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阿司匹林含量测定方法综述药学0802 郭伟财 30804076摘要 阿司匹林是应用最早，最广和最普通解热镇痛药。具有解热、镇痛、抗炎、抗风湿和抗血小板聚集等多方面的药理作用，发挥药效迅速，药效肯定，其收载于(中国药典2000年版)二部，该文旨在分析阿司匹林原料药及阿司匹林为主药的制剂的含量测定方法，包括体内及体外药的分析。关键词 阿司匹林 含量测定正文 1. 阿司匹林原料药含量测定1.1阿司匹林原料药在体内含量测定 色谱柱：Diamonsil C18柱(46mm250mm，5um) 流动相：甲酵乙睛02磷酸(18：32：50)1.色谱条件 检测波长：237nm流速： 1.0mlmin2.溶液配制： 1.精密称取10.10mg水杨酸对照品 甲醇 10ml（ 1010mgL） 用甲醇稀释成不同浓度的系列溶液。2.精密称取10.44mg苯甲酸 甲醇 10ml（1044mg/l）取lml 甲醇稀释至l0ml（ 104.4ugml的内标工作液）3.样品处理与测定：精密量取血清样品05ml + 内标苯甲酸溶液50ul + 乙睛2ml 旋涡振荡2min，15000rmin离心5min 取上清夜20ul 进样 记入内标与样品的色谱图与峰面积。按外标法以峰面积计算，即得。 4.计算 CRXAXXD/ AR含量（%）= X100% WX106（CR对内标溶液的浓度（ug/ml）; AX和AR分别为供试品溶液和内标溶液中阿司匹林的峰面积；D为稀释体积；W为药物称取量； 106单位换算因数）1.2阿司匹林原料药在体外含量测定1.2.1 酸碱滴定法阿司匹林分子中含有游离羧基pKa为3.49，可用标准碱直接滴定。取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。样品 中型乙醇 溶解 酚酞 NaoH滴定 终点 NaoH滴定度（T）=0.1X180.16 X 1/1=18.02(mg/ml)含量（%）=(V XT XF /1000)/WX100%（V:滴定液体积（ml） T:滴定度 W：供试品称样量（g） F:滴定液浓度校正因子 F=滴定液实际浓度/滴定液规定浓度）1.2.2 水解后剩余滴定法阿司匹林中酯结构，在碱性溶液中易于水解，加入过量标准碱滴定液，加热使酯水解，剩余碱用酸回滴。 方法：取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴（0.5mol/l）50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氢氧化钠。实验组：称量 （过量定量）NaoH滴定 （剩余）NaoH硫酸滴定(消耗体积V)空白组：（过量定量）NaoH 硫酸滴定液滴定（消耗体积V0）NaoH滴定度（T）=0.5X180.16 X 1/2=45.04(mg/ml)含量（%）= （V0-V）XF XT /W X100%（V:样品测定时消耗硫酸滴定液体积（ml）V0：空白试验时消耗硫酸滴定液的体积（ml） T:滴定度 W：供试品称样量（g） F:硫酸滴定液浓度校正因子 F=滴定液实际浓度/滴定液规定浓度）2. 阿司匹林制剂含量测定2.1阿司匹林制剂在体内含量测定2.1.1 反相高效液相色谱法 【色谱条件】填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶（5um） 色谱柱：4.6mmX150mm 流动相：甲醇-水-正丁醇-磷酸（300:200:10:0.05） 检测波长：237nm 内标物：苯甲酸 柱温：室温【内标溶液】苯甲酸的甲醇溶液，浓度为0.1mg/ml【对照品溶液制备】精密称取阿司匹林和水杨酸对照品适量，加甲醇溶解并制成浓度分别为0.5mg/ml和0.1mg/ml【方法】1. 血清样品处理 取血清样品0.1ml，置于1.5ml具塞离心管中，加入50ull高氯酸（30%），再加不同浓度的阿司匹林和水杨酸最招聘及内标溶液适量，使浓度均为10ug/ml.涡旋振荡2min，于10000r/min离心5min，取上清液20l进样，峰面积外标法定量计算。 2.以对照品浓度为横坐标，峰高比（H标/H0） 为纵坐标，求出各自的回归方程和相关系数。3.回收率测定：取空白血清，加入5种不同浓度的ASA和SA及一定量的内标物（10ug/ml），计算回收率。2.2阿司匹林制剂在体外含量测定2.2.1两步滴定法实验组： 称量 中型乙醇 溶解 NaoH滴定 粉红色 过量碱 硫酸滴定（V0）空白组：中型乙醇 NaoH滴定 粉红色 过量碱 硫酸滴定（V）（1） 中和 （2） 水解与测定 NaoH滴定度（T）=0.1X180.16 X 1/1=18.02(mg/ml)标示量（%）= （V0-V）XF XT X平均片重/W X标示量 X100%（V:样品测定时消耗硫酸滴定液体积（ml）V0：空白试验时消耗硫酸滴定液的体积（ml） T:滴定度 W：供试品称样量（g） F:滴定液浓度校正因子 F=滴定液实际浓度/滴定液规定浓度） 2.2.2 HPLC法 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：1%冰醋酸-甲醇（50:50）1.色谱条件与系统适应性试验 检测波长：280nm 理论板数：1500 分离度符合要求 2.测定： 供试液：精密称取本品适量（约相当于阿司匹林0.1g） 1%冰醋酸无水甲醇溶液100ml量瓶 稀释、摇匀，滤过 精密量取5ml 1%冰醋酸无水甲醇溶液 100ml量瓶 精密量取20ul 进样，记入色谱图 对照液： 精密量取阿司匹林对照品适量 1%冰醋酸无水甲醇溶液 量瓶（稀释成50ug/ml） 进样，记入色谱图 3.含量计算： CRXAXXDX平均片重/ AR标示量（%）= X100% WX标示量X106 （CR对照品溶液的浓度（ug/ml）; AX和AR分别为供试品溶液和对照品溶液中阿司匹林的峰面积；D为稀释体积；W为药物称取量；标示量为制剂规格（g）；106单位换算因数）2.2.3 紫外分光光度法 色谱柱：填充剂为硅藻土3g和新制碳酸氢钠液（1 12 ）2ml混合物 标准液：阿司匹林对照品 冰醋酸的三氯甲烷溶液（1 100 ） 量瓶（制成50ug/ml）前期制备 供试液：精密称量供试品 研细，混匀 取适量,精密称量（相当于阿司匹林50mg）+ 盐酸甲醇（1 50）1ml 三氯甲烷 50ml量瓶 精密量取5ml 色谱柱填充剂 三氯甲烷5ml和25ml相继洗涤 冰醋酸三氯甲烷（1 10 ）10ml 洗脱 冰醋酸三氯甲烷（ 1 100）85ml 洗脱 100ml量瓶含量测定 1cm吸收池，280nm吸收波长，三氯甲烷为空白，对标准品溶液和供试品溶液的吸光度测定 计算公式：W=C(AU/AS) （C为阿司匹林对照液浓度（ug/ml）；AU和AS分别为供试品溶液和标准溶液的吸光度）2.2.4 对照品比较法 对照液：精密称取阿司匹林对照品适量 乙醇 100ml量瓶精密量取2ml +乙醇 100ml量瓶 供试品：精密量取阿司匹林注射液适量 乙醇 100ml量瓶 精密量取2ml +乙醇 100ml量瓶 对照品 276nm含量测定： (乙醇为空白) A 322nm 供试品 DA供含量计算：样品（%）= * C对 *F /W *100% DA对(DA供 和DA对分别为DA=A276A322， C对为对照品浓度，F为稀释倍数，W为取样量 ) 2.2.5 百分吸收系数法 供试品：精密量取阿司匹林注射液适量 乙醇 100ml量瓶 精密量取2ml +乙醇 100ml量瓶 含量测定：在276nm下测定A含量计算： （A= E1%cmCL） C% = A / E1%cm 样品% = A / E1%cm F/W（F = 稀释倍数和浓度换算因子 W = 取样量） 2.2.6 差示分光光度法1. 原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（A值），根据A与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。2. 方法： 一定量+酸 一定体积 （测定） A测 同样量+碱 同样体积 （参比） A参 A测A参=A样干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即A杂=0， A样只与样品浓度C呈线性关系。3.计算： DA样 C样 = DA标 C标 2.2.7 同步扫描荧光光谱法1. 同步扫描原理: 荧光光度计同步扫描时, 得到两组分互不干扰的荧光峰, 借此分别测 定两组分的含量。2. 对照液：精密称取阿司匹林对照品适量 乙醇 100ml量瓶精密量取2ml +乙醇 100ml量瓶供试品：精密量取阿司匹林注射液适量 乙醇 100ml量瓶 精密量取2ml +乙醇 100ml量瓶3. 测定： 用对照品溶液测定荧光强度与浓度的线性关系后，再在每次测定前，用一定浓度的对照品溶液校正仪器的灵敏度；然后再相同的条件下，分别读取对照品溶液及其试剂空白的荧光强度与供试品溶液及其空白的荧光强度4. 计算： RXRXb CX = * Cr RrRrb （CX和 Cr为供试品溶液、对照品溶液的浓度，RX供试品溶液荧光强度，RXb供试品溶液试剂空白的荧光强度，Rr对照品溶液的荧光强度，Rrb为对照品溶液的试剂的空白荧光强度） 2.2.8 电极法测定电极制备：1. 三苄基锡辛酸酯20mg + 聚氯乙烯（PVC）033g + 增塑剂邻硝基苯基辛醚o65g四氢呋喃（THF）3g 水平玻璃板(40 mm40 mm) PVC膜2. 切下直径10 mm的圆片并用含5PVC的THF溶液粘于PVC电极杆端,放置数小时,晾干后电极杆内充以0.1molL的水杨酸钠溶液作为内参比溶液并以AgAgCl丝作为内参比电极导出至离子计。方法： 1. 将适量药品(10片)研制成粉状 精密称取115g 在0.5molL NaOH溶液25m1中加热回流1h后过滤 250 ml量瓶 吸取lOm1滤液 用稀硫酸调至pH 55 再用PH 55的磷酸盐缓冲液定容至100 mI作为待测液。2. 使用所配电极通过标准溶液法和样品加入法分别测定药品A和B经前述处理后所得试样中的水杨酸根离子浓度 2.29 近红外法2.2.9 近红外法简介：近红外漫反射光谱是一种简便、快速的有机物分析方法, 样品不需处理即可直接测量, 易于实现固态样品的非破坏测定. 用近红外漫反射光谱法进行药品的非破坏性分析正成为国际热门课题. 原理： 近红外定量分析需要一个待测成分已知的标准样品集(简称标样集)，根据标样集中样品的近红外光谱运用化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测成分之间的数学关系(简称数学模型)。当测定未知样品时，只需测定该样品的近红外光谱，然后用已建好的数学模型预测出待测成分的含量实验方法：用11000扭力天平准确称取不同比例的精氨酸阿司匹林与蔗糖酯，共10份，分别混合均匀，用压片机压片，得到精氨酸阿司匹林含量不同的片剂(以此含量做为精氨酸阿司匹林片的理论含量一真值)，每种各100片。从每种100片中随机选取10片，用仪器的漫反射光纤探头压住药片，每片正反面各测1次，取平均光谱做为样品光谱。扫描区间为4000-11000cm-1，分辨率为8cm-1。用Bruker公司Bruker公司quant/2软件分析，光谱数据采用加性散射校正预处理，以消除药片表面不同引起的误差，即可得到测量值。结语：阿司匹林含量测定方法众多，其制剂和原料药所用的方法也各不相同，同一制剂或是原料药在体内和体外的测定方法也不相同，但它们的方法都有一个共同点，HPLC分析中，检测柱一般多采用C18柱，检测波长为280左右。滴定法都是根据药物中含游离羧酸的酸性进行滴定，或水解后用酸回滴。其他以数学模型等方法进行的测量，也都是基于阿司匹林的化学结构和性质。参考文献:1 刘文英.药物分析.第六版.北京:人民卫生出版社，20102尧睿RPHPLC法测定小剂量阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的含量J临床医药研究，2007，24(7)：1168