核医学 放射自显影术(ARG).ppt

放射自显影术 ARG 一 发展史1867年Niepledestvicter发展铀盐能使胶片感光 但引出错误的结论1896年H Becqueral证实上述是辐射引起 1898年Bq 和居里夫妇发现210po 226Ra1924年Lacassagae首次研究铀在生物体内分布1939 1945各种记录粒子径迹的专用乳胶1946年Belanger和lebland 更好的液体乳胶 ARG分辨力大为提高 1950年Pelc揭膜乳胶1956年超微结构及电镜ARG ARG的特点 定位准确敏感度高可定量测量 还可做形态定量分析不需复杂设备 应用广泛 ARG的一般过程 引入示踪剂 制备标本 制备ARG 曝光 照像处理 标本染色 分析 二 感光材料 组成 银盐 明胶 分类 原子核乳胶 核乳胶 干板 揭膜氚片X片电影正片及幻灯片 各类材料的性质和应用1 乳胶及制品a 液体核乳胶 粘稠 10 以下呈胶冻状 40 温溶 极限50 出厂本底3个银粒 1000 m应用 核4 所有带电粒子核2 a粒子HW3 4 电镜ARGb 干板 宏观及光镜ARGc 揭膜乳胶 光镜定量ARG d 国外产品 美Eastman KodakNTE英Kodak英IlfordL 4比利时GevaertNuc 307银粒0 07 0 4Exp 6M按敏感度分为 0型 a粒子2型 3H 125I5型 用于低电离作用的 粒子径迹ARG 2 电影正片or幻灯片 粒径1 m 单面涂乳胶 厚15 m 外加保护层 除3H以外的各种核素宏观ARG3 X光片 粒径2 5 m 敏感性强 但分辨力低 宏观ARG 低能核素不适应 4 氚片 进口LKB产品 国产也有了 粒径1 m 暗室安全光相当耐受 宏观3HARG5 彩色乳胶片干板 彩显ARG 三 ARG原理 原理 造成核乳胶的点阵发生缺陷 形状不一 颗粒不完整 缺一个或一对离子等 也叫 敏化中心 当射线作用乳胶时 电离的电子向 敏化中心 移动 较多时或形成静电膜 吸引Ag 移动 虽量少1 100亿 但有巨大催化作用 能使溴化银结晶还原成金属银粒 当显影时两者被显出的速度不同 很容易区分 1 潜影形成 2 潜影消退 3 显影及显影剂 最常用的显影剂 D 196和D 191 米吐尔 硫酸甲基对氨基苯酸 主份 强还原剂2 亚硫酸钠 保护剂 能中和还原剂的氧化物 延长显影效力 还可溶解部分银粒 减少其相互结合而导致粒变粗3 海德尔 以苯二酚 强还原剂 但与米吐尔不同 但与米吐尔不同 它还原力低 影像出现缓慢 可使影像密度增加 4 碳酸钠 促进剂 增加显影5 溴化钾 抑制剂 抑制未感光的银盐 防止溴折出而增加灰雾 从而增加显象的反差 使力象更清晰影响显影的因素 1 显影时间 2 显影温度 3 显影液的搅动 4 显影液的效力 4 定影 海波 硫代硫酸钠 溶去未形成潜影的银晶体亚硫酸钠 保护剂 能与酸形成亚硫酸氢根离子 从而抑制海波被酸分解 醋酸 停显剂 终止显影液继续使用 钾矾 坚膜剂 防止乳胶在定影和水洗过程中因膨胀而造成脱落 防止操作中的擦伤or划痕 5 水洗及干燥 洗去杂质等 防止析出硫磺 它与空气中水份氧化为硫酸 影象变黄 干燥 人工电吹风 or自然干燥 防空气灰法沾染 四 射线与乳胶的相互作用1 粒子 质量大 高LET 穿透力弱 但电离密度大 直线传播 粒子径迹粗短而致密 不需灵敏度高的乳胶2 粒子 质量轻 射程较 粒子长些 穿行路径易改变 不一定是直线传播 径迹为不规则曲线 射程仅为乳胶表面的几个颗粒层 3 射线 是一种电磁辐射 本身不带电 不会引起电离 但它能与核or核外电子碰撞损失能量而产生次级带电粒子 它穿透力强 在靶物质中损失的能量少 故很难留下清晰的径迹 但对低能 线可形成小点状径迹 它产生的次级带电离子常使乳胶本底增加 4 EC IT 在电子俘获和内转换的衰变中产生的 X线不被乳胶记录 但俄歇电子和内转换电子与 粒子的性质相同 可使乳胶感光 纯 衰变的核素 3H 14C 45Ca 35S 32P r 131IEC 125IIT 99mTc径迹ARG 乳胶厚度超过射线粒子的射程 记录到的是粒子的全部径迹 物理学研究范畴 银粒密度ARG 薄的乳胶层 只要求留下径迹超始部分的银粒 ARG常用核素 能量及射程P270表14 6 参考书夏宗勤主编实验核医学与核药学 五 ARG的分辨力 效率 本底及示踪1 分辨力 定义 区别示踪物在组织中准确位置的能力 区分两个邻近结构 放射源 表示方法 半距离HD半半径HR它是反映影象散射情况的常用指标 应注意 HD HR指反映颗粒的散射情况 并不说明ARG所能分辨的最小距离或源的大小 HD HR越小 分辨力越高3H光镜ARGHD在0 3 0 4 m电镜ARGHD在80 180nm 影响分辨力的因素 a 银粒的大小b 乳胶厚度c 标本与乳胶间距d 射线能量e 曝光时间f 显影时间g 标本厚度h 本底 2 效率 定义 曝光t内 示踪剂每100次衰变所造成的显影银颗粒数目 表示方法 百分比 100 m2影响效率的因素a LETf 曝光时间b 标本厚度g 源乳距c 乳胶厚度h 显影条件d 银粒大小i 曝光时间太长时e 乳胶敏感度 3 本底 没有放射性时的银颗粒本底增高的因素 a 红灯过亮b 外环境辐射c 显影时间过长d 乳胶受到压力或张力的作用e 标本中有还原物f 乳胶保存过久 4 示踪剂用量与曝光时间一般原则 辐射强时 曝光时间可缩短 而射线弱时 曝光时间相应延长 影响因素 a 核素的性质b 核素引入的途径c 示踪剂剂型d 核素在体内的分布和蓄积状况e 标本制备时间长时 核素易丢失f 感光材料的灵敏度目前最常用的是 实验确定曝光法 六 ARG的各种方法 1 宏观ARG 接触法 适于磨片 动物整体切片植物片2 光镜ARG 用于非扩散性示踪剂 石蜡切片 浸膜法 从乳胶中提出来裱贴法 在温水中捞起标本和干板揭膜乳胶法 在温水中捞起标本和揭膜用于扩散性示踪剂 冰冻切片 融表法 冷沾取切片绞链接触法 复杂 3 电镜ARG 亚细胞水平 分辨力极高 要求标本和乳胶层极薄 IlfordL4或HW 4乳胶常用 颗粒 140nm 示踪剂用量是光镜的10倍 浸膜法 金属环法 4 细胞涂片ARG a 血涂片ARGb 骨髓涂片ARG ARG图像阅读分析 图像中银粒沉着处 反映标本中核素的存在部位 也表示标记物定位 一 宏观ARG 可直接看or放大镜 黑度表示放素所在部位 越黑说明放射性越强 含某物标记物越多 如要精确定位 必须与原标本重合在一起观察 二 微观ARG a 银粒与组织结构的关系用微调来确定 b 银粒与其它颗粒的区别 用改变焦点来观察它们的大小 颜色和外形 c 区别标本内与标本外乳胶中的银粒d 定量以银粒计数表示 定量分析法 预先制作一套已知活度梯度的放射源标准系列片 与待测标本在同一张乳胶上曝 显 定 图像用黑度计or光密度计读数 以标准梯度活度为纵坐标 光密度值为横坐标 绘一条标准曲线 即可定量 还有如下定量法 视测颗粒计数 颗粒数 cm显微光度计测定 电视扫描装置 三 亚微观ARG 电镜ARG 它图象中银粒呈扭曲的丝团状 故易辨认 八 荧光增敏微观ARG适于显影不太清楚or放射性较弱的组织AGR 特点 在乳胶中加入了闪烁剂 九 双标记ARG当需要研究机体同时摄入的多种放素掺入细胞的区别时 必须用双标记 依据 选用两种不同的辐射类型不同能量不同半衰期不同分布定位 选用 辐射体 粒子密度大 呈直线形径迹 密度小 单个银颗粒 能量