纤溶性疾病的实验室检查课件

纤溶性疾病的实验室检查 华西检验系彭黎明 一 纤溶系统二 纤溶系统的实验室检查三 纤维蛋白溶解综合征四 纤维蛋白溶解综合征的实验室检查五 纤溶系统的筛选试验 一 纤溶系统 一 定义P283 二 纤溶系统的组成及特点 三 纤维蛋白 原 溶解机制 四 纤溶系统的调控 一 纤溶系统凝血系统抗凝血系统纤溶系统纤溶抑制系统 一 定义 图 纤溶系统或纤维蛋白溶解系统 fibrinolyticsystem 是指纤维蛋白溶酶原 PLG 简称纤溶酶原 经其特异的激活剂作用后转变成纤溶酶 PL 以及纤溶海降解纤维蛋白 原 和其他蛋白质的过程 图纤溶系统组成及其作用 PA t PA u PA PAI1 2 3PLGPL AP MG C1INHFb FIB FDP 二 纤溶系统的组成及特点纤溶酶原 plasminogen PLGorPG 纤溶酶 plasmin PL 纤溶酶原激活物 plasminogenactivitor PA 纤溶系统抑制剂 fibrinolyticsysteminhibitor 1 纤溶酶原 plasminogen PLGorPG Glu PLG Lys PLG2 纤溶酶 plasmin PL 作用 1 降解FIB和Fb 2 水解多种凝血因子 XII 3 Glu PLG Lys PLG 4 水解血浆蛋白和补体 5 使sct PA scu PA转变为tct PA tcu PA 6 降解GP b b a 7 激活TGF 8 降解基质蛋白 Fn La TSP 9 激活某些前激素如前胰岛素等 3 纤溶酶原激活物 plasminogenactivitor PA 1 组织型纤溶酶原激活物 tissuetypeplasminogenactivator t PA 2 尿激酶型纤溶酶原激活物 urokinasetypeplasminogenactivator u PA 3 激肽释放酶 kallikrein K K 4 高分子量激肽原 highmolecularweightkininogen HMWK 5 链激酶 streptokinase SK 6 尿激酶 urokinase UK 7 F a 4 纤溶系统抑制剂 1 纤溶酶 原 抑制剂 2 PI 2 plasmininhibitor 2 AP 2 antiplasmin MG macroglobulin TAFI thrombinactivatedfibrinolysisinhibitor 图 PCI APCI proteinCinhibitor APCinhibitor 2 纤溶酶原激活物抑制剂 PAI1 2 3 plasminogenactivatorinhibitor1 2 3 PAI1结构图 3 纤溶系统的组成 图 表 图TAFI对纤溶的调控 APCI FVa FVIIIa PAI 1蛋白CEPCR活化蛋白C FXa PL PLT PC APC IIa TM AT III与IIa结合PS图蛋白C系统及其调节和作用 图PAI I结构图 纤溶系统示意图 表纤溶系统的重要组成成分及作用成份MW kD AA产生部位主要作用血浆浓度激活成分 mg L PG93 92 791 790 肝PLG PL100 200 t PA68530 547 内皮细胞PLG PL0 005 u PA54411泌尿生殖PLG PL0 002 上皮细胞0 02抑制成分 2 AP70 67 452肝抑制纤溶酶70 PAI 152 54 397内皮细胞抑制纤溶活化剂0 02 PAI 247 60 393胎盘抑制纤溶活化剂 0 005PCI57肝抑制纤溶酶5TAFI14 35肝内源性纤溶抑制物974U L MG7252902肝广谱蛋白酶抑制物2500 三 纤维蛋白 原 溶解机制 1 纤溶系统激活途径 图 2 内激活途径 继发性纤溶的理论基础外激活途径 原发性纤维的理论基础外源激活途径 溶栓治疗的理论基础2 纤维蛋白 原 的降解机制 图 3 3 纤维蛋白 原 降解产物的作用 图纤溶酶原激活的三条主要途径 图纤溶酶原激活的三条主要途径 图纤溶系统的激活与抑制 图PL降解纤维蛋白过程 FIBfragmentX fragmentA B C HfragmentYfragmentDfragmentDfragmentE图PL降解FIB的过程 PL PL PL FIB非交联Fb交联FbA 链极附属物A 链极附属物A 链极附属物多聚体 A B C H A B C H D dimerB 1 42B 15 42复合物1 2 3X Y D EX Y D E X Y D E 图纤维蛋白 原 的降解过程及其产物 FPAFPB IIa Ia PL PL PL 3 纤维蛋白 原 降解产物的作用 FDP 抗血液凝固 碎片X X 竞争凝血酶 碎片Y Y 抑制FM聚合 碎片D D 抑制FM聚合 碎片E E 竞争凝血酶 极附属物A B C H 延长APTT CT 四 纤溶系统的调控 激活剂 t PA是启动纤溶过程的关键性因子 抑制剂 纤溶酶抑制剂 AP 纤溶酶原激活物抑制剂 PAI1 2 3 TAFI thrombinactivatedfibrinolysisinhibitor 对纤溶的调控 二 纤溶系统的实验室检查 一 纤溶酶 原 及其激活剂t PA A Ag PLG A Ag 二 纤溶抑制物PAI 1 2 A Ag 2 AP A AgTAFIHRG histidine richglycoprotein 富含组氨酸糖蛋白 三 纤维蛋白 原 降解产物SFM solublefibrinmonomer FDPs fribrin ogen degredationproducts D dimer Fribrin ogen degredationproductionfragmentA EFibrinpeptideB 1 42 B 15 42 一 纤溶酶 原 及其激活剂1 t PA A t PAactivity 方法I 发色底物法 原理PLGPL FbS PNAPNA substrate 参考值 300 600U ml 方法II 琼脂平皿法 405nm比色 t PA 原理PLGPLFbFIBFDP 溶解圈 参考值 与正常对照比较2 t PA Ag t PAantigen 方法 ELISA t PA IIa 原理antit PA 已知 t PA antit PA POX antit PAPOX antit PA t PA antit PA棕色产物 参考值 1 5 10 5 g L 临床意义 增高 纤溶亢进 见于原发性 继发性纤溶 减少 纤溶活性减弱 见于血栓前状态和血栓性疾病 t PA S 3 PLG A 方法 发色底物法 原理PLGSK 过量 PLS PNAPNA S405nm比色 参考值 75 140 4 PLG Ag 方法 ELISA 原理 参考值 0 22 0 03g L 临床意义 增高 纤溶活性减低 见于血栓前状态和血栓性疾病 减少 纤溶活性增高或先天性PLG缺乏症 二 纤溶酶抑制物1 PAI 1 A 方法 发色底物法 原理PAI 1 t PA 过量 定量 PLG PAI 1 t PA t PA 剩余 PLS PNAPNA S405nm比色 参考值 100 1000IU L 临床意义 增高 纤溶活性减低 见于血栓前状态和血栓性疾病 减少 纤溶活性增强或先天性PAI 1缺乏2 PAI 1 Ag 方法 凝胶电泳法 原理PAI t PA 过量 定量 PAI t PA SDS PAGE 参考值 1U ml 临床意义 同PAI 1A测定3 2PI A 方法 发色底物法 原理 竞争抑制试验 参考值 800 1200IU L 临床意义 增高 纤溶活性减低 见于血栓前状态和血栓性疾病 恶性肿瘤 减低 纤溶活性增加或先天性 2 PI缺乏症 CRM crossreactingmaterial 2PI A AgN CRM 2PIA Ag 4 2PI Ag 方法 ELISA 原理 双抗夹心 参考值 1500 300IU L 临床意义 与 2 PI A相同5 TAFI 方法 ELISA 原理 双抗夹心 参考值 tobesetup 临床意义 与 2 PI A相似 增高 纤溶活性减低 见于血栓前状态和血栓性疾病 减低 纤溶活性增高 见于原 继发纤溶 6 HRG 方法 ELISA 原理 双抗夹心 HRG功能 抑制PLGPL 参考值 100 500mg L 临床意义 与 2 PI A相似 增高 纤溶活性减低 见于血栓前状态和血栓性疾病 减低 纤溶活性增高 见于原 继发纤溶 三 纤维蛋白 原 降解产物 1 可溶性纤维蛋白单体 SFM 方法 血浆鱼精蛋白副凝试验 3P试验 plasmaprotamineparacoagulationtest 3Ptest 原理SFM FbDPSFM FbDPaggregation protamine 参考值 一 临床意义 阳性 DIC的早 中期 但假阳性率高 阴性 正常人 DIC晚期 原发性纤溶症2 纤维蛋白 原 降解产物 FDPs 方法 ELISA 原理 参考值 血浆38 11 25 6mg L尿28 17 g L 临床意义 增加 反映纤溶活性增强 见于原发性和继发性溶症 3 D dimer 方法I 胶乳凝集法 稀释法 半定量 原理Anti D dimer latexparticleD dimerAggreguation when 0 5 g ml 参考值 结果判断 见表表乳胶凝集法测定D dimer结果判断未稀释1 5稀释D dimer g ml 结果1 3 0 方法II ELISA 原理 参考值0 13 0 03mg L g ml 临床意义 增高 DIC诊断的重要指标 N 正常人或原发性纤溶症4 FDPs E 方法 ELISA 原理 参考值 0 45 0 3ng L 临床意义 增高 原发性和继发性纤溶及溶栓治疗 5 纤维蛋白 原 极附属物A碎片 FDPA 方法 RIA radioimmunoassay 原理 参考值 3 57 1 62mg L 临床意义 增高 纤溶系统的激活 见于原 继发性纤溶亢进或溶栓治疗6 纤维蛋白肽B 1 42和B 15 42 fibrinpeptideB 1 42 B 15 42 方法I ELISA 原理 参考值 B 1 42 6pmol ml nmol L 方法II HPLC 原理SampleStandard B 1 42 B 15 42 HPLCHPLC 参考值 B 1 420 74 2 24nmol LB 15 421 56 1 20nmol L 临床意义 B 1 42增高 原发性纤溶活性增强 B 15 42增高 继发性纤溶活性增强 两者减低 PLG异常症PAI过多 四 纤溶系统实验室检查项目小结 表 表 纤溶系统实验室检查项目小结 1 表 纤溶系统实验室检查项目小结 2 表 纤溶系统实验室检查项目小结 3 三 纤维蛋白溶解综合征 fibrinolyticsyndrome 一 原发性纤溶症 primaryfibrinolysis 1 定义 由于纤溶酶原激活物 t PA u PA 增多而导致纤溶系统活性增强所引起的疾病 2 实验室特征 血浆FIB和多种凝血因子降解 其含量及活性 血浆PLG减低 PL活性 PAI 2 PI FbB 1 42 3 临床特征 穿刺部位或手术创面的渗血难止 皮肤大片瘀斑 粘膜和内脏出血过多4 常见疾病 引起纤溶酶原激活物 t PA u PA 增多或活性增强的疾病 引起纤溶酶抑制物 PAI 2 PI 减少或活性减低的疾病 二 继发性纤溶 secondaryfibrinolysis 主要见于DIC的继发性纤溶期1 DIC的实验诊断 实验诊断标准 在临床疑及DIC的条件下 如上述7项指标中有3项符合 即可考虑确诊DIC 血小板计数 50 109 L或呈进行性下降 血浆纤维蛋白原低于1 5g L或3 6日内进行性下降 3P试验 D dimer阳性或FDP高于20 g ml PT缩短或延长3秒以上 或呈动态性变化 外周血破碎红细胞超过10 血沉 15mm 小时 血凝块静置两小时内出现溶解现象 血凝块变小 或完整性破坏 或血块周边血清呈玻璃样混浊 2 DIC的前期诊断 表 三 原发性与继发性纤溶的鉴别实验诊断 表 P329 表 DIC的前期实验诊断项目结果TF FM FPA 2 0nmol L TAT 4 0mg L B 15 42 1 0nmol L D dimer 3 0mg L AT 60 PLT FIB 进行性减低 APTT 表 原发性与继发性纤溶亢进的鉴别 项目原发性纤溶继发性纤溶1 血小板因素PLTN TGN PF4N P selectinN 2 凝血因子F1 2N FPAN SFMCN 3 纤溶系统PAPN D dimerN B 1 42 NB 15 42N 四 纤维蛋白溶解综合征的实验室检查 一 PLT及其成分 二 凝血因子的分子标志物 三 纤溶系统分子标志物 一 PLT及其成分 1 PLT2 血小板球蛋白 thromboglobulin TG 3 血小板因子4 plateletfactor4 PF4 方法 ELISA 原理 参考值 TG16 4 9 8 g LPF43 2 2 3 g L 临床意义 增高 反映PLT被激活及其释放反应亢进 见于血栓前状态或血栓性疾病 减低 见于先天性或获得性贮存池病 4 血小板P selectin GMP 140 方法 ELISA 原理 利用抗P selectin的单抗定量测定受检血浆内P selectin含量可反映体内PLT的破坏程度 检测受损PLT表面P selectin可反映血小板的激活程度 参考值血浆P selectin 9 4 20 8 g L血小板表面P selectin 9000 1000分子数 血小板 临床意义 增高 见于急性心肌梗塞 DIC PTS 二 凝血因子的分子标志物 分子标志物定义 在某些因素的作用或刺激下 血管内皮细胞 血小板 凝血因子 抗凝蛋白和纤溶成分 在它们的活化或代谢过程中发生了改变 表现出某些特征或释放出某些产物 这些特征或产物称为分子标志物1 血浆F1 2 prothombinfragment1 2 方法 ELISA 原理 参考值 0 67 0 19nmol L 临床意义 增高 凝血活性增强见于DIC D