实验设备及培养条.ppt

1 掌握组培室的功能布局与设计要求 2 掌握组培常用的实验仪器设备及使用 3 掌握调控组培的主要环境条件 目的要求 第二章实验设备及培养条件 第一节实验室第二节设备和器材第三节培养条件 第二章实验设备及培养条件 配置室 洗涤室 接种室 培养室 观察室 组培实验室 驯化室 第一节组培实验室 案例1 实验室平面设计 案例2 实验室构成 功能 用于玻璃器具的清洗 干燥和贮存 接种材料冲洗 配备 上下水 水槽 塑料筐 干燥箱 晾干架等 1 洗涤室 面积 根据规模 可与配置室合并 一般20m2 2 配置室 功能 用于培养基的配制 试管苗出瓶 清洗 配备 药品柜 天平 工作台 蒸馏水器 磁力搅拌器 冰箱 电炉或电饭锅 酸度计 培养箱 设计要求 明亮 通风 洁净 药品柜 冰箱 天平 磁力搅拌器 恒温水浴锅 酸度计 电蒸馏水器 水处理中心 恒温培养箱 电饭锅 电炉 人工气候室 功能 完成培养基 接种工具等的高压灭菌过程 配备 高压灭菌器或微波炉 烘干箱 3 灭菌室 4 接种室 功能 用于植物材料的无菌分离 接种和转移培养物 结构 缓冲间 接种室配备 超净台 工作台 搁架 医用平车 细菌过滤器 解剖镜 紫外灯等 面积 一般10 20m2设计要求 地面平坦无缝 顶棚及墙壁密闭光滑 干爽安静 清洁明亮 配置横拉门 门窗严密 超净工作台 电子灭菌器 臭氧灭菌机 5 培养室 配备 培养架边台解剖镜照明设备定时器空调器干湿温度计工作台除湿机换气扇面积 根据规模定 功能 培养植物材料 5 培养室 6 观察室 功能 观察并研究培养材料的生长分化情况及其形态发生规律 检查培养材料是否脱毒和发生变异 主要配备 生物显微镜 切片机 酶联免疫检测仪 PCR扩增仪等 要求 室内清洁 明亮 安静 设备先进 7 驯化棚室 要求 能够控温调湿 控光通风 面积 据规模来定 注 室内驯化与设施下驯化均可 功能 提供组培苗炼苗的环境 7 驯化棚室 第二节设备和器材 一 玻璃器皿 二 器械用具 三 仪器设备 一 对玻璃器皿要求 1 耐腐蚀 耐高温 高压 2 透明度好 3 便于接种 三 玻璃器皿 三角瓶 50 100 250 500ml或用250ml罐头瓶代替 培养皿 6 9 12cm试管 18 180mm或20 200mm量筒 10 50 100 500 1000ml烧杯 50 100 200 500 1000ml容量瓶 100 200 500 1000ml试剂瓶 棕色 50 100 250 500 1000ml移液管 0 2 0 5 1 0 2 5 10ml微量移液器玻璃棒 酒精灯 二 玻璃器皿的规格 1 镊子类 接种 转移材料或分离茎尖用 以100ml三角瓶为培养瓶 可用20cm长 二 器械用具 二 器械用具 2 剪刀类 医用剪刀 剪切割外植体或继代培养时分离材料 3 解剖刀 切割芽 茎段 愈伤组织等 继代时分离材料 也可用于微小外植体的接种等 4 解剖针 转移细胞或愈伤组织 微茎尖分离及接种等 二 器械用具 5 其它 周转筐搪瓷盘移液管架 玻璃棒 酒精灯 试管架等 一 仪器设备 1 恒温培养箱2 烘箱3 空调4 高压灭菌锅5 冰箱6 天平7 酸度计8 显微镜9 水浴锅10 蒸馏水器11 磁力搅拌器12 人工气候室13 摇床转床14 干燥箱15 细菌过滤器 第三节培养条件 1 一般控制在25 2 C 2 植株种类及外植体的不同 其最适温度也是不同的 如百合20 月季25 27 番茄28 一 温度 二 光照 1 光强 影响外植体细胞的增殖 组织和器官的分化 有的材料愈伤组织的诱导需光或需暗 光照强 幼苗生长健壮 光照弱 幼苗生长弱小 容易徒长 不同波长的光对细胞的分裂和器官的分化有影响 2 光质 白光促进小花天竺葵愈伤组织的生长 蓝光则无作用 如 红光促进杨树愈伤组织的生长 蓝光阻碍其生长 3 光照时间 根据植物生物学特性决定 光照长短对试管内花的形成有重要影响 在胡萝卜组织培养中随着日照长度的增加 而促进生长 三 湿度 1 瓶内的湿度 主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响 如培养基过硬 则不利于外植体接触和插入培养基 导致生长迟缓 封口膜过于透气 也会使瓶内湿度下降 2 环境湿度 过低会使培养基丧失大量水分 渗透势升高 影响材料对营养物质的吸收 也会阻碍外植体的生长 一般为70 80 三 湿度 1 瓶内的湿度 1 培养基适宜PH值5 6 5 一般为5 8 调整用0 1M的NaOH和HCl溶液 四 pH值 2 H影响培养基的硬度 H 6 5培养基会变硬 H 5 0培养基不易凝固 3 灭菌之前 培养基的 H要比标准提高0 2 0 3个单位 五 气体 必要条件 1 培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关 可用棉塞或特制的封口塑料 通气最好的是棉塞 但棉塞易使培养基干燥 夏季易引起污染 2 培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关 固体培养基可加进活性炭来增加通气度 以利于发根 液体培养时 可考虑采取振荡培养的方式 以增加通气性 五 气体 必要条件 2 个大气压以上就对生长有阻碍作用 5 个大气压生长就完全停止