生化分析携带污染的发现与排除参考幻灯片.ppt

生化分析携带污染的发现与排除 1 携带污染的来源 测试项目A试剂针 比色杯等试剂成分残留干扰下一个测试项目B 2 引起携带污染的原因 原因一生化仪的发展变化 多项目 多样本处理 处理能力的提高 高速化 共有化 样本针 试剂针 比色杯 搅拌棒携带污染 3 原因二生化仪状态不良 使用不当 清洗力的低下 日常维护欠缺 仪器老化 生化仪内污垢的积聚 测试顺序安排不当常规清洗不能有效的消除污染携带污染 4 主要内容 1 试剂针携带污染 2 样本针携带污染 3 比色杯携带污染 4 搅拌棒携带污染 5 携带污染的消除 5 一 试剂针携带污染 原因一全自动生化分析仪一般采用双试剂针 即所有项目的一试剂都共用试剂针R1 所有项目的二试剂都共用试剂针R2 试剂针R1或R2在每吸取一次试剂后都会进行一次清洗 之后会立即吸取下一个项目的试剂 当自身清洗能力下降 试剂针在吸取试剂时会将部分残留的前项目试剂成分带入到后项目反应杯中 对后项目的检测结果造成影响 6 原因二从各个项目设置的参数可知 试剂体积量远大于样本体积量 因此试剂针携带污染影响程度会高于样本针携带污染 7 试剂针携带污染的类型 1 试剂成分间的直接影响试剂中含有下一个检测所要测定的底物 或是含有的某种试剂成分与下一反应的底物有作用 因而直接干扰下一反应的测定结果 2 试剂成分间的间接影响前一个测定试剂与后一个测定试剂反应原理相近 或者都会通过相同的中间产物 该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰 因为在有试剂污染的情况下 下一个测试所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果 8 部分常用试剂间可能产生的干扰如下 1 pH值改变 试剂中反应缓冲液之间因仪器携带污染而使下一反应的pH值改变 使下一反应达不到最佳状态 如双缩脲法测血清总蛋白 若其他条件相同 反应在碱性 pH值8 9 条件时 蛋白肽键 CONH 才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应 完全测出血清蛋白的总量 若pH 8时 总蛋白测定结果偏低 直接影响球蛋白 白蛋白 球蛋白的结果 酶活力测定在最适pH值时 反应最快 灵敏度最高 但是因为缓冲能力有限 可因携带污染使酶促反应出现无效值 大多数酶反应pH值在6 0 7 5之间 ALP GT LDH须在碱性条件下最适宜 9 2 TG T CH UA MG试剂中含有胆酸盐 对循环酶法测定胆汁酸能产生严重干扰 3 ALT IFCC AST IFCC 试剂中含有高活力LD成分 有可能会对LD的测定带来干扰 4 CK NAC activated CK MB NAC activated 试剂中含有Glu成分 其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶 HK 反应过程 因此可能对Glu测定带来干扰 尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰 10 5 Glu HK CK NAC activated CK MB NAC activated TG HDL C LDL C 直接法 等试剂中使用了镁盐 可能会对其后的Mg2 测定带来干扰 TP试剂中高浓度的Cu2 对Mg2 测定也会产生干扰 6 ChE Butyrylthiocholine TC ChOD PAP Glu GOD PAP UA Uricase HBDH DGKC 等试剂使用磷酸缓冲液 可能会对无机磷的测定带来干扰 11 7 Mg2 试剂 Calmagite 中含有EDTA成分 为Ca2 络合剂 可能对Ca2 的测定带来干扰 8 CK检测不应在ALP Ca检测之前 因CK反应液中加入EDTA Na 能抑制ALP活性 结合Ca而使结果偏低 9 BUN酶法测定因谷氨酸脱氢酶 GLDH 消耗NADH 不能放在底物NADH如ALT AST项目前检测 12 试剂针携带污染排查和发现 1 思路目前绝大部分实验室开展的生化检测项目至少都在20项以上 评价全部项目之间的携带污染会非常耗时 并且试剂成本消耗量大 且不同仪器的动作原理不完全相同 设计一个较为简单 合理的实验方法是需要重点考虑的内容 13 2 原理通过设置特定的标本检测顺序 每个样本只做一个项目的检测 可以控制不同项目的先后吸取顺序 实现任何一个项目都能与其他项目相遇 为了有效评价项目之间携带污染影响程度 污染实验所用的病人样本的混合血清应尽量包含医学决定水平浓度 14 试剂针携带污染实验方法一 1 携带污染初实验假设本次实验以A B C D E五个项目来考察各个项目之间的试剂针携带污染 先在生化仪中输入样本测试号码和选择项目 每个样本号码只选择一个项目 目的是使试剂针吸取项目的顺序完全按照样本测试号码的选后顺序进行 五个项目的测试顺序表见表1 测试完成后 将数据输入到处理表格2和表格3中 按照判断标准 寻找可能存在的污染项目组合 15 表1测试项目数为5时测试顺序安排表 16 表2各项目单独测试5次时测试结果列表 数字代表对应检测项目的测试结果 17 表3项目之间交叉列表纵向代表施污染项目横向代表受污染项目 18 携带污染实验结果分析 表3中显示了试剂之间携带污染初实验后的结果 将表格内测试顺序号代表的位置处输入该项目对应的测试结果 对每个测试顺序号下面对应的测试结果和该项目单独5次重复结果的均值相比 比值以百分比形式表示 通过观察百分比的大小来初步判断携带污染的可能性 目前的判断标准以正负百分之五作为判断标准 超过范围时怀疑有携带污染 19 2 确认实验 由携带污染初实验筛选出怀疑有污染的项目组合 假设 A B 同 D E 即A项目对B项目 A项目做好后紧接着做B项目 D项目对E项目 D项目做好后紧接着做E项目 怀疑有污染 由于初实验的项目交叉结果只是一次测试的结果 可能有偶然因素 还必须进行确认实验 20 确认实验 以 A B 为例 D E 的情况相同 先单独做A项目 紧接着连续测试3次B项目 第一个B项目的结果受A项目影响最大 第三个B项目的结果因为有2次自身冲洗 结果比较准确 比较第一个B项目检测结果同第三个B项目检测结果 如果影响百分比同初实验结果影响趋势和程度相近 可以判断A项目对B项目有携带污染 21 确认实验 AB1B2B3DE1E2E3表4携带污染确认实验 22 试剂针携带污染实验方法二 1 携带污染初实验假设本次实验以A B C D E五个项目来考察各个项目之间的试剂针携带污染 先在生化仪中输入样本测试号码和选择项目 每个样本号码只选择一个项目 目的是使试剂针吸取项目的顺序完全按照样本测试号码的选后顺序进行 五个项目的测试顺序表见表1 测试完成后 将数据输入到处理表格2和表格3中 按照判断标准 寻找可能存在的污染项目组合 23 表1测试项目数为5时测试顺序安排表 24 表2各项目测试10次时测试结果列表 数字代表对应检测项目的测试结果 25 表3项目之间交叉列表纵向代表施污染项目横向代表受污染项目 26 实验结果分析 方法二 各项目的均值如表2 计算10次测试结果的均值 并计算SD值 表3中显示了试剂之间携带污染初实验后的初步结果 a将表格内测试顺序号代表的位置处输入该项目对应的测试结果 b以 A B A项目对B项目为例 纵向施污染项目A对横向受污染项目B的交叉 对应测试序号6号 项目B的结果同B项目的 均值 3SD 比较 在范围内认为没有影响 不在范围内 则初步判断有携带污染 27 2 确认实验 由携带污染初实验筛选出怀疑有污染的项目组合 假设 A B 同 D E 即A项目对B项目 A项目做好后紧接着做B项目 D项目对E项目 D项目做好后紧接着做E项目 怀疑有污染 由于初实验的项目交叉结果只是一次测试的结果 可能有偶然因素 还必须进行确认实验 28 确认实验 以 A B 为例 D E 的情况相同 先单独做A项目 紧接着连续测试3次B项目 第一个B项目的结果受A项目影响最大 第三个B项目的结果因为有2次自身冲洗 结果比较准确 比较第一个B项目检测结果是否在B项目 均值 3SD 以内 如果影响程度和初实验结果相近 可以判断A项目对B项目有携带污染 29 确认实验 AB1B2B3DE1E2E3表4携带污染确认实验 30 二 样本针携带污染 方案一 方法 同一检测项目浓度相差较大的A标本 高浓度 B标本 低浓度 检测顺序 a1 a2 b1 b2 b3计算 Q b1 b3 a2 b3 100 评价 以Q小于10 为判断标准 31 局限性 结果与选择的标本浓度有关系例1 选择高浓度的ALT样本浓度值为2020U L 低浓度ALT样本第一次检测结果为40U L 第三次检测结果为20U L 通过计算携带污染率 Q 40 20 2000 100 1 例2 选择高浓度的Cl样本浓度值为140mm L 低浓度Cl样本第一次检测结果为86mm L 第三次检测结果为80mm L 通过计算携带污染率 Q 86 80 60 100 10 上例中 例1的携带污染率只有1 由于结果正好在医学决定水平附近 因此对临床判断有较大影响 例2的携带污染率尽管达到了10 但是对临床判断不会产生大的影响 因此 使用该方法评价样本针携带污染需考虑样本的实际浓度 32 方案二 方法 收集高浓度样本H和低浓度样本L 将高浓度样本H等体积分成10个高浓度样本 另将低浓度样本L等体积分成11个低浓度样本 总共得到21个样本 检测顺序 3L2H1L2H4L2H1L2H1L2H1L 注 顺序前的数字代表测试次数 如3L代表连续测试3个低值样本 定义 L L值为紧跟在低值标本后低值标本的结果H L值为紧跟在高值标本后低值标本的结果携带污染指标 H L 结果的平均值减 L L 结果的平均值判断标准 携带污染指标小于3SDSD是 L L 结果的SD值 33 应用举例某次实验结果如下 样本结果L LH LL130L22828L32929H11205H21210L44545H31201H41218L54343L63131L73232L83232H51224H61204L94242H71221H81218L104747H91209H101217L114040Mean29 843 4SD1 482 70 结果分析 H L均值43 4L L均值29 8携带污染指标 13 63SD 4 44携带污染指标 3SD样本针存在携带污染 34 三 比色杯携带污染 以日立7600P模块为例 P模块生化分析仪有160个比色杯 根据P模块的分析流程 进入开始状态 仪器机械部分进行复位后 开始清洗比色杯 之后进入加样状态 首先从1号样本杯进行加样 之后按照固定规律进行加样 比色杯污染实验利用比色杯重复使用的特点 即第1个测试和第161个测试的比色杯是同一个比色杯的特点 现在第一圈测试施污染项目 在第二圈即161号测试开始 输入受污染项目 35 Mg2 来自AMYKit Mg2 来自样本 比色杯污染 AMY测定 Mg2 测定 Mg2 来自AMYKit的Mg2 在比色杯中残留 产生正误差 36 比色杯污染实验方法 以项目A对B C D E4个项目比色杯污染 项目输入顺序 37 Water代表可用一个项目试剂盒装入蒸馏水 按照测试顺序填满第一圈 38 结果分析 各项目比色杯不受影响时测试结果 39 结果分析 各项目受A项目比色杯影响时测试结果 40 四 搅拌棒携带污染 Mg2 来自AMYKit Mg2 来自样本 AMY测定 Mg2 测定 AMY测定 Mg2 测定 AMYKit中的Mg2 残留于搅拌棒 41 五 携带污染的消除 1 为减少携带污染对检测项目的干扰 应定期对仪器进行适当的保养 如更换管道 用去污剂 酸性洗液清洗比色杯 用去污剂擦清试剂针 样本针 用苯甲醇擦洗搅拌棒等 2 有的全自动化分析仪器有不同的通道 可以将有干扰的项目排在不同的通道中检测 3 选用具有抗交叉污染的试剂盒 如在游离胆固醇试剂中添加胆固醇酯抑制剂 以减少胆固醇酯酶水解胆固醇酯引起对游离胆固醇测定的污染 42 4 合理安排检测项目的顺序 一般在安排项目顺序时要求两个项目间至少要有一个非干扰项目 而最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前 以消除干扰发生的可能 同时要求检验人员对仪器的工作状态要了如指掌 并在一个样本的项目选择或一个样本的最后一项与下一样本的第一个项目选择时对于试剂交叉污染的可能性加以考虑 合理安排项目顺序 以便得到更为合理的结果 43 对常见的生化项目可以按以下顺序安排检测 P Alb DBIL TBIL Ca CK TBA TG ALT CK MB APOA1 T CH APOB HDL C LP a AST AMY LDL C BUN UA CHE ADA r GT Mg ALP LDH TP Cr 44 5 一些生化分析仪还有额外的冲洗功能 可以在被干扰项目检测前对试剂针用酸性洗液 碱性洗液进行 次或多次冲洗 以减少项目间