蓝靛果花青素.pdf

第2 7 卷第 3 期 2 0 0 1 年 9 月 延边大学学报 自然科学版 J o u r n a l o f Y a n b i a n U n i v e r s i t y N a t u r a l S c i e n c e Vo l 2 7 No 3 S e p 2 0 0 1 文章编号 1 0 0 4 4 3 5 3 2 0 0 1 0 3 0 1 9 1 0 4 贾 蓝靛果花青素的分离与鉴定 吴信子 朴京一 张小勇 尹起范 王思宏 延边大学分析测试中心 吉林 延吉 1 3 3 0 0 2 摘要 主要报道了从蓝靛果中分离出花青素的纯组分 通过 P G U V一V I S I R H一N MR H P L C等现代手段 鉴定了花青素的结构 为该系列化合物的提取 开发 利用和含量的测试创 造了表征的条件 关键词 蓝靛果 花青素 花色贰 中图分类号 0 6 2 9 9文献标识码 A 花青素类 A n t h o c y a n id i n s 属于黄酮醇类化合物 是花色贰 A n t h o c y a n i n s 水解而得的 有颜色的贰元 本文介绍的花青素 C y a n id i n 为生长在长白山一带的天然野生果实蓝靛果 中提取出来的一种花青素 矢车菊素 其主要用于食品着色方面 也可用于染料 医药 化妆 品等方面 目前食品工业上所用的色素多为合成色素 大多数合成色素几乎都带有不同程度 的毒性 长期使用会危害人的健康 随着科学技术的发展和人类对健康的重视 人们将逐步 控制合成色素的用量 而对天然色素的需求量会越来越大 因此天然色素越来越引起了科研 领域的关注 由于至今为止国内市场上还没有花青素纯品 所以提取高纯度的花青素对花色 贰类色素的深人研究与开发可提供必备的表征条件和理论依据 并且有助于它的工业利用 1 实验部分 1 1 仪器与试剂 所用仪器为V a r i a n 公司U n id y 一 4 0 0 超导核磁共振仪 A C 一 8 0 脉冲傅立叶变换核磁共 振仪 美国P E公司产F I I R 1 7 3 0 型傅立叶变换红外光谱仪 7 2 1 型分光光度计 日 本岛 津公司产2 6 5型紫外一 可见光分光光度计 日 本岛津公司产 L C 6 A型高效液相色谱仪 所用的化学试剂均为分析纯或化学纯 1 2 原料来源 实验所用的蓝靛果是 1 9 9 7 年7 月末从二道白河 长白山区 一带采集的 将收集的新鲜 果实阴干 然后粉碎贮之备用 1 3 提取花青素的实验方法 用0 1 2 m o l 几 的盐酸 在甲 醇中 作为溶剂将蓝靛果粉末进行萃取 备下步分离 花色贰的分离 纸层析法 中号 和柱层析法 聚乙酞胺 水解实验 将分离出来的花色贰组分用2 0 H C I 甲醇进行水解共3 0 m i n 逐步水解实验 用5 H C I 甲醇进行水解 每隔 1 0 m i n 取样分析 用 P C法检验水解反 收稿日期 2 0 0 1 0 4 1 2 作者简介 昊信子 1 9 6 8 一 女 朝鲜族 吉林龙井人 延边大学分析测试中心实验师 延边大学学报 自然科学版 第 2 7 卷 应程度 共 1 2 0 m i n 花青素的提纯 加E t O H和 1 0 9 6 H OW 1 放置0 冷却5 d 2 结果与讨论 2 1 花青素的分离 在 分 离 过 程 中 需 要 始 终 保 持 原 有 的 色 泽 避免 受光和热的影响 防止发生其结构变化 实验结果 表明 该色素在6 0 下 光照6 d以内 吸光值与颜 色变化不大 但加热时间过长 提取液变为褐色 所 以不宜用水或沸点高于6 0 的作为溶剂 水解实验图1 b 表示了花色贰在甲醇中逐步 加酸水解过程 由图 1可知 在 5 0X o H C l 甲醇中 1 2 0 m i n 内 水解全部完成 2 2 R f 值的测试 每个化合物在固定条件下其比移值是固定数 值 花青素在分离中使用的4 个展开液中的R 值如下 a BAW b AHW 飞 I 6 彝 ry1 j t r S M 冉 n 声 八 熟 次 伪 六 次 少 合 众 肉伪兵伪 六 二 份 教 众 台 众 含 Rf 0FLLL L井LLse 10L 0分贡零王承20只纪导宝示牙 图1 水解实验图 R f A H W 1 0 5 1 R f F H W 0 2 1 R f A H W 2 0 3 7 R f B A W 0 7 0 根据文献 1 蓝靛果中花青素的R f 值最接近于C y a n i d in 的R f 值 2 3 紫外一 可见光吸收光谱的研究 5 2 8 n m 5 3 8 n m 6 0 0 2 2 0 图2 花色俄和花 素的U V一 V I s图 由图2 可知 紫外区和可见区均有吸 收峰 实验结果表明 在同样甲醇溶剂中 C y a n id in 一 3 一g l u c o s id e 和 C y a n id in的吸 收波长为5 2 8 5 3 8 n m左右 其最大吸收 波长差为 1 0 n m左右 2 4 红外光谱的研究 由图3 所示 在3 4 0 4 c m 处的强烈吸 收峰是缔合的O H引起的 在1 7 3 3 c m 1 处的吸收峰是C o引起的 在 1 6 4 1 1 6 1 3 c m 处的吸收峰是苯环上 C c引 起的 在 1 1 9 1 2 c m 处的吸收峰是 C O 图3 花青素的 I R图 引起的 均表现了花青素结构中存在官能团特征 第 3 期吴信子 等 蓝靛果花青素的分离与鉴定 2 5 核磁共振谱的研究 图4 花青素的 H一 N M R图 D M S O 一 么 由图4 所示 兔 8 7 7 1 H d J 1 6 H z 8 6 8 2 6 1 H 2 d J 8 8 H z 8 2 8 1 9 1 H d J 2 0 H z 8 5 7 1 7 1 H 2 d J 1 6 H z 饥 7 0 2 1 H S 8 6 6 8 6 1 H d J 1 6 H z 饥 1 2 2 5 1 0 H S 8 7 1 2 1 7 1 0 H S 8 3 8 4 9 9 7 1 0 H S 以上结果均符合花青素 矢车菊素 结构的要求 2 6 高效液相色谱的研究 2 由图5 可知 在原果中 有几个不同的花色贰 其中C y a n i d in 3 一 g l u c o s i d e 的含量较高 可作为提取C y a n i d i n 的理想原料 同时图6 是用H P L C 表示花色贰在甲醇中逐步加酸水解 的过程 花色A 1 的峰高逐步变小 花青素 2 的峰高逐步变高 顺便提供了以花青素为标 准就计算总花色贰含量的依据 图5 蓝靛果中 含有的花色贰与Qa r ri d i n 的H P L C 图图6 花色贰逐步加酸水解的H P L C图 1 9 4 延边大学学报 自然科学版 第 2 7卷 基于上述的图谱和数据 可确认蓝靛果中提取出来的花青素的结构式为 OH OH OH 本文填补了目前国内未有的花青素中矢车菊素对照品的空白 同时为该系列化合物的 研究和应用提供了理论和测试依据 参考文献 1 林孝三 植物色素 M 东京 东京株式会社养贤堂发行 2 B I O L L E Y J P J A Y M A n t h o c y a n i n s i n m o d e r n r o s e s c h e m i c a l a n d c o l o r i m e t r ic f r a t u r e s i n r e la t io n t o t h e c o l o u r r a n g e J J o u r n a l o f E x p e r i m e n t a l B o t a n y 1 9 9 3 2 6 8 4 4 1 7 2 5 一 1 7 3 4 I s o l a t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f a n t h o c y a n i d i n f r o m t h e b e r r i e s o f Lo n i c e r a c a e r u l e a WU X i n z i P I A O J i n g y i Z H A N G X i a o y o n g Y I N Q i f a n WA N G S i h o n g A n a l y s i s a n d I n s p e c t i o n C e n t e r o f Y a n b i a n U n i v e r s i t y Y a n j i 1 3 3 0 0 2 C h i n a A b s t r a c t A r e d p i g m e n t w a s i s o l a t e d f r o m t h e b e r r i e s o f L o n i c e r a c a e r u l e a w h i c h w a s d e t e r m i n e d b y P C U V V I S I R H N MR H P L C a l l a n a l y s i s s h o w e d t h a t t h e r e d p i g m e n t w a s p u r e a n t h o c y a n i d i n t h u s i t l a y me n t o f c o n t e n t f o r o t h e r s s o l i d f o u n d a t i o n f o r i s o l a t io n e x p l o i t a