实验详细计划安排.doc

实验详细计划安排 实验详细计划安排第一部分粉体本身性质测试如孔隙率，表面能，粒度，及化学成分等；料水=1:5，浸泡6小时后，测滤液中Fe,Mn,Cu,Zn,N,P,B各元素的含量。 第二部分吸附及缓释1.吸附时间对各粉体中NH4+吸附量的影响称取5g碳酸铵溶于1L纯水中，再称取5g各粉体（6份）加入到100ml上述溶液中，于室温下置振荡器上分别振荡10min，20min，30min，40min，50min，60min，离心并取出上清液，采用碱性过硫酸钾紫外分光光度法测上清液中总氮的含量。 确定吸附平衡所需的时间。 2.NH4+初始浓度对各粉体中NH4+吸附量的影响配置不同浓度的碳酸铵溶液，它的初始浓度分别为(g/L)1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0，称取5g各粉体（6份）加入到100ml上述溶液中，室温下置振荡器上振荡2.得到的时间，离心并取出上清液，采用碱性过硫酸钾紫外分光光度法测上清液中总氮的含量。 确定各粉体对NH4+吸附达饱和时所对应碳酸铵溶液的浓度。 3.缓释性能研究按以上方法确定的吸附时间及确定的凹凸棒石饱和吸附NH4+时碳酸铵溶液的浓度，制备饱和吸附NH4+的功能粉体，在不同的解吸液和解吸条件下对功能粉体进行解吸。 4.1静态摇床解吸综合考虑土壤的酸碱度、天然降雨和土壤中往往会存在一定浓度的Ca+和Mg+等方面的因素，首先配置PH=5的盐酸溶液，其次配置不同浓度的混合溶液（Ca+Mg+其中Ca+和Mg+摩尔数各一半），2mmol/L,4mmol/L,8mmol/L,12mmol/L,20mmol/L,30mmol/L，即称取氯化镁和氯化钙的质量分别为(0.095g0.111g),(0.19g0.222g),(0.38g0.444g),(0.57g0.666g),(0.95g1.11g),(1.425g1.665g)，溶于1L纯水中，再称取5g功能粉体（6份），分别加入50ml上述6种解吸溶液，振荡，各样品均在间隔5min,10min,15min,25min,40min,60min进行离心，并取出全部上清液，再加入50ml相同的解吸溶液，共进行10次，测定各离心液中总氮的浓度。 4.2动态解吸首先自制动态淋滤装置，其中淋滤柱直径为2.8cm,高20cm，从淋滤柱底部网上依次是两层纱布5g石英砂两层纱布10g功能粉体两层纱布5g石英砂，顶部密封，解吸液（同4.1），装入输液瓶挂号，用医用输液管将输液瓶和淋滤柱相连，淋滤柱底部放容量瓶，接渗漏下来的林滤液，每50ml更换一次，连续10次，测定各容量瓶滤液中的总氮含量。 4.3各指标的计算4.3.1吸附量qe=(C0C)*V/m式中qe为吸附量/103；C0为碳酸铵的初始浓度/mg/L；C为吸附平衡时的碳酸铵浓度/mg/L；V为吸附时加入碳酸铵溶液的体积/L；m为吸附时粉体的质量/g。 4.3.2解析量qdi=(Ci*Vi)/m qd=qdi式中qdi为第i次解吸量/103；Ci为第i次滤液中总氮的浓度/mg/L；Vi为第i次解吸时加入解吸液的体积/L；qd为总解吸量；i为110；m为功能粉体的质量/g。 4.3.3解吸率W=qd/qm式中W为解吸率/%；qd为总解吸量/103；qm为最大吸附量/103第三部分盆栽实验1.校花园内土壤理化性状测试测定土壤的有机质、pH值、速效磷、全盐量、铵态氮、速效钾，脲酶。 2.实验设置10个处理，A:空白，B:A+尾矿1号，C:A+尾矿2号，D:A+尾矿3号，E:A+炉渣，F:A+尿素，G:B+尿素,H:C+尿素,I:D+尿素,J:E+尿素。 称取同样质量各混个均匀的试样材料装入花盆中，然后加入去离子水，接着进行播种，油菜穴播，播深1.52厘米，每盆5穴，每穴3粒，至三叶期间并定苗，每盆留5株壮苗。 实验期间每隔12天浇水一次，3个月后收获。 称取其鲜重以及量取株高，以考察肥效。 3.生理化指标测定取同一位点生长健壮的叶片测定叶绿素、蛋白质、可溶性糖、丙二醛、脯氨酸和过氧化氢酶等指标，重复3次。 3.1叶绿素测定3.3.1取长势较好的叶片，剪成宽度小于1mm的细丝，冻于零下80备用，称取1.25g放入研钵中。 注意取样时要避开大的叶脉。 3.3.2向研钵中加入80%丙酮2.5ml，以及少许（约0.002g）CaCO3和石英砂，研磨成匀浆，再加入3ml80%丙酮，继续研磨至组织变白，在暗处静止35min后，用一层干滤纸过滤到25ml容量瓶中，用滴管吸取80%丙酮将研钵洗净，清洗液也要过滤到容量瓶中，并用80%丙酮沿滤纸的周围洗脱色素，待滤纸和残渣全部变白后，用80%丙酮定容至刻度。 3.3.3找10mm比色皿，先用少量色素提取液清洗23次，然后将色素提取液倒入比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5，将撒在比色皿外面的溶液用滤纸洗掉，再用镜头纸擦干净。 将比色皿放入仪器的比色皿架上，注意不要将溶液撒入仪器内。 第一个位置放盛有80%丙酮的比色皿作为空白对照。 将仪器的波长分别调至 663、645nm处，分别测定吸光度。 重复三次3.3.4总叶绿素的浓度Ct=20.29D645+8.02D663(浓度单位mg/L）叶绿素含量Chl(mg/g叶)=Ct(mg/L)提取液总量（L）稀释倍数/材料鲜重（g）3.4可溶性糖3.4.1称取0.1g分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100ml，使用时稀释10倍，也就是吸取10ml，用去离子水稀释至100ml3.4.2称取1g蒽酮，溶于溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解；3.4.3剪碎的叶片称取0.2g，放入刻度试管中，加入8ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取两次，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至20ml。 3.4.4取6支试管，分别加入葡萄糖溶液（ml）0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0，然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡,，立即将试管放入沸水浴中，沸水保温1min，自然冷却，630nm波长下测其吸光值，求其糖含量。 3.4.5吸取样品提取液0.5ml，加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡,，立即将试管放入沸水浴中，沸水保温1min，自然冷却，630nm波长下测其吸光值。 3.3.6可溶性糖含量（%）（C*Va*n）（W*106）式中C标准方程求得糖量（g）a吸取样品液体积(ml)；V提取液量(ml）；n稀释倍数；W组织重量（g）。 3.5丙二醛3.5.1配置10%的三氯乙酸（TCA）3.5.2配置巴比妥酸（TBA）溶液用10%TCA（三氯乙酸）配置0.6%的TBA溶液。 3.5.2称取剪碎的叶片1g，加入10%三氯乙酸2ml和少量石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA充分研磨，将匀浆液倒入试管中，静置20min，然后提取上清液，上清液即为样品提取液。 3.5.3吸取2ml提取液，加入2ml0.6%TBA液，混匀，置于沸水浴中15min，迅速冷却，静置。 取上清液测定 532、450nm波长下的消光度。 3.5.4计算C1=0.01171A450C2=6.45106A5320.56106A450式中C1为蔗糖与TBA反应产物的浓度，单位是mol/L；C2为丙二醛（MDA）与TBA反应产物的浓度，单位是mol/L。 3.6脯氨酸3.6.1称取2.5g茚三酮溶于60ml冰醋酸和40ml6mol/L的磷酸中，加热（约70）溶解，配置3%磺基水杨酸溶液3.6.2称取0.025g脯氨酸溶于少量80%乙醇中，再用蒸馏水定容至250ml，再取此液10ml，用蒸馏水稀释至100ml，即成10ug/ml的脯氨酸标准液。 3.6.3称取剪碎的叶片0.5g，放入大试管中，加入3%磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。 冷却至室温后。 上清液备用。 3.6.5吸取脯氨酸标准液 0、0. 2、0. 4、0. 8、1. 2、1. 6、2.0ml分别放入7支具塞试管中，分别加入蒸馏水至2ml，其脯氨酸含量分别为 0、2. 0、4. 0、8. 0、12. 0、16. 0、20.0ug。 分别吸取上述标准溶液2ml，加冰乙酸2ml，茚三酮试剂3ml，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热40min，冷却后向各管中加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。 静置待分层后吸取甲苯层在波长520nm下比色测定消光度，零浓度为空白对照。 3.6.6取2ml上清液（3.6.3）置于试管中，加2ml冰乙酸和3ml茚三酮溶液，于沸水浴中加热40min，冷却后向各管中加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。 静置待分层后吸取甲苯层在波长520nm下比色测定消光度，零浓度为空白对照。 3.7过氧化氢酶高锰酸钾容量法3.7.5称取0.39鲜样，置研钵中，加入3ml4下预冷的pH=7.8磷酸盐缓冲溶液和少量石英砂研磨至匀浆，再加入5ml缓冲溶液继续研磨均匀，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。 混合均匀，将量瓶置4冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000r/min离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，转入试管放入4冰箱备用。 取50ml三角瓶2个，1个做样品管一个做对照管，在对照瓶中，依次加入1mL酶提取液、1.5mL缓冲溶液、2.5mL8%硫酸和过氧化氢2.5mL。 在样品瓶中依次加入1mL酶提取液、1.5mL缓冲液和2.5mL过氧化氢溶液后立即计时，4min后加入2.5mL硫酸。 然后将对照和样品分别用高锰酸钾溶液滴定至紫红色保持30s不褪色为终点。 对照与样品消耗的高锰酸钾溶液体积之差所相当的过氧化氢的量即为被酶促反应所分解的过氧化氢的量。 则植物过氧化氢酶活性为E（mg H2O2/ming）=3.7.1配置磷酸盐缓冲溶液（pH=7.8）称取65.52g Na2HPO412H2O（分析纯）、2.66g NaH2PO42H2O（分析纯）、10g聚乙烯吡咯烷酮（PVP，分析纯），用约900mL蒸馏水溶解，检查pH值后定容至1000mL。 3.7.2配置过氧化氢溶液吸取30%过氧化氢（分析纯）1.5ml，用蒸馏水定容至100ml，用高锰酸钾标定其准确浓度。 该溶液的浓度为5.4026mg/mLH2O2。 3.7.38%硫酸吸取40mL分析纯浓硫酸缓慢加入约350mL蒸馏水中，冷却后定容至500mL。 3.7.4高锰酸钾溶液称取分析纯高锰酸钾3.16g，溶解后定容至1000mL，其准确浓度用草酸钠标定。 经标定该溶液浓度为0.0990mol/L1/5H2O2。 3.7.5称取0.39鲜样，置研钵中，加入3ml4下预冷的pH=7.8磷酸盐缓冲溶液和少量石英砂研磨至匀浆，再加入5ml缓冲溶液继续研磨均匀，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。 混合均匀，将量瓶置4冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000r/min离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，转入试管放入4冰箱备用。 3.7.6取6支小试管，分别加入过氧化氢（ml） 0、0. 1、1. 2、0. 3、0. 4、0.5，用蒸馏水定容至1.5ml，加入1.5ml缓冲溶液，1ml8%硫酸，摇匀后在240nm处以零浓度管调零，测其他管的吸光度。 3.7.8取小试管2支，一支作对照管，另一支作样品管。 对照管1.5ml缓冲溶液、0.1ml酶提取液、1.2ml蒸馏水、1ml8%硫酸、0.2ml过氧化氢溶液。 样品管1.5ml缓冲溶液、0.1mL酶提取液、1.2mL蒸馏水，然后加入0.2ml过氧化氢溶液，立即计时4min后加入1mL硫酸终止反应。 然后在240nm处以蒸馏水调零，分别测定样品管与对照