原粉填充料 酸性陶土湿润剂 茶籽粉或纸浆废液的固化物粉末、洗衣粉(十二烷基苯磺酸钠)、3加工方法 1)配合量 25西维因(或多菌灵)可湿性粉剂。西维因(或多菌灵)原药(以其中有效成分含量计算)25茶籽粉(或纸浆废液的固化物粉)l0洗衣粉1酸性陶土加至1005西维因(或多菌灵)粉剂西维因(或多菌灵)原药(以其中有效成分含量计算)5酸性陶土加至1002)操作 把已烘干的陶土、原粉和茶籽粉(或纸浆废液的固化物粉)分别在研钵(或球磨机)中粉碎，通过200目筛，按上述配合量比例称重，再放入研钵(或球磨机)中充分混和即成可湿性粉剂。而按上述操作并按粉剂配比称重而少加茶籽粉或纸浆废液的固化物粉和洗衣粉的则为粉剂。4粉剂、可湿性粉剂和原粉的湿润性能的鉴定1)沉降速度的比较 在四支l00ml圆口径的量筒中各注入70ml清水，分别用角匙取少量经粉碎过筛的西维因(或多菌灵)原粉、自己加工配制的西维因(或多菌灵)粉剂和可湿性粉剂以及由工厂生产的西维因(或多菌灵)可湿性粉剂于相同时间分别投进各支量筒的水面上，观察被湿润及分散快慢情况，解释所出现现象的原因？2)湿润性能的测定(铜圈法) 取圆形滤纸(直径11cm)一张，对折为四，剪出直径为4cm的圆滤纸四张。取圆形滤纸一张置于玻璃板上，放上铜圈后，使药粉通过100目筛网均匀降落于铜圈内，填满铜圈。用一平口刮刀将高出铜圈的粉刮去至成平面，并用毛笔把铜圈外围的粉末扫净，轻轻取出铜圈，在小滤纸上就留下一块扁圆形的粉饼。另外预先准备好一只水浴锅，把水温调至25。放上一个40目筛网在水浴锅的水面上，使筛孔内充满水，而筛网的筛线刚露出水面为宜。用小刀小心地把载有扁圆形粉饼的滤纸铲起，移置到水浴上的筛网上。当滤纸被水湿润时开始计算时间，直到粉饼表面全部湿润为止。记录所需时间(分钟)，如此重复三次所得平均时间即代表可湿性粉剂的湿润性能。有时粉剂将到湿润终点时，粉饼表面有极个别粉粒针眼大小的粉团未被湿润，可不等待其湿润而算为终点。要求每组学生用粉饼湿润速度(铜圈法)，对自己加工的粉剂、可湿性粉剂与工厂生产的同类产品(可湿性粉剂)进行测定比较。二、辛硫磷颗粒剂1实验用具 铁锅(可用瓦锅代替)、铜筛(40和60号筛目)。2材料 85辛硫磷原油、砂粒或煤矸石3加工方法1)吸附法 经晒干(或烘干)的煤矸石，用40及60号筛目过筛，称取50g通过40号筛目而不通过60号筛目的煤矸石盛于铁锅上锻烧，当温度达到250(400更好)时，停止加热，冷却至室温，吸取3ml丙酮及2.95ml辛硫磷原油盛于手提喷雾器壶中。摇匀后，直接喷到煤矸石粒(载体)上，边喷边轻轻搅动载体，把药液喷完后，用数毫升丙酮冲洗喷雾器壶，再把它喷布于载体上。让溶剂自然挥发，即成5辛硫磷颗粒剂。2)包衣法 将75呋喃丹原粉、聚乙烯醇(用少量热水溶解)、砂粒(1830号筛目)，按4：0.1：95.9比例称重。把原料装入搅拌机上搅拌均匀约20分钟，后加温烘干即成3呋喃丹颗粒剂。由于呋喃丹毒性大，实验可用辛硫磷或乐果原粉等代替。4质量鉴定1)有效成分含量测定 采用化学分析及生物测定等方法测定有效成分含量和生物活性。2)粒形的观察 用双目放大镜观察3050粒(随机抽取)颗粒的形状，药粉在颗粒上是否均匀?三、乳油的配制1配方原料 配合比() 实验用量(g)叶蝉散原药(98) 20 2.04二甲基甲酰胺 10 1.0甲苯 60 5.96乳化剂(0204) 10 1.02配制方法 按实验用药量称取二甲基甲酰胺并加入于原药中，再加入甲苯，微加热使其溶解，然后加乳化剂。充分搅拌即成乳油。3质量鉴定1)乳油分散情况的观察 将装有500m!标准硬水(342ppm)的大烧杯置于25的恒温水浴中，待温度平衡后，用移液管吸取乳油lml，离液面lcm处自由滴下，观察分散性。如乳油滴入水中，能迅速地自动分散成乳白色透明溶液，则为扩散完全；如呈白色微小油滴下沉，或大粒油珠迅速下沉，搅动后虽呈乳浊液，但很快又析出油状物并沉淀，则扩散不完全。2)乳油稳定性情况的观察 在250ml烧杯中，加入l00ml342mgL浓度的标准硬水(2530)、用刻度吸管吸取0.2ml乳油试样，在不断搅拌的情况下，缓慢的加入硬水中，加完乳油后，继续用23rpm的速度搅拌30秒，立即将乳剂转入一清洁干燥的l00ml量筒中，在25水浴中静置1小时，如无乳油沉淀，则认为此乳油稳定性合格。附：标准硬水的配制 称取无水氯化钙0.304g和具结晶水的氯化镁0.139g用蒸馏水稀释至1000ml。四、敌敌畏插管烟剂的配制烟雾剂是利用化学或机械能力将固体或液体药剂分散成极细的烟粒或液滴，较长久地悬浮于空气中，可达到一般喷雾和喷粉所不能达到的空隙，可经昆虫的气管通道而进入体内，也有胃毒和触杀作用。1实验用具 研钵、粗天平、80号筛目、热电偶、玻管、移液管。2药品 敌敌畏原油、硝酸铵、氯酸钾、木炭粉、硝酸钾、氯化铵、香胶粉、无水乙醇、氢氧化钠、盐酸。3配方 见表11。4加工方法 敌敌畏插管烟雾剂由供热剂(氧化剂和燃料)和主剂(药剂的有效成分)组成。供热剂的燃料先经干燥后和氧化剂的化学药品分别研磨成粉，分别通过80目筛，根据表11原料配比称重加于研钵中充分混和均匀而成，主剂敌敌畏原油另装入一小指头瓶(或聚乙烯薄膜管)内，随配随用不封口，将装药瓶插入装供热剂的发烟罐(或杯)中，以顶端露出供热剂12cm。另把引蕊也插入供热剂中间，最后在发烟罐(或杯)表面加上适量砂粒，防止供热剂的直接着火。表11 敌敌畏插管烟剂性能 原料 配比（） 实验用量主剂 敌敌畏 1.5ml氧化剂 硝酸铵 36 7.2g氧化剂 氯酸钾 10 2.0g氧化剂 氯化铵 34 4.0g燃料 木炭粉 20 6.8g消燃剂 砂粒 适量附：烟剂引蕊的制法 药粉引蕊是按氯酸钾1份、硝酸钾2份、木炭粉3份、香胶粉4份的比例称量混合均匀。加适量水充分混和揉成条状，晾干即成。烟剂引蕊是易燃物，勿近火，应放在干燥地方贮存。5质量鉴定 在敌敌畏插管烟雾剂中，供热剂的燃烧时间和温度的变化都会直接影响主剂的挥发和成烟率。1)燃烧时间与最高温度的测定 在供热剂中间插上热电偶(热电偶顶端插至供热剂二分之一的深度为宜)，点燃引蕊后，计算当供热剂开始燃烧时至燃烧结束的时间及温度升降变化。2)从残渣中敌敌畏含量测定成烟率 取供热剂20g，插入装有1.5ml敌敌畏原油的玻管(或聚乙烯塑料管)1支，燃烧前、后分别称重。将燃烧后玻管用20ml无水乙醇多次冲洗残渣于三角瓶中，密封浸提2小时，用滤纸过滤。吸取滤液5ml，加10ml预冷至0的蒸馏水，加0.1甲基红指示剂12滴。用0.05氢氧化钠滴至橙色。继续在冰浴中降温至01。再用移液管加预冷至01的1N氢氧化钠溶液2ml。在01分解20分钟以上，即用0.2N盐酸标准溶液滴定到橙色，同时取1N氢氧化钠2ml进行空白试验。敌敌畏含量(1)的计算公式式中 X2指敌敌畏含量()；N2回滴1N氢氧化钠用的盐酸当量浓度(N)；V2回滴IN氢氧化钠用去盐酸溶液的体积(m1)；V3空白测定中用去盐酸溶液体积(m1)；G残渣中的重量(g)；0.221敌敌畏毫克当量；X3敌敌畏原油中敌百虫含量()；0.3敌百虫折算成敌敌畏的系数。残渣重（g）残渣率()100样本重（g）残渣中敌敌畏含量（g）残渣中敌敌畏含量（）100样本中敌敌畏含量（g）样本中敌敌畏含量（g）残渣中敌敌畏含量（g）成烟率（）100样本中敌敌畏含量（g）注：以上公式中样本是插管中的敌敌畏习作1农药为什么要进行制剂加工?2扼要总结各项实验所观察的结果?比较各种制剂在使用上的优缺点?实验二 石硫合剂的煮制目的要求掌握煮制优质石硫合剂的方法，了解其原料质量，煮制火力对石硫合剂母液浓度的影响，煮制时火力的控制、反应终点的确定以及母液浓度的量度和稀释方法。实验用具瓦锅1个、漏斗1个、玻棒2支、硫磺粉、量筒(200m1)1支、生石灰、粗天平1架、纱布1块、波美比重计1支、滤纸2张。石硫合剂原料配量原 料 配 方 配 方 硫磺粉 1 1.31.4生石灰 1 1水 10 13本次实验总量为300ml。煮制方法煮制石硫合剂必须用瓦锅或生铁锅，不能用铜锅或铝锅，否则易腐蚀损坏。称取块状、质轻而洁白的生石灰放在锅中，滴数滴水使块状生石灰消解成粉状，再加入少量水搅成糊状，最后把全部水量加入配成石灰乳液，记下水位线，加热煮沸，往沸腾的石灰乳液中徐徐地加入硫磺粉，边加边搅拌，使硫磺粉全部湿着(不浮面)。开始计算时间，整个反应时间为40一50分钟。熬煮过程必须保持沸腾，损失的水分应加热水补充。并应在反应终止前15分钟补足完毕。到反应终止时，即离火静置片刻，滤去残渣。滤液为深棕色的透明溶液。此成品即为石硫合剂母液。把母液倒入50ml或lOOml量筒中，用波美比重计量度母液浓度(波美比重度数)。石硫合剂母液可盛装在密闭的容器中(如窄口玻璃瓶或小口的瓦罐)贮存备用。如保存时间较长，可在液面滴少许煤油，以避免氧化。另用两个反应锅，用与上述相同的煮制方法比较劣质原料和煮制火力不足对石硫合剂母液浓度的影响。习作1上述实验各反应锅煮制的石硫合剂母液是多少波美度?假如生产上使用0.4Be(波美度)的石硫合剂25公斤，要用母液(实验最优的一种)多少?加多少水稀释?2为什么量度石灰硫磺合剂母液浓度要用波美比重计、而不用普通比重计?实验三 波尔多液的配制目的要求通过实验掌握波尔多液配制的方法，了解原料质量和不同配制方法与波尔多液质量的关系，从而深入了解波尔多液的性质及其防病特点。实验用具(每小组一套)量筒：50ml 2支、100ml 5支、200m11支；烧杯：25ml2个、100ml 2个、300mi 3个；粗天平1台；酒精灯及铁支架1套。实验材料化学纯硫酸铜及带杂质的粗硫酸铜；化学纯氢氧化钙；建筑用陈旧石灰粉。实验内容1波尔多液的性质 波尔多液是由硫酸铜溶液和石灰乳液配制而成的一种天蓝色水凝胶液，其胶粒扁平呈膜状，具有很强的粘着力，不易被雨水冲刷，是粘着力特别好的保护性杀菌剂。波尔多液胶粒的观察方法：先制备母液I(化学纯2硫酸铜溶液)和母液(2石灰乳液，用化学纯Ca(OH)2)各300ml。取一大烧杯盛清水约半杯，另取两个小烧杯分别取母液I和母液各20ml，将母液I和母液同时注入盛有清水的大烧杯中，不要搅拌，注入时必须使两种母液在到达大杯清水之前相碰。两种母液在相碰时即行反应，生成波尔多液。清水是把波尔多液分散，以利观察。此时把大烧杯对着光，即可看到清水中悬浮着浅蓝色棉絮状和片状的胶状物，此为被水分散了的波尔多液。2波尔多液的稳定性与配制方法、原料质量的关系 采用上项制备的母液I和母液，按表3一1配成的波尔多液，分别盛于6支量筒，静置勿受任何扰动，30分钟后(从每支记录时间算起)比较沉淀刻度的差异。配成的波尔多液悬浮性越好，则其性质越好、越稳定、沉淀的刻度就越少。并细心观察各种不同方法配制的波尔多液颜色有无差别?不同原料质量配制的波尔多液有哪些主要差别?表31方法 硫酸铜液（母液I，毫升） 石灰乳（母液，毫升） 配制方法1 50 50 用两个烧杯分别盛母液I和各50毫升，将母液I慢慢注入母液I中，边倒边搅拌，即成天蓝色波尔多液，配好后倒入第1支100毫升量筒中，并记录时间。2 50 50 用两个烧杯分别盛母液I和I各50毫升。与1法相反，将摇匀的母液I注入母液I中，边倒边搅拌，配好后倒入第二支100毫升量筒中，并记录时间。3 50 50 用两个烧杯分别盛母液I和I各50毫升，将两个母液同时注入第三个烧杯中，边注边搅拌，配好后倒入第三支100毫升量筒中，并记录时间。4 50 50 用两个烧杯分别盛母液I和各50毫升，先将母液I加热至70一80，趁热注入母液中，边注边搅拌。配好后倒入第四支100毫升量筒中，并记录时间。5 另称取l克化化学纯硫酸铜，溶于90毫升水。 另称取l克化学纯Ca(OH)21.3克，配成10毫升石灰乳液中。 将配好的90毫升硫酸铜溶液倒入10毫升石灰乳液中，边注边搅拌。配好后倒入第五支100毫升量筒中，并记录时间。6 另称取1克劣贡硫酸铜，溶于 另称取建筑用的陈旧石灰粉毫升石灰乳液。 配制方法与5项相同。配好的波尔多液倒入第六个100毫升量筒中，并记录时间。习作 1通过实验，你认为衡量优质波尔多液的两个指标是什尔多液时为什么一定要把硫酸铜液倒进石灰乳液中?实验四 植物质农药的鉴别目的要求通过本实验要求初步鉴别我国几种较高效杀虫植物的形态、有效成分、杀虫作用及其经济价值。实验用具绘图纸、绘图笔、尺、记录本。内容一、鱼 藤鱼藤一豆科、藤本，原产于热带和亚熟带。根部富含杀虫有效成分鱼藤酮及拟鱼藤酮。易于种植，为重要的植物质杀虫种类。1蔓生鱼藤(Derris elliptica Benth) 蔓茎匍匐性密覆地面，易生不定根，小叶711片，端小叶椭圆形至钝倒卵形，先端极钝，叶背密披茸毛，浅根性。2半蔓生毛鱼藤(Derris elliptica Var) 嫩茎半直立不密覆地面，少不定根，小叶713片，个别有15片，端叶型狭，长椭圆形至倒卵形，先端较蔓生型尖，毛茸较粗而明显，半深根性。例如广东丰顺种、广西柳州种和台湾半蔓生种。3马来亚直生鱼藤(Derris elliptica Prain) 茎直立呈灌木状，节间较密，幼茎先端及嫩叶被毛茸外，老茎和叶毛茸极少，小叶一般57片，表面光滑，叶背无蜡粉，叶端尖，一般根系较深。例如马来亚直生种、揭西直生种等。根部含鱼藤酮等有效杀虫成分比较少。二、其它九种主要植物杀虫剂的鉴别1厚果鸡血藤(Millettia pachycarpa Benth) 豆科。属攀悬灌木，高约23m，小叶911片，叶面光滑，比鱼藤叶大，杀虫有效成分鱼藤酮主要在种子中。2雷公藤(Trypterygium witfordii Hook) 卫茅科。属藤本，生于山坡，堤岸旁，枝条有角，呈棱形。叶边有齿牙，花黄白色，总状花序。根皮含有效成分雷公藤生物碱。3黄杜鹃(Rhododendron molle Gioon) 杜鹃花科。落叶灌木，高约15m，嫩小枝褐色。叶互生单叶，托叶不全，总状花序，顶生。花冠金黄，有绿斑。杀虫有效成分主要在花中。4巴豆(Croton tiglium L) 大戟科。常绿乔木，高达10m，叶互生顶端长尖，边缘有锯齿状。种子长方形浅黄色。杀虫有效成分主要在种子中。5羊角扭(Strophanthus divaricatus) 夹竹桃科。灌木，树身咖啡色，有明显的白色皮孔。叶椭圆形，花黄白色，长筒漏斗状。全株有乳白色树浆，里面含有毒毛旋花子甘(Strophanthilin)。6黄花烟草(Nicotin rustica) 茄科。一年生草本。杀虫有效成分主要是烟碱，叶含量较多，茎也有一定含量。广东省饶平县栽培的黄花烟草含烟碱达4左右。7苦楝(Melia azedarach) 楝科。落叶乔木，叶片宽大，羽状复叶，小叶椭圆形。果实淡黄色，果实中含有苦楝酮，苦楝二醇等多种四环三萜类物质。树皮和根皮含川楝索，具拒食和影响昆虫生长作用。8川楝(Melia toosendan) 楝科。特征与苦楝相似；但叶子及果实比苦楝为大，川楝果中含川楝素(toosendanin)可以防治人体蛔虫。川楝素是一种萜类化合物。对多种害虫有胃毒、拒食、忌避及影响昆虫生长发育等作用。9苦皮藤(Celastrus angulatus Maxim) 卫茅科。属攀缘灌木，生长在阴湿山丘里，杀虫有效成分主要在根皮。茎叶花果中含杀虫成分较少，主含生物碱，还含有皂素、酯类、卫茅醇、内酯，最近还从根皮粉中分离出倍半萜碱和倍半萜酯，对多种害虫具拒食、忌避和影响昆虫生长发育作用。习作1区别三类鱼藤的地上部形态，并绘出每类鱼藤的小叶图。2描述川楝与苦楝外部形态之差别(茎叶和果)。3苦皮藤与雷公藤外部形态有何差别?实验五 杀虫剂胃毒毒力LD50的测定(叶片夹毒法)目的要求采用胃毒剂夹毒法来测定胃毒剂致死中量(LD50)值，以便了解某种药剂是否具有从口腔进入并经中肠吸收后到达靶子器官的毒性程度。实验用具口径7cm的培养皿22个，口径2cm的钻孔器，扭力天平或快速天平，微量进样器(玻璃毛细管)。实验材料95乙酰甲胺磷、2.5溴氰菊酯、丙酮、5明胶液；斜纹夜蛾、菜青虫、粘虫或棉铃虫；选择试虫喜欢吃食的叶片。试验方法从田间采回或人工饲养的健康幼虫，停止取食56小时后才进行试验，有利于昆虫取食。以厚薄均匀而平滑的植物叶片如菜青虫用甘蓝叶片、棉铃虫用棉叶片、斜纹夜蛾用木茨叶、粘虫用玉米叶等。用钻孔器打孔，制成圆叶片共50一60片，把圆叶片放在培养皿中并保湿。夹毒片的制备用微量进样器(或定量的毛细管)吸取10l已知含量的杀虫剂丙酮液，均匀涂布在圆叶片上，自然晾干，通过叶片受药量及叶片面积，可计算出每cm2叶片的药量（单位：mgcm2），另取一片无药的圆叶片涂上明胶与已涂有药的圆叶片那一面对合，即成夹毒叶片。每个培养皿放入一片夹毒片，用湿棉花团置于皿中保湿，每只培养皿放进1头已称好重量的幼虫，让其取食。另外用10l的丙酮液代替药液，制成不夹毒的叶片(方法与上同)作对照。所有培养皿按顺序编号，记上虫的体重。结果观察及计算观察昆虫咀食情况，要控制食叶量的多少，一部分幼虫让其吃食叶片的13，一部分吃食12，而一部分可吃食叶片的大部分或全部，然后取出剩余的夹毒叶片，并记录吃去夹毒片时间和用放大镜或肉眼计算食去多少小方格(圆形小方格纸上的每小方格等于1mm2)，根据每片叶片涂药量，就可以求其所食药量，从而求出每头虫吃食的药量(gg)。经24小时后检查昆虫生存和死亡状况(按表51填写)。根据每头幼虫所食药量的多少，由少至多按次序排列，并说明它们生存或死亡反应。根据幼虫生死反应进行分组，可分生存、中间和死亡组(见表52)。生存组和死亡组只作划分中间组的界限，即中间组中既有生存的，也有死亡的部分，在计算LD50值时，把中间组的生存部分的每个药量乘以它的生存总数，其总和除以生存总头数作为A，同样把死亡部分的每个药量乘以它酌死亡总数，其总和除以死亡总头数作为B。根据表的中间组计算习作1将实验结果整理，求LD50并作分析。2LD50值在农药研究和生产上有什么指导作用?实验六 杀虫剂触杀毒力测定(点滴法)目前使用的杀虫剂大多数都具有较强的触杀作用，所以杀虫剂的触杀毒力测定显得特别重要。触杀毒力测定有药膜法、点滴法、喷雾法、喷粉法和浸液法等。室内比较精确的触杀毒力测定方法是点滴法和药膜法。本实验采用点滴法(topical application)。是将一定量农药丙酮液点滴在虫体的一定部位上，药剂可能自体壁进入体内。目的要求通过本实验可以学习到一种比较准确的杀虫剂触杀毒力测定方法，并进行有关毒力数据整理及其可靠性检验。实验用具容量瓶(10、25、50及100m1)、微量点滴器或毛细管微量点滴器、吸管、培养皿、烧杯、滤纸、平头镊子、计算纸。实验材料乙酰甲胺磷，辛硫磷，丙酮，可选用室内人工饲养的粘虫(Mythimna separta Walker)、玉米螟(Ostriniafurnacalis G)、棉铃虫(Heliothis armigera Hiibner)或直接采自田间的菜青虫等4龄幼虫，荔枝椿象成虫(Tessaratoma papillosa Drury)也可根据不同地区或不同季节任选一种试虫。测定方法(选用玉米螟为实验材料)1)预备试验 先用丙酮将乙酰甲胺磷配制成若干个不同浓度，选取4龄玉米螟幼虫若干，每个浓度用点滴器(或微量进样器)点滴药液于幼虫的胸部背面，每头虫点滴ll，每浓度点滴虫数不少于30头，待药液干后，把58头盛于一皿中，加入少量饲料，盖好培养皿，写好标记，经24小时后检查试虫的生存及死亡头数，计算其死亡率。从这些浓度中找出适合的浓度，即找出其死亡率在20一90之间的57个不同剂量的等比浓度供下一步试验用。2)根据上步预备试验结果，如本实验可用乙酰甲胺磷有如下浓度：500、1000、2000、4000、8000、12000和16000ppm。可设7组，每组选择4龄玉米螟幼虫210头，分别放入垫有滤纸的培养皿中(滤纸预先加湿)，每皿放10头，每种浓度设3个重复。3)用微量点滴器盛装药液，从低浓度到高浓度点滴，每虫点滴l1于幼虫胸部背板处，待药液挥发后，添加适量人工饲料于皿中。对照虫仅点滴丙酮，其它处理与上相同。4)试验观察及结果整理 试验期间记录温湿度，施药后24小时检查每种处理的生或死虫数，统计各浓度幼虫的死亡率和校正死亡率+计算公式如下：最后采用绘图法或直线回归方程求LD50，并用方差分析法检定其可靠性程度。例如：乙酰甲胺磷对玉米螟幼虫触杀LD50毒力测定结果及检验。1乙酰甲胺磷对玉米螟幼虫触杀结果(见表6一1)。处理剂量*g/头10 剂量对数logx 参试虫数（头） 处理24小时后死亡情况 校正死亡率机率值（y）死亡虫数 平均死亡率（） 校正死亡率（） 8.75 0.942 124 10 11.3 9.9 3.717.5 1.243 124 23 18.5 17.1 4.035.0 1.544 124 48 38.7 37.7 4.670.0 1.845 124 56 45.2 44.3 4.8140.0 2.146 124 75 60.5 59.9 5.3210.0 2.322 124 89 72.3 71.9 5.6280.0 2.447 124 102 82.3 82 5.9对照 丙酮 124 2 1.6 *除用剂量作单位外，还叫以用浓度(ppm)作单位，则所求出的单位是LC50。2绘图法求LD50 此方法以剂量对数作横坐标，机率值作纵坐标，绘制直角坐标系。在直角坐标中找出该次试验的坐标点，并用一直线连接起来，该直线称“剂量对数一死亡率机率直线”。从机率值“5”处引一与横坐标平行的直线与“剂量对数一死亡率机率直线”相交，以相交点引一线垂直于横轴，此垂线与横坐标的交点，即为乙酰甲胺磷对玉米螟LD50。的剂量对数值，再查反对数表，即为LD50值(见图6一1)。 logX1.86 X72 logXl0X=72/10=7.2g头因此，乙酰甲胺磷对玉米螟4龄幼虫触杀毒力LD50为0.0072g头(试验时如把幼虫称重则其单位可为gg)。3剂量对数机率值直线的验证及LD50的计算1)求直线回归方程 根据表62。 将a与b代入 公式中即得该经验临时毒力回归直线方程 。表62 乙酰甲胺磷对玉米螟幼虫触杀毒力剂量对数与机率值相关性剂量对数（x） 机率值（y） x2 xy0.942 3.7 0.8874 3.48541.243 4.0 1.5450 4.97201.544 4.6 2.3839 7.10241.845 4.8 3.4040 8.8562.146 5.3 4.6053 11.37382.322 5.6 5.3917 13.00322.447 5.9 5.9878 14.432)求LD50 (用回归直线计算)。因为当机率y5时即为50的死亡率，所以将y5代入回归方程中，即可求出LD50查反对数表得：x78.3x原剂量对数10 LD5078.3/107.8g头3)方差分析检定 （回归平方和） （剩余平方和） 列方差分析表如下变异来源 平方和 自由度 均方 F值回归 3.926 1 3.926 384.90剩余 0.051 5 0.0102 F384.90F0.01(1.5)此回归方程的回归效果达到极显著的水平，符合实际情况，所求LD50可靠。 4LD50标准误差和置信区间(可靠范围) 上面所求出的LD50是人工饲料饲养的玉米螟幼虫LD50，其值往往受到所取样本影响，与昆虫的群体有一定的差距，即所求的LD50不一定代表群体的实际情况。因此，还需计算出LD50的标准误差以及置信区间(可能的实际所在的范围)。1) LD50标准误差如 y3.6398查w一表得0.302，其余类推，标准误： 其中： LD50标准误LD50的变量LD50对数值b回归式中的坡度(或回归系数)平均致死剂量，为对数值注意：平均致死剂量(1.8501)不同于致死中量LD50m1.8939(为对数值)2)置信区间 当机率P0.05，群体自由度df时，查t表：t0.051.96，因此，当LD505最小显著性差异(LSD)0.05t0.05(df) 1.960.03280.0064。但是，由于 是LD50标准误的对数值，要换算成本来数值时，不能直接由对数表查回，因为我们前面用的是10g10，因此标准误差( )由对数查回的计算方法为：LD50log10 7.82.30.00641.2。因此玉米螟幼虫群体LD50的95置信区间是7.81.26.69.0g头之间。习作将实验结果列成表格，分别用作图法及回归方程求LC50或LD50，并且进行可靠性的检验。 实验七 杀虫剂熏蒸毒力测定(熏蒸法)目的要求本实验以磷化氢(PH3)对玉米象(Sitophils Zeamais Motsch)成虫熏蒸毒杀的室内毒力测定，为该药对仓库、船泊、粮堆等贮粮或其他农产品的熏蒸防治提供一定依据。原理磷化氢的发生是以磷化铝或磷化锌与稀硫酸作用产生，其化学反应式：磷化氢的含量确定以酸性高锰酸钾与磷化氢氧化为磷酸，利用磷酸生成钼蓝的反应，显色后进行比色测定，从标准色阶找出磷化氢的含量。根据玉米象、气温和湿度条件以磷化氢浓度从0.010mg10.045mg1，于密闭真空玻璃缸中进行熏蒸，经14天后检查死亡虫数，求LC50。1实验用具 玻璃缸(高9cm、直径1 9cm)，导气胶管，集气管、三向玻璃管、玻璃漏斗、弹簧止水夹、5000ml集气瓶、水准瓶、熏蒸瓶(带胶塞)、小铁纱虫笼、医用注射器(2ml、5ml及针头)、抽气机、大气气压表和721型分光光度计等。2实验材料 供试虫的饲养，玉米象以小麦或玉米为饲料，用广口瓶装好(瓶口用尼龙纱紧扎)、置于恒温(28)和恒湿(60)箱内，选取经饲养数代生理条件一致的成虫供试。15硫酸；饱和盐水(36g普通食盐100ml水)。3磷化氢的制备和稀释 采用磷化锌酸式封闭法发生磷化氢，按图(71)装置。先在水缸中倒入稀硫酸，通过水准瓶的升降和转动三通活塞，排出导气管和集气管中的空气，当导气管和集气管充满稀硫酸溶液(不留气泡)后，用滤纸包扎1g磷化锌，并用手轻压，以排出纸包内的空气，用坩埚钳夹持药包，在水缸的稀硫酸溶液中轻轻摇动，使药包内空气排走，即略提高玻璃漏斗的一侧(切勿露出液面，否则空气重新冲入)，迅速将药包移入漏斗中盖好，片刻即见磷化锌与稀硫酸作用生成磷化氢气体从导管进入集气管，而导气管及集气管中的硫酸被慢慢地压到水准瓶内。当漏斗中不见气泡再产生时，该反应已完毕，即把三向管活塞关好，集气管中磷化氢可供试验备用。上述制成的磷化氢因浓度较高不宜直接使用，必须经过稀释。方法是：用1个5000ml广口玻璃瓶，先用水测定瓶内容积及装配胶塞及玻管(图72)、经过检查没有漏气现象后，接上抽气机，把瓶内气体抽走(当见胶管从圆变扁即可停止抽气)，用止水夹把管夹好，以免漏气。稀释时，用注射器从集气管上部胶管呈45度角斜刺插入抽取25ml磷化氢的同时，要提高水准瓶以保持集气管水准瓶在同一水平上。把注射器拔出，即注入稀释瓶内，随将稀释瓶止水夹打开，让空气进入瓶中并关好。此时，应用胶粘纸把注射器插过的胶管伤处封闭，以防漏气，至此稀释完毕。而稀释瓶内磷化氢的浓度应根据当天温度、气压，用气体方程式(波耳(尔)定律和查理定律合并法)进行计算。公式： P0标准状况下的大气压力(760mm)P实验时大气压力T=273十实验时温度V0标准状态下气体体积Vt实验时气体体积273绝对温度值例如：某日实验室温度27，大气压750mm，现进行磷化氢熏蒸测定，在5000ml稀释瓶中将磷化氢稀释200倍，求标准状况取磷化氢的ml数。在5000ml瓶里稀释200倍的m1数为5000ml20025ml。根据公式：这个22.45ml是经过稀释200倍后磷化氢的体积m1数，要了解其实际浓度则后用钼蓝法校验。在标准状况下，每克分子的PH3为34g，体积为22.4升，故稀释200倍的理论浓度为：根据各熏蒸瓶的体积和设计的用药量，求取各熏蒸瓶该施稀释后磷化氢的ml数。可按下式计算：同时应注意从稀释液中抽出磷化氢的ml数，必须用等量的饱和盐水溶液补充(因为磷化氢在饱和盐水中溶解很少)，以保持稀释瓶中磷化氢气体的浓度不变。实验方法设计磷化氢浓度0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.045mg1等，每个浓度设3次重复，加对照共20瓶，每瓶放入玉米象80头于小笼内，用尼龙布盖好，挂在胶塞下，把胶塞盖上熏蒸瓶口(图73)，接上抽气机把瓶内气体抽走后即关上夹子，然后按每瓶不同处理而注入不同药量(用注射器小心注入熏蒸瓶上的胶管中，随即打开止水夹让空气进入瓶后，即关闭夹子，放入培养箱内，经24小时后，检查虫情，记录其生死数，把所有虫移入一个有饲料的250ml瓶子里饲养，每隔3天观察1次，第14天作总检查，结果整理，计算其死亡率()或校正死亡率()。结果整理将结果填入附表内，以浓度换算为对数作横坐标，校正死亡率()换算为机率作纵坐标，绘制成直线，求出LC50，单位mgl。习作1把全班的试验结果填入表71，求LC50。该值对指导生产实践有何意义?2根据本次实验，你认为在熏蒸粮仓时应特别注意哪些要点?表71磷化氢（PH3）对玉米象熏蒸毒力测定（全班各组合计）药剂浓度*（mg/l） 浓度对数（log） 供试虫数（头） 施药后14天检查死亡虫数（头） 死亡率（） 校正死亡率（） 校正死亡率机率值0.010 240 0.015 240 0.020 240 0.025 240 0.030 240 0.035 240 0.045 240 对照（不施药） 240 *实际用药量的计算：例如以容积1.041，浓度0.0l0mg1，施药量1.37ml；以容积1.041，浓度0.015mgl，施药量2.05ml。 实验八 杀虫剂内吸作用测定目的要求测定杀虫剂内吸作用的原理是把农药施在植株的根、茎、叶等部位使农药被植物吸收并传导到试虫取食部位，试虫在取食食料的同时将药剂摄入消化道，经过吸收而到达作用靶标引起中毒。测定药剂内吸作用的目的在于了解杀虫剂是否有内吸作用?通过哪些途径内吸?以及内吸毒力的大小和内吸的速率等，为杀虫剂的使用提供技术资料。实验方法1管测法供试植物：三叶期水稻幼苗。供试昆虫：初孵三化螟幼虫或孵化1天的1龄粘虫。供试药剂：75呋喃丹可溶性粉，50嘧啶氧磷乳油，50巴丹可溶性粉。试验用具：测定试管(直径15mm，长20cm的试管，截去底部并在距端部3cm处拉成细颈状)，如图81，200ml烧杯、量筒、移液管、洗耳球、棉花、毛笔、镊子。 操作步骤：取测定试管一支，将培育好的三叶期稻苗2株或麦苗(供粘虫测定)，插入细颈测试管处，并在细颈处用棉花塞在稻株周围，以防将来接入的试虫爬到下面药液中，将上述装有稻苗的测试管插入200ml烧杯中，加入待测药液深度约为2.5cm左右(约50m1)，另设清水作对照(详见图8一1)，每种农药设45个浓度，每个浓度5条测试管即5个重复，稻苗在室温(25)和光照条件下内吸24小时后，每测试管接入20头初孵三化螟幼虫(或10头孵化1天的1龄粘虫幼虫)，用黑布将管口扎住(粘虫用细白布将管口扎住)，接虫后24小时、48小时分别检查试虫死虫情况，算出其死亡百分率。2土壤处理和心叶施药法供试植物：玉米植株50cm左右。供试昆虫：玉米螟1龄幼虫。供试药剂：3易卫杀颗粒剂，3呋喃丹颗粒剂，3辛硫磷颗粒剂等。试验用具：药物天平、小铁铲、角匙、剪刀、镊子、毛笔、指形管、脱脂棉、塑料布、标签。操作步骤：1)施药：测定前57天施药；用药物天平按每包3g和1g分别称取各种颗粒剂，用塑料布分别包好，作好标记，一组将3g的颗粒剂用作根施药(离玉米植株10cm，深5cm，环状施药，施药后覆土、淋水)；另一组将1g的颗粒剂直接撒施玉米心叶；并设不施药的植株为对照。2)取样及处理：将根区施药的玉米心叶取回，清水冲洗，风扇吹干，剪成条状，装入每个指形管，每指形管内接入一龄玉米螟幼虫20头，脱脂棉塞紧管口，管上作好标记，置28恒温室中，心叶施药的取样及处理基本同上，但要充分清洗干净叶片表面残存药剂，清洗中可先用清水洗，再用0.1洗衣粉液洗，后用清水冲洗干净。3)观察和记录：处理后24小时、48小时分别检查各处理的死活虫数，记入记录表中，检查中发现叶片枯黄，应换该处理的新鲜叶片。3涂抹法供试植物：盆栽蔬菜或盆栽棉株。供试昆虫：棉蚜或菜蚜(桃蚜)。供试药剂：50乐果乳油，50氧化乐果乳油，50久效磷乳油，配制10000mgL和20000mgL稀释液。实验用具：毛笔、镊子、脱脂棉、小烧杯、白纸、剪刀。操作步骤：取盆栽棉株(测定菜蚜则用盆栽蔬菜)，选择蚜量适当的棉株9盆，用毛笔除去棉株上的有翅蚜(可在盆栽蔬菜上接上34头雌成虫，待产幼蚜后，除去母蚜，至3龄幼虫则可试验)。用剪刀剪成圆形纸片铺于棉株下的土表上，用蜡笔在白纸上作好标记，检查每盆棉株上的蚜虫数，记入记录表中。用小烧杯倒取待测的药液，用镊子夹脱脂棉沾取药液少许，轻轻地在棉株茎部涂一下，每一浓度药液涂三盆为三次重复，涂清水作对照，处理后第一、三、五、七天分别检查虫口消长情况，计算虫口减退率和校正虫口减退率。习作1列表比较各参试药剂的内吸杀虫效果?2试比较上述几种内吸杀虫试验方法各有什么优缺点?实验九 杀虫剂拒食作用的测定目的要求通过实验，掌握拒食剂对昆虫拒食作用的基本测定方法。一、叶碟法测定食叶咀嚼式口器昆虫的拒食作用可采用此法。实验用具培养皿(直径9cm)、滤纸(直径9cra)、打孔器(直径20mm)、计算纸(或叶面积测量器)、昆虫针、丙酮。供试昆虫斜纹夜蛾或菜白蝶幼虫饲料竽头叶、芥蓝叶或椰菜叶供试药剂川楝素测定方法于直径9cm的培养皿中铺两层滤纸，加少量水湿润，用打孔器将芥蓝叶(或竽头叶)制成圆形叶片，分别浸于各试样的丙酮药液中1秒钟，取出晾干。1选择性拒食作用测定 每培养皿中用4支昆虫针穿插过滤纸后分别插上圆叶片，其中对照及处理各2块，十字交叉型排列。2完全拒食作用的测定 每培养皿内四块叶片均为药剂处理或对照。供试昆虫经饥饿34小时后，每培养皿接12头，任由试虫自由选择取食，每一处理重复68次。试虫经24小时取食后即移出培养皿。计算其取食面积。计算方法1把计算纸(坐标纸)剪成同供试验叶片面积一样大小，把它套在一个小薄膜袋内作为标尺，用于量度各培养皿中处理及对照叶片被取食掉的叶面积(先数被取食的叶碟的方格数，最后换算成面积)。2拒食率的计算3试验结果用DMRT法进行检验。二、蜜露色斑法根据褐稻虱在稻株上的取食量与其所排泄蜜露多少成正相关的特点及蜜露与溴甲酚绿呈色反应生成深蓝色斑点的原理，以量度色斑面积间接判断褐稻虱拒食效应。实验用具广口玻璃瓶(500m1)、塑料瓶盖、虫罩(与广口瓶面积相同，口径7cm、高4cm，中央留一孔口)、滤纸(7cm)、透明粘胶布。供试昆虫短翅型褐稻虱成虫、若虫。供试药剂及试剂印楝油或苦楝油(10、20)，1吐温溶液、0.2溴甲酚绿酒精溶液。供试植株取盆栽感虫品种分蘖盛期稻苗(不受任何化学物质污染)，洗净根系泥土，剪去枯梢及枯叶，用风筒吹干水分，待用。测定方法把滤纸放入0.2溴甲酚绿酒精溶液中浸渍片刻取出，晾干后重复浸渍第二遍，用镊子取出，置于干净的白纸上晾干，收封好备用。用毛笔把供试的印楝油或苦楝油涂于离稻根部约2cm的稻茎上部，对照涂布1吐温溶液，待药液晾干后，每广口瓶放稻苗1株，穿过塑料瓶盖中央圆孔，置于盛有100ml清水广口玻璃瓶中，用少量棉花把稻株与盖孔周围的空隙密封，再用一张与瓶盖等大的干净滤纸(剪去圆心孔)，绕着稻茎铺上，然后用镊子把吸附着溴甲酚绿的滤纸按前者绕稻茎部放上，把虫罩穿过稻株置于瓶盖滤纸上，让植株伸出虫罩顶外，用透明粘胶布把虫罩与底部固定封严。用吸虫器玻管把经饥饿4小时后的正常褐稻虱从虫罩顶端中央孔口接入，每瓶接短翅型成虫5头或若虫10头，再用棉花封实接虫入口处。每处理重复5次，让供试昆虫自由取食及排泄蜜露24小时，随后移去试虫，取出溴甲酚绿滤纸，与透明绘图纸重迭描绘“蜜露”色斑的大小，再用计算方格纸计算蜜露色斑面积(mm2)，以测定拒食效果。习作计算出试虫拒食率并进行统计分析。实验十 农药对水生生物毒性的测定目的要求 使用农药多的地方，特别是在灌溉水管理不当和雨水多的季节，农药易从农田通过流水进入鱼塘、江河或海，水生生物长期在水中生活而接受微量农药影响，性质稳定的农药还有生物浓缩(富集)、积累性等现象。农药使用不当，还会严重污染水生生物生长繁殖的水源，使水生生物遭受其危害。也有的由于饮用水水源污染而危害或威胁人类的健康。因此，鉴定农药对水生生物的毒性是农药安全使用的重要工作之一。本试验测定的是常用杀虫剂对鱼的毒性。试验工具及材料鱼缸(圆形、高1lcm、半径19cm，可盛清水1700m1)、小型电动马达(附打气管)、温度计、饲料(红丝虫干或小麦麦麸、米糠等)。供试鱼种类可用罗非鱼(Tilapia mossambica)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus Cuvier)或鲮鱼(Cirrhinus molitorella Cuvier)。供试杀虫剂采用敌百虫、氰戊菊酯、乙酰甲胺磷、呋喃丹等。实验方法每小组选取一种药剂，用水稀释成经预先试验的并经确定的符合鱼在24小时后死亡率在15一90的浓度。本项试验以敌百虫20、40、80和160mgL；氰戊菊酯为0.011、0.012、0.013和0.014mgL；呋喃丹为0.675、1.250、2.500和5.000mgL等。每缸盛药液共1700ml，约为缸盛量的23。每缸放入10尾鱼苗(预先在室内饲养1周，每天喂以新鲜饲料，供气。当鱼放入药液后开始计算时间。另设清水(无药)放入鱼苗作为对照。每隔2小时观察1次，把死鱼捞出并记录，至24小时为观察终点。结果整理全班各组实验后累总，分别计算每种杀虫剂的不同浓度鱼的平均死亡时间(以（1/平均死亡时间）1000的数值，即为死亡速率数值)作纵坐标，浓度对数为横坐标，绘出死亡速率与浓度关系的毒力曲线。并以浓度对数为横坐标，死亡机率值为纵坐标，求出农药在24小时后对鱼的毒力回归方程及相关系数，求出半致死浓度LC50或忍受极限中浓度(TLm)。表101 农药对鱼毒试验记录种类 浓度（mg/L） 开始时间 死亡时间 平均死亡时间 （1/平均死亡时间）1000对照 注：水温 表102 农药对鱼毒试验记录农 药种 类 浓度（mg/L） 鱼苗数（条） 24小时死亡数 死亡率（）对照 习作1根据所求的死亡率与浓度关系曲线说明浓度高低与死亡速率的关系。2根据所求的毒力曲线以TLm值比较农药对鱼的毒性。 实验十一 杀虫剂药效试验(盆栽法)目的要求盆栽试验是介于室内与田间试验之间的一种重要方法。它可以较系统和较客观地考察某些农药的使用剂量、方法、对害虫的作用方式或比较几种不同农药对某一害虫的防治效果，为田间应用提供依据。该试验要求掌握盆栽试验的设计、操作技术、结果调查及统计分析。实验材料120叶蝉散乳油1：500倍。290乙酰甲胺磷可溶性粉1：1000倍。325杀虫双水剂1：500倍。48增效虫嵫灵乳油1：500倍。5水稻秧苗：秧龄约50天左右。6供试昆虫：23龄褐稻虱若虫。褐稻虱的饲养：待盆栽秧苗长至分蘖高峰期，将秧苗连盆移入体积为0.810.4(宽长高)的水泥池中，加水约高于盆面，每盆接入短翅型(雌)褐稻虱成虫约20头，让其产卵3天，除去成虫，约1520天若虫23龄时供试。试验时，可用剪刀剪除有虫的稻茎，然后轻轻拍落一定数量的褐稻虱于盆栽水稻中。试验方法在口径约25cm的圆型花盆内装入肥沃的塘泥，加水浸软并搅碎成泥浆，每盆插植10株约20天秧龄的敏感品种，插苗后约30天秧苗处于分蘖高峰即可