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文档简介

考马斯亮蓝G 250染色法测定蛋白质含量 实验目的 学习掌握考马斯亮蓝G 250法测定蛋白质含量的原理和方法 实验原理 考马斯亮蓝G 250在游离状态下呈红色 与蛋白质结合则呈现蓝色 染料的最大吸收从465nm变为595nm 蛋白质 染料复合物具有很高的消光系数 因此蛋白质测定的灵敏度较高 最低检出量为1 g蛋白质 特点 1 染料与蛋白质的结合 大约只需2分钟 结合物的颜色在1小时内是稳定的 2 一定范围内 溶液在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比 可用比色法测定 3 一些阳离子 如K Na Mg2 NH4 2SO4 乙醇等物质不干扰测定 但去污剂如Tritonx 100 SDS等严重干扰测定 少量的去污剂可通过用适当的对照消除 优点 试剂配制简单 操作简便快捷 灵敏度高 重复性好 显色迅速 干扰物质较少 测定范围1 100 g 实验仪器及试剂 1 仪器 722分光光度计 天平 试管 移液管 离心机 2 试剂 1 标准牛血清蛋白质溶液 100 g mL牛血清蛋白 2 考马斯亮蓝G 250溶液 称取100mg考马斯亮蓝G 250 溶于50mL90 的乙醇中 加入100mL85 W V 的磷酸 再用蒸馏水定容至1L 贮于棕色瓶中 常温下可保存一个月 3 生理盐水 称取0 9gNaCl加蒸馏水至100ml 实验步骤 1 组织样品的制备 准确称取新鲜样品0 5g 用5mL生理盐水在冰浴中研成匀浆 在3500rpm离心10min 取上清液待测 2 血清样品的稀释取血清 l 加生理盐水至 表1不同蛋白质含量的牛血清蛋白质溶液配制表试剂管号1234567标准蛋白质溶液00 10 20 30 40 50 05 100 g mL 生理盐水 mL 1 00 20 80 70 60 50 95G 250试剂 mL 3333333蛋白质含量 g 0
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