高二生物DNA的粗提取与鉴定课件人教版选修一.ppt

复习巩固 1 如何观察dna和rna在真核细胞中的分布情况 2 真核细胞dna的主要存在场所 3 证明dna是遗传物质的三个经典实验 4 dna分子双螺旋结构模型的提出者是谁 5 dna分子双螺旋结构模型的主要特点 1 dna分子由两条链组成 这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构 2 dna分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接 排列在外侧 构成基本骨架 碱基排列在内侧 3 dna分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对 专题5 dna和蛋白质技术 课题1 dna的粗提取和鉴定 1 你所知道的生物大分子有哪些 2 如何来提取生物大分子 3 提取dna的基本思路是什么 4 可以将dna溶解于水和其他物质分离开来的方法吗 学生活动1 一 基础知识 根据dna在nacl溶液中的溶解度曲线图 思考在什么浓度下 dna的溶解度最小 dna在nacl溶液中的溶解度是如何变化的 dna在nacl溶液中的溶解度曲线图 在nacl溶液浓度低于0 14mol l时 dna的溶解度随nacl溶液浓度的增加而逐渐降低 在0 14mol l时 dna溶解度最小 当nacl溶液浓度继续增加时 dna的溶解度又逐渐增大 如何通过控制nacl溶液的浓度使dna在盐溶液中溶解或析出 当氯化钠的物质的量浓度为2mol l时 dna的溶解度最大 浓度为0 14mol l时 dna的溶解度最低 利用这一原理 可以使dna在盐溶液中溶解或析出 1 dna能溶于酒精溶液吗 2 细胞中的其它物质呢 3 由此你想到了什么 4 dna对酶 高温和洗涤剂的耐受性 学生活动2 二 实验方法及注意事项 一 实验材料的选取 1 材料 鱼卵 猪肝 菜花 香蕉 鸡血 哺乳动物的红细胞 猕猴桃 洋葱 豌豆 菠菜 在液体培养基中培养的大肠杆菌 从中选取2 3种实验材料 2 原则 凡是含有dna的生物材料都可以考虑 但选用dna含量相对较高的生物组织 成功的可能性更大 二 破碎细胞 获取含dna的滤液 学生活动3 1 怎样使鸡血细胞破裂 原理是什么 2 如果实验材料是植物细胞又该如何处理 3 加洗涤剂和食盐的作用是什么 4 提取洋葱dna时 在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐 进行从分的搅拌和研磨 过滤后收集研磨液 如果研磨不充分 会对实验结果产生怎样的影响 三 去除滤液中的杂质 探究活动4 1 此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分 2 为了纯化提取的dna需要将滤液作怎样的进一步处理 3 为什么反复地溶解与析出dna 能够去除杂质 4 方案二和方案三的原理有什么不同 四 dna的析出与鉴定 学生活动4 3 如何鉴定dna分子 应注意什么 根据你前面所学的知识 还可以用什么物质来鉴定 2 纯的dna应该是什么颜色 1 怎样使鸡血细胞破裂 原理是什么 1 制鸡血细胞液 活鸡鲜血经分离或沉淀获得 500ml烧杯中 玻棒搅拌 离心 分离或静置沉淀 2 提取dna 取血细胞5 10ml 20ml蒸馏水 用玻棒沿一个方向快速搅拌 纱布过滤 滤液中含dna和其他核物质 如蛋白质 提取血细胞核物质 溶解核内的dna 滤液 2mol l的nacl溶液40ml 玻棒沿一个方向轻缓搅拌 三 实验步骤 析出含dna的粘稠物 滤取含dna的粘稠物 dna粘稠物的再溶解 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水 并沿一个方向轻轻搅拌 出现丝状物 当丝状物不在增加时 停止加水 此时nacl溶液的浓度相当于0 14mol l 用多层纱布过滤 含dna的粘稠物留在纱布上 在20ml烧杯中轻缓搅拌3min 使尽可能多的dna溶解在nacl溶液 过滤含有dna的nacl溶液 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤 所得的溶液 滤液中含有dna 提取含有杂质较少的dna 步骤 所得的滤液 体积分数为95 的冷却酒精50ml 用玻棒沿一个方向轻缓搅拌 溶液中 析出 出现乳白色丝状物 用玻棒将丝状物卷起 并用滤纸吸取上面的水分 3 dna的鉴定 加入二苯胺试剂4ml 用玻棒搅拌使dna溶解 沸水浴5min 观察溶液是否出现浅蓝色 1 共有 三次过滤 两次析出 七次搅拌 2 加入 两次蒸馏水 三次nacl溶液 一次酒精 三 实验小结 四 实验原理拓展介绍 1 dna的释放 dna主要在鸡血细胞的细胞核内 正常情况下不会释放出来 蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液 水分可以大量进入血细胞 使之胀破 同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用 加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂 但释放出来的大量dna与rna 蛋白质结合在一起 即释放的不是纯净的dna 常称为dna核蛋白 2 dna与蛋白质分离 在高浓度 2mol l 的氯化钠溶液中 核蛋白易溶解 析出dna并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3 dna的析出与获取 因为dna在低浓度 0 14mol l 的氯化钠溶液中溶解度小 而蛋白质的在其中的溶解度大 所以在向含dna的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液 从而使dna溶解度下降 蛋白质溶解度增高 4 dna的再溶解 用高浓度 2mol l 的氯化钠溶液再溶解dna粘稠物 5 dna的沉淀和浓缩 对于除去了蛋白质的dna的氯化钠溶液 必须再进一步沉淀和浓缩 常用酒精沉淀法 即往含有na 的dna溶液 加入体积分数为95 的冷却酒精 混匀后可以使dna沉淀 浓缩 形成含杂质较少的dna丝状物 悬浮于溶液中 若丝状物较少 可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可 浓缩后的dna丝状物可以用玻棒 玻棒有吸附dna的作用 缓缓旋转的方法卷起 6 dna的鉴定 鉴定时蓝色的深浅与溶液中dna的含量多少有关 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂 溶解dna 使2mol l的nacl溶液稀释至0 14mol l使得dna最大限度地释出 使含dna的黏稠物被留在纱布上 使含dna的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 除去含dna的滤液中的杂质 提取dna a出现蓝色b无变化 2 实验中nacl的物质的量浓度为2mol l和0 14mol l对dna有何影响 1 在dna的粗提取实验过程中 两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是 a 稀释血液 冲洗样品b 使血细胞破裂 降低nacl浓度使dna析出c 使血细胞破裂 增大dna溶解量d 使血细胞破裂 提取含杂质较少的dna 答 b 答 前者是溶解