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文档简介
形成单链DNA 新的DNA分子 形成重组DNA分子 黏性末端或平末端 形成产物 碱基对间的氢键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 作用部位 DNA分子 脱氧核苷酸 DNA分子片段 DNA分子 作用底物 解旋酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 限制酶 比较项目 为使目的基因与载体形成的相同DNA片段末端能够连接 通常使用同一种限制酶将二者切割 但如果不同的限制酶切割DNA分子所产生的末端也存在互补关系时 则两末端也可连接 对象要求 选择限制酶切割目的基因时 被选择的限制酶在目的基因的两侧都要有识别序列 这样才能切割出完整的目的基因 数量要求 限制酶切割位点所处的位置必须在标记基因外 只有这样才能保证标记基因的完整性 位置要求 过程 逆转录法 化学合成法 从部分基因文库 如cDNA文库中获取 从基因组文库中获取 人工合成 从基因文库中获取 方法 当温度上升到90 以上时 双链DNA解聚为单链 变性 图解 说明 过程 72 左右时 TaqDNA聚合酶有最大活性 可使DNA新链由5 端向3 端延伸 延伸 温度下降到50 左右 两种引物通过碱基互补
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