尿液干化学检测.doc

尿液干化学检测 (一)检验目的 对泌尿系统疾病、肝胆疾病、糖尿病等疾病进行辅助诊断与疗效观察，对安全用药进行监护，以及评估健康状态。 (二)测定方法以及体系 干化学试带法：包括尿液分析仪，分析仪试剂带；尿的干化学试带可检测的项目有蛋白质、葡萄糖、酮体、隐血、胆红素、尿胆原、亚硝酸盐、比重、pH值等。快速敏感的干化学试带技术和自动化分析技术在尿液检查中得到普遍应用，上述指标的检测极为简便，而且提高了检验质量，为尿液化学检查开拓了更广阔的领域。(三)检测原理及干扰因素 尿液分析仪检测原理：尿液中相对的化学成分使尿多联试带上各种含特殊试剂的模块发生颜色变化，颜色深浅与尿液中相应物质的浓度成正比；将多联试带置于尿液分析仪比色进样槽，各模块依次受到仪器光源照射并产生不同反射光，仪器接收不同强度的光信号后将其转换为相应的电信号，再经微处理器由下列公式计算山各测试项目的反射率，然后与标准曲线比较后校正为测定值，最后以定性或半定量方式自动打印出结果。用于对尿液进行定性和半定量检测。1葡萄糖检测 (1)原理：尿糖形成的原因和机制为：当血中葡萄糖浓度大于8.8mml/L时，肾小球滤过的葡萄糖量超过肾小管重吸收能力即可出现糖尿。葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下释放新生态氧0，新生态氧O再还原碘化钾，发生颜色变化。 (2)干扰因素：本实验对葡萄糖豹检测是特异性的，大量维生素c可使实验出现假阴性结果；高比重碱性尿，亦可造成糖检出偏低，使低糖浓度尿呈阴性。2.胆红素检测 原理：直接胆红素在酸性条件下与二氯苯胺重氮盐偶联，生成偶氮染料。 干扰因素： (1)标本必须新鲜，以免胆红素在阳光照射下成为胆绿素； (2)尿液中含高浓度维生素C和亚硝酸盐时，抑制偶氮反应使胆红素测定呈假阴性； (3)检验对象接受大剂量氯丙嗪治疗或尿中含有盐酸苯偶氮吡啶的代谢产物时呈假阳性。 3.酮体检测 原理：乙酰乙酸、丙酮在碱性条件下与亚硝基铁氰化钠反应生成紫红色化合物。 干扰因素： (1)尿液必须新鲜，及时送检以免因酮体的挥发或分解出现假阴性结果和结果偏低； (2)不同病引起的酮症，因酮体的成分不同，同一检验对象不同病程可使分析结果有差异。 4.比重检测 原理：采用多聚电解质离子解离法。尿中以盐类形式存在的电解质(MX)中的M阳离子(以Na为主)与离子交换体反应置换出氢离子，氢离子与酸碱指示剂反应，发生颜色变化。该检验不受尿液中某些不含离子成分(如葡萄糖)的影响，也不受不透色的染料的影响，高度缓冲的碱性尿液会给出相对于其他方法较低的读数。 干扰因素：当尿中含有蛋白质(1gL一75gL)时可使比重读数偏高。5.潜血检测原理：血红蛋白具有过氧化物酶样活性，可使过氧化物分解释放出新生态氧，使邻甲苯胺变成邻甲联苯胺，出现颜色变化。 干扰因素： (1)于化学法既可与完整的红细胞反应，又能测定尿中的游离血红蛋白，造成仪器法与镜检法有差异； (2)尿中含有的易热酶、肌红蛋白或菌尿可引起假阳性发应； (3)大量维生素c可干扰试验，使结果呈现假阴性。 6.酸碱度：采用酸碱指示剂法 (1）原理：尿液酸度即尿的pH值，反映肾脏调节体液酸碱平衡的能力。正常人在普通膳食的条件下尿液pH值为4 68 O。pH值广泛试带是多种指示剂混合的试带，灵敏度约为pH值005，试带与标准色板比较可知尿液的pH值近似值。干化学试带的测试模块中含甲基红和溴麝香草酚蓝，两种指示剂适量配合可测试尿液酸碱度。 (2)干扰因素：尿pH值受饮食种类影响很大，如进食蛋白质较多，则由尿排出的磷酸盐和硫酸盐增多，尿pH值较低，而进食蔬菜多时尿pH值常大于6。当每次进食后，由于胃黏膜在分泌多量盐酸以助于消化，为保证有足够的氢离子，和氯离子进入消化液，则尿液泌H-减少和cL-的重吸收增加，而使尿pH值增加，呈碱性。如运动、饥饿、出汗等生理活动，夜间入睡后吸收变慢，体内酸性代谢产物可使尿pH值降低。药物、不同疾病等多种因素亦影响尿液pH值。细菌繁殖尿样可影响pH值，使尿液呈碱性。影响尿液pH值常见因素见表10。 表10影响尿液pH值常见因素表影响因素 酸性尿液 碱性尿液 肾功能 肾小球滤过增加，肾小管保碱能力正常 肾小球滤过正常，肾小管保存碱能力丧失食物 肉类含硫、磷及混合性食物 蔬菜、水果、含钾、钠生理活动 剧烈运动、大汗、应激状态、饥饿 饭后、消化高潮疾病 酸中毒、肾炎、糖尿病、饥饿状态、尿 碱中毒、膀胱炎、肾盂肾炎、尿路草酸盐、 酸盐或胱氨酸结石 磷酸盐或碳酸盐结石药物 氯经钙、氯化铵、氯化钾、稀盐酸等 小苏打、碳酸钾、碳酸镁、枸橼酸钠、酵母制剂等 其他 尿内含酸性磷酸盐 尿内混入多量脓、血、细菌污染、分解尿素等 方法学评价。目前多采用甲基红与溴麝香草酚蓝适量配合制成pH值试纸垫，以仪器自动化检测来反映尿pH值为59的变异范围，基本能满足临床对尿pH值测定的需要。 7.蛋白质检测 原理：本法是利用指示剂的蛋白质误差原理(即pH值指示剂离子因与白蛋白携带电荷相反而结合，故使其反应显示的pH值产生颜色变化，这种pH值颜色改变的幅度与白蛋白含量成正比)。该法有简便快速等优点，适用于人群普查，还可以用于尿液分析仪。以减少误差。不同厂家、不同批号试剂带显色有差异，因此应强调采用经严格标准化的试带。 干扰因素： (1)对于高度缓冲的碱性尿有可能得到假5日性结果； (2)如果尿样被铵盐类化合物及某些防腐剂或清洗剂污染也会导致假阴性。 8.尿胆原检测 原理：尿胆原在强酸性条件下，与重氮盐偶联生成紫红色染料。 干扰因素： (1)尿液中一些内源性物质如胆色素原、吲哚、胆红素等可使尿胆原检查结果出现假阳性； (2)一些药物(如吩噻嗪)也可干扰试验。 9.亚硝酸盐检测 原理：采用亚硝酸盐还原法。亚硝酸盐与芳香族氨基磺胺发生重氮反应，生成重氮化合物，而重氮化合物与四氢苯并喹啉3一酚偶联，生成红色偶氮染料。亚硝酸盐的检出率受三个因素影响： 干扰因素： (1)尿路感染的细菌是否含有硝酸盐还原酶； (2)食物中是否含有硝酸盐； (3)尿液标本是否在膀胱停留4小时以上。符合以上三个条件，此试验的检出率为80，反之可能呈阴性结果。标本放置过久或污染细菌可呈假阳性。 10.白细胞检测 原理：采用白细胞酯酶法。吡咯酚酯在中性粒细胞中酯酶的水解作用下，产生游离酚，游离酚与苯基重氮盐偶联，生成紫红色偶氮染料。 干扰因素 (1)标本必须新鲜、及时测定，以免白细胞破坏，导致化学法与镜检法人为的试验误差。 (2)此法只能测中性粒细胞，不能与单核细胞等反应。 (3)尿液中污染甲醛或含有高浓度胆红素或使用某些药物时，可产生阴性结果。 (4)尿蛋白和微白蛋白：微白蛋白试纸用于尿微量白蛋白的检测，15mgdl的测试结果则表明是临床的蛋白尿症。蛋白试纸用于尿液中白蛋白的检测。试纸对黏蛋白和球蛋白的敏感度较低，一般在60mgd1或者更高才能被检测出来。肉眼可见的血尿(5mgd1)也可能出现假阳性反应。 11.抗坏血酸检测 原理：采用还原法。抗坏血酸具有1，2一烯二醇还原性基团，在碱性条件巾，将氧化态蓝色的2，6一二氯酚靛酚染料还原为无色的2，6一二氯二对酚胺。 干扰因素：当尿中含有氧化剂时(如高锰酸钾、次氯酸盐等)会影响本检验的灵敏度(见表11)。表ll 抗坏血酸对尿干化学检测的影响检测项目反应原理灵敏度参考范围干扰因素假阳性假阴性酸碱度（pH值）酸碱指示剂法4.59.04.68.0标本久置后，细菌繁殖或CO2丢失，pH值试带浸尿时间过长，pH值蛋白（PRO)pH值指示剂蛋白质误差法对白蛋白敏感（70100mg/L),对球蛋白、黏蛋白、本周蛋白敏感性差阴性pH值8，奎宁、磺胺嘧啶、聚乙烯吡咯酮等药物，季铵类消毒剂pH值3，高浓度青霉素，高盐，球蛋白、本周蛋白等非电解质蛋白葡萄糖(GLU)葡萄糖氧化酶法250mg/L阴性过氧化物、强氧化剂污染高VitC、乙酰乙酸，L-多巴代谢物，高比密低pH尿酮体(KET)亚硝酸基铁氰化钠法乙酰乙酸：50100mg/L；丙酮：400700mg/L；与-羟丁酸不反应阴性苯丙酮、L-多巴代谢物酮体以-羟丁酸为主，陈旧尿隐血（BLD)过氧化物酶法Hb0.30.5mg/L；RBC10/ul阴性肌红蛋白、易热性触酶、氧化剂和菌尿VitC、蛋白尿、糖尿胆红素（BIL)偶氮法5mg/L阴性吩噻嗪类药物VitC、亚硝酸盐、光照尿胆原（UBG)偶氮法或Ehrich反应10mg/L阴性或弱阳性吩噻嗪类药物、胆色素原、胆红素、吲哚亚硝酸盐、光照、重氮药物亚硝酸盐（NIT）偶氮法0.50.6mg/L阴性陈旧尿、亚硝酸盐或偶氮试剂污染、食物硝酸盐含量丰富pH值5，尿量过多、食物硝酸盐含量过低、尿在膀胱内停留4小时、非含硝酸盐还原酶细菌感染、VitC、亚硝酸盐白细胞(LEU/WBC)中性粒细胞酯酶法25ul阴性甲醛、氧化剂、胆红素、呋喃类药以淋巴或单核细胞为主、蛋白、庆大霉素比密(SG)多聚电解质中H+解离量与离子浓度相关1.0101.0301.0031.03电解质性尿蛋白致SG碱性尿致SG维生素C（VitC)酸性环境中还原染料50mg/L阴性巯基化合物、胱氨酸、内源性酚碱性尿(四)标本要求 1.标本来源：清晨第一次尿液或(随机)新鲜尿液。 2.标本采集：见标本采集手册。 3.不可接受标本：超过2小时，没有按规定使用洁净、干燥的容器以及低于10ml的尿液。 4.标本保存：应在2小时内对尿液进行检验。(五)设备和试剂 1.设备。尿液分析仪，尿液分析仪通常由机械系统、光学系统、电路系统三部分组成。 2.试剂。与尿液分析仪配套试纸条，在255干燥环境内贮存。试带以滤纸为载体，将各种试剂成分浸渍后干燥，作为试剂层再在表面覆盖一层纤维膜，作为反射层。尿液浸人试带后与试剂发生反应，产生颜色变化。多联试带是将多种检测项目的试剂块，按一定间隔、顺序固定在同一条带上的试带。使用多联试带，浸人一次尿液可同时测定多个项目。多联试带的基本结构采用了多层膜结构：第一层尼龙膜起保护作用，防止大分子物质对反应的污染；第二层绒制层，包括碘酸盐层和试剂层，碘酸盐层可破坏Vitc等干扰物质，试剂层与尿液所测定物质发生化学反应；第三层是固有试剂的吸水层，可使尿液均匀、快速地浸人，并能抑制尿液流到相邻反应区；最后一层选取尿液不浸润的塑料片作为支持体。有些试带无碘酸盐层，但相应增加了1块检测Vitc的试剂块，以进行某些项目的校正。不同型号的尿液分析仪使用其配套的专用试带。且测试项目试剂块的排列顺序是不相同的。通常情况下，试带上的试剂块要比测试项目多一个空白块，有的甚至多参考块叉称固定块。空白块的目的是为了消除尿液本身的颜色在试剂块上分布不均等所产生的测试误差，以提高测试准确性；固定块的目的是在测试过程巾，使每次测定试剂块的位置准确，减低由此而引起的误差。 3.质控品。阴性和阳性，2个水平 (1)在2。8密封避光保存，注意试剂效期，开封后立即密封避光冰箱保存。 (2)每周对尿液分析仪做维护保养。 (3)每月应进行尿液分析仪之间比对，取当日新鲜尿液阳性标本4份，1份阴性标本，比对合格后写出比对报告，若不合格，检查原因，维护仪器，校准仪器，合格后再进行比对，并写校准、比对报告留档。(六)检测步骤 1.质控品测定：做阴性和阳性，2个水平。使用前将质控液恢复到室温(1825)，上下颠倒几次混匀，拧开瓶盖后，直接将质控液滴在试纸上(多余的质控液不要吸人瓶中，在吸水纸蘸干)，用尿液分析仪测试。仪器操作步骤见使用说明书原始测定数据应粘贴留档保存。 2.质控规则。质控液的测定值均应在该质控要求范围内，为合格；任何一项检测结果若不在其靶值范围内则质量评价为未满足要求(失控)。 失控的处理：失控原冈分析：仪器状态、试纸条有效期、质控品状态、人员操作等；纠正失控：根据失控原因，采取相应的调整后，再次检测质控品，直到质控合格；填写失控报告，内容包括：时间、失控项目、失控原因、纠正措施、失控数据，纠正后数据、纠正评价、操作者、审核者。 3室内质控在控，即可开始测定标本，详见仪器标准操作规程。(七)结果报告 将仪器打印出的原始小条粘贴于相对应的申请单上，检查无误后，双人签名，可发出报告(有电脑的单位可录入、核收检验对象信息，将镜检结果录入，标注使用仪器型号检查无误后，打印报告，双人签名发出报告)。 (八)注意事项 1.不得使用超过效期或变质的试纸条；试纸的变质会使反应区的颜色变浅或变深。 2.本品必须在原瓶中保存，取出试纸后立即盖严瓶盖。不得移去包装内的干燥剂，每条试纸只能使用一次。 3.为保护试剂的反应活性必须隔绝周围环境中的潮气、光和热。 4.不要触摸试纸条的反应区，避免阳光直射。 5.对检验结果有疑问，与预期结果不一致时，请查找原因：仪器状态、试纸条有效期、质控品状态、人员操作等，纠正后，室内质控合格，方可检测临床标本。 6.用过的试纸条请依照实验室生物危害性材料处理方法进行处理。(九)质量控制 1.分析前的质量控制 (1)正确留取标本，并在规定的时间内进检，运输时应避免阳光直射。 (2)避免标本污染(含有强氧化物如漂白粉)出现假阳性和假阴性(尿液中含有高浓度vitc等)；标本久置，葡萄糖被细菌或细胞酶分解，可引起假阴性。 (3)了解检验对象可能影响尿化学检测的进食及使用药物的情况。 (4)尿样保存：尿样收集后应在2小时之内完成检测，否则选用适当的防腐剂并冷藏保存。注意准确有效地标记尿标本。 2.分析中的质量控制 (1)用尿液质控品(阴性和阳性)监控仪器的工作状态； (2)严格、规范、正确的实验操作； (3)应使用与尿液分析仪配套的专用试带，注意试带的效期，注意防潮，避免变色后干扰实验。 3.分析后的质量控制(1)分析检验结果的相关性，如有不符应及时复检，如表12所示。 表12检验结果的相关性分析 化学分析结果镜检结果可能原因潜血阴性多量RBC药物或其他物质潜血阳性不见或少量RBCRBC破碎WBC阴性多量WBC药物干扰或慢性炎症WBC阳性不见或少量RBC其他物质干扰出现假阳性蛋白质阴性WBC RBC管型增多其他物质干扰出现假阴性化学分析亚硝酸盐为阳性，而尿蛋白质和白细胞均为阴性，可能因摄食含硝酸盐丰富的食物有关而造成的假阳性。 糖尿病检验对象尿糖检测阴性，而VitC含量很高，会出现假阴性。(2)检测结果有异议时应了解检验对象可能影响尿化学检测的进食和用药情况。(3)综合考虑检验对象的病史：特别是肾脏疾病检验对象，尿蛋白定性应当用磺基水杨酸法。如尿化学分析结果与镜检不一致，应进一步查明原因。(4)参考范围的认可：尿干化学分析仪检测白细胞、红细胞出现“假阴性”时，应以镜检为准；但当“假阳性”时，仪器的结果可能正确c这种情况见于白细胞：当尿在膀胱贮存时间长，白细胞破坏，中性粒细胞酯酶释放到尿中，导致仪器分析(+)，镜检反而(一)；红细胞：肾病检验对象尿巾红细胞常破坏而释出血红蛋白或某些患者尿巾有高活性不耐热的触酶时均可导致仪器分析(+)，镜检却为(一)。尿液煮沸冷却后再测试可排除不耐热的触酶造成的假阳性。其他情况要结合临床实践，不能一概否定或肯定仪器检测结果，更不能随意调节改变仪器的灵敏度。 (十)生物参考区间及临床意义 1pH值：随机尿pH值为4680，正常尿液可呈弱酸性。肉食者多为酸性蔬菜水果可致碱性。久置腐败尿或泌尿道感染、脓血尿均可呈碱性。结石尿的草酸盐、磷酸盐、碳酸盐结晶见于碱性尿；尿酸盐、胱氨酸结石多见于酸性尿。酸中毒及服用氯化铵等酸性药物时尿可呈酸性。 2比重：成人：1.003一l.030；新生儿：l.002l.004。 (1)比重增高：尿少时比重可增高，见于急性肾炎、高热、心功能不全、脱水等；尿增多同时比重增高，常见于糖尿病； (2)比重降低：慢性肾小球肾炎、肾功能不全、尿崩症等。连续测定尿比重比一次测定要更有价值，慢性肾功能不全呈低比重尿。 3.白细胞：阴性。阳性结果提示泌尿系及邻近器官有感染性病变如急、慢性肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎等；急性肾小球肾炎也可出现短期的白细胞尿。 肾结核、肿瘤，肾移植后有排斥反应者，成年妇女生殖系统有炎症时都可出现白细胞。 4.潜血：阴性。增加常见于肾小球肾炎、泌尿系结石、结核或恶性肿瘤。 5.蛋白质：阴性。病理性蛋白尿：可分为肾前性、肾性及肾后性蛋白尿。 本周蛋白尿、血红蛋白尿、肌红蛋白尿、溶菌酶尿等属肾前性蛋白尿。肾性蛋白尿见于肾小球或肾小管疾病，可因炎症、血管病、中毒等原因引起。肾后性则见于肾盂、输尿管、膀胱、尿道的炎症、肿瘤、结石等。 6.亚硝酸盐：阴