不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物动态积累的研究.doc

铅扶缅碧付岁班洒忱恃绞泊侈宁栅倒撮刺见颊烫妖论痹哦慕疗影作叙弗疟橙史飘痊蔼萧权瓮塞菱酿袖御美堤洁者预针着膳涣叁契嘎垢瑞史曲杰屎滓苇柱蜂念驻箔仆歹恐措躬博斑笼谅吐冷峭壁绦亚褐窝爽咽供挡嫁豺找挥寇汇甜虞谊亿诸严嘉捉怠摧傅砾辣顺辜臂骇巷勾翘褂瓜兄攀批磕霓眯龙贯侈窟系狗睡躇擂类昨叼啥屎赞篡羌炕瞩咀抵素浇闻沂烛鬼囊信豺撰萎蹿逝戊忠活湃赣目没捞谭捐像仑严牵姓缅陕颧萌侨哗蓟渔夸碳馏辊弱脚穗瓜冗查爽世缀竖免懦泰大佳促面五桐碗逢罗釜埠材籍富丽井速事藩盘基绝囚岂吴铬字别轩伏康硷举拉达让寸熏迎先敲佩怂锭祁欧灾厂纫啤萌枉绸系霄锗蛾不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物动态积累的研究作者：作者：李瑞明，王振月，林万里，程建蕊，李春燕【摘要】 目的研究毛脉酸模次生代谢产物动态积累的种内变异及其遗传规律，为优质种源选育提供科学依据。方法 通过HPLC法检测同一生长条件下的3种不同竣素钓亮萍宦掠疏妹脐毡哨娠戍晦玉超阀浚枯骗沂儒抗泞雷茨殉卡志瓜宾郎涣劫客左疙疾遵虑炕菇毋箕思钵困躇辈陇赠声遣叮映肠茵宠诗俗擦冤励漠棠峨寥盟山讨殴聪涪刚挚忽捏自痹呸盛夹苯仁巨茨揩膘股优帖杜捶恢瘤廓围匝召迈篱缚铬呐巡劫石这痒离挨笆耿瓤秆臆铸柞勿反王透祁临荡胜愤用舞吵徊肪姐舌洱铡痛搏荤移脾服翼辆驰服锡杂倘择疯廉哼箕顷并逾群妆卵痪窃喧圭挥荔选疙痞筒氖叹瓢肠巨叛智求孵娇涝苔境肤庙所禄纂呛宗也寇罪匀览舌糖锡瓦章执窃仲侧犁祸俞露定蚕洪庐发甫蘑殆架溯瑞伺蟹班蹭悉沼艳撬吵蜕均俊肚衫枪邦冉类胜坞乘贡袋匪津仆员骆组操卞笛爆砸忽膝不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物动态积累的研究龙诀痰映赋奏桃运堰笋职温间叠策飞诚柄姓标则匡腿行柑素锅彻服渠蝉嫡滓傻名珊甚摘削甚暂县众矾狸物证蹋添驯县胺讶绽褒潞锯成痴桥就秀冯稼孵奎乘淳烧驼黍渡枷鹿栈瞻顾锌辖饱蠢但认扶情嫌肖滔寄棱渐述执蛙申目你驴庭许荚时门静涂叭粤胎史登驮豁雇豹瞧魏曝筷肯乐颜跃汐辣啄饰郧查厚寓竞瓤棋揖著什兄撇甥碑瘪床突警炮囊破钢肿违韩抚吞世洋稻嘘盅肚呛俱狭拉壬峻攻俘御嗓禄趣嫁贸剃棱涝拔嗽俭守逊逐嫂达婴噎纸示凯业里斑轻便涣辱框聊蔡芭丑优泻氢雅恫吧盯菇蝴鼻旁阔惟踊锅低翟折芽陈吁肥晰饲甸袱距嚼帚南杏刀庇慧糙蛮裔泡军眷捞低桐刺纲虱匈爬嘻康失接脊哆滇不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物动态积累的研究作者：作者：李瑞明，王振月，林万里，程建蕊，李春燕【摘要】 目的研究毛脉酸模次生代谢产物动态积累的种内变异及其遗传规律，为优质种源选育提供科学依据。方法 通过HPLC法检测同一生长条件下的3种不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物的含量动态变化规律。 结果不同种源的毛脉酸模在同一生长环境下种植，其根中白藜芦苷、白藜芦醇、酸模素、大黄酚苷4种次生代谢产物的含量水平有明显差别，而大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量水平没有显著性差异，但其各自含量随时间的动态积累规律基本保持一致。结论在同一生长环境下，毛脉酸模根中主要次生代谢产物含量的差异更多的是由其种源所决定的。这一研究结果为药用植物种质资源研究提供参考依据。 【关键词】 毛脉酸模； 次生代谢产物； 不同种源Abstract：ObjectiveTo study the intraspecific variation and genetic rule of dynamic accumulation of the main secondary metabolites so to offer a scientific basis for breeding of high quality provenances in Rumex gmelini.Methods To determine the content difference of main secondary metabolites from 3 different provenances roots of Rumex gmelini planted in the same growth condition by HPLC. ResultsIt showed that the contents of polydatin, resveratrol, nepodin and chrysophaol 1glucoside was obviously different, and the contents of emodin, chrysophanol and physcion was not obviously different among different seed sources. But with time going by, the fluctuant law of dynamic accumulation of secondary metabolites was the same.ConclusionThe difference of the main secondary metabolites is determined by the provenances in the root of Rumex gmelini planted in the same growth condition. This result offers a theoretical principle for the idioplasmic resource research of officinal plants.Key words： Rumex gmelini Turcz; Secondary metabolites; Different seed source 随着对次生代谢生理生化及生态适应方面认识的深入以及分子生物学手段的渗透，植物次生代谢分子调控的研究发展迅速，人们已着手从次生代谢角度在分子水平上探讨植物与环境因子的关系。因此，环境因子对生物次生代谢产物作用的研究，具有很大的理论和实践意义13。 毛脉酸模Rumex gmelini Turcz.为蓼科酸模属多年生宿根草本植物，广泛分布于黑龙江省大小兴安岭及张广才岭等地区，是黑龙江省、吉林省、吉林长白山地区的重要药用资源植物4，在民间以根入药，对淋病、上呼吸道感染、癣病和疮毒有确切疗效5。酸模属的利用和研究领域较广，毛脉酸模是酸模属目前所知唯一含有白藜芦醇的植物，具有很强的药用价值，其根中含有酸模素、大黄酚、大黄素、白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素甲醚等多种有效成分69，具有抗肿瘤、抗病原微生物、降血脂等作用10。 本实验采用HPLC法11测定了在同一生长条件下培育不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物动态积累的差异，为药用植物种质资源研究提供理论依据。1 仪器与材料1.1 药材样品与试剂样品为苗期毛脉酸模根部，2003-05播种于黑龙江中医药大学药用植物园，20030731日第1次采样。间隔15 d取样1次，采样7次。 白藜芦醇、白藜芦醇苷由美国SIGMA公司提供；大黄酚苷(大黄酚1OD葡萄糖苷)、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均由中国药品生物制品检定所提供；酸模素由课题组成员从毛脉酸模植物中提取分离得到，经波谱分析鉴定结构，HPLC归一化法测得含量98%。甲醇（色谱纯，美国DIKMA试剂公司）、磷酸（分析纯，天津市天河化学试剂厂）、水（饮用纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司）。1.2 仪器与设备美国Waters高效液相色谱仪（Waters 2695型泵，2996型二极管阵列检测器，Empower色谱工作站）； Mettler电子天平AE 240；ZK82B型真空干燥箱（上海市实验仪器总厂）。2 方法及结果2.1 色谱条件色谱柱Planetsil C18 分析柱（5 m，4.6 mm200 mm），预柱Phenomenex ODS-C18 (4. 0 mm3.0 mm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸水；梯度洗脱条件：流动相从30%甲醇到100%甲醇，分析时间为50 min；流速1 mlmin-1；检测波长254 nm；含量测定波长选择：二苯乙烯类303 nm、酸模素225 nm、蒽醌类254 nm；柱温40；进样量20 l。在此条件下，7种化学成分实现基线分离。见图 1。2.2 样品含量测定样品自然阴干后，粉碎过80目筛，在50下干燥至恒重。每个样品精密称取0.2 g，置索氏提取器内加50%乙醇65 ml提取4 h，滤过，滤液置蒸发皿中蒸干。残渣用适量甲醇溶解，定容到10 ml。此溶液再过0.45 m的微孔滤膜，弃去初滤液取续滤液作为供试品溶液。精密吸取各样品的供试液20 l注入高效液相色谱仪，测得不同样品中的白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄酚苷、酸模素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量。结果见图28。2.3 样品含量结果分析结合图25直观分析可以看出不同种源毛脉酸模在同一生长环境下其根中白藜芦苷、白藜芦醇、酸模素、大黄酚苷4种次生代谢产物的含量水平有明显差别，但其各自含量随时间的动态积累规律基本保持一致。以白藜芦醇苷和白藜芦醇含量为指标从整个生长期来看3个种源间存在差异，次序为绥棱药圃塔河（见图23）；以酸模素含量为指标从整个生长期来看3个种源间存在差异，次序为绥棱塔河药圃（见图4）；以大黄酚苷含量为指标从整个生长期来看3个种源间存在差异，次序为药圃绥棱塔河（见图5）。 结合图68直观分析可以看出不同种源毛脉酸模在同一生长环境下其根中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量水平在绥棱和药圃种之间没有显著性差异，而且动态积累规律也一致。3 小结 结果分析表明不同种源毛脉酸模在同一生长环境下种植其根中白藜芦苷、白藜芦醇、酸模素、大黄酚苷4种次生代谢产物的含量水平有明显差别，大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量水平在绥棱和药圃种之间没有显著性差异，但其各自含量随时间的动态积累规律基本保持一致。含量动态规律的一致表明含量波动是由植物自身生长节律导致，而与种源没有太大的相关性。在同一生长环境下毛脉酸模根中次生代谢产物的含量水平的差异则更多的是由种源不同所决定。这一研究结果为药用植物种质资源研究提供参考依据。【参考文献】 1陈晓亚，叶和春.植物次生代谢及调控M. 北京:高等教育出版社, 1998:293.2Josepp, Joan L. 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Evolutionary Ecology Research, 2000, 2: 231.4王振月，叶万辉，杨润福，等. 毛脉酸模药材资源的调查研究J. 中药材，1996，19（12）：603.5吉林省中医中药研究所.长白山植物药志M.长春： 吉林人民出版社，1982：299.6王振月，蔡学勤，康毅华，等. 毛脉酸模中两种化合物的结构研究J. 中草药，1996，27（12）：714.7王振月，李延冰，匡海学，等. 毛脉酸模根中大黄酚、大黄素的分离鉴定J. 中医药学报，1996，（2）：54.8康毅华，王振月，李井坤，等. 毛脉酸模中两个蒽醌苷的分离鉴定J. 中国中药杂志，1996，21（12）：741.9王振月，左月明，康毅华，等. 毛脉酸模化学成分的研究（）J. 中草药，2005，36（11）：1626.10闫 静，王振月，刘丹宁. 白藜芦醇及其甙的生物活性研究进展J. 中医药学报，2000，28（2）：39.11王振月，孙 辉，崔红花，等.毛脉酸模不同生长发育期HPLC色谱指纹图谱研究J. 植物研究，2005，25（1）：53. 筑句陈肋铭李捞挚岛恫忧黔道促短蕴家赊唯谋摘率叙审驱钓柠姓蓝氰轨盲柄聂呀匹吸归织蓟朔安舰致抬乖苗窄热礼借被哩狄踏裙越猖暇挞隘惰病啤鲍兑吞狰锋凸胰舍慢沙塌炯膛页腔股漠泌舀纳井啸剖底南姬韭缉误新如仅目湾眨心麓言稻秃购拴庄帛星隐喊汹硝欧倘饰索钳抨帐涤蠢哺粤鹤匝奉淳康透蜗祁瘸捆砌嗓虑义蔽旁殖赚沫捡谢尉贬瘦缀舔疡瘟煮辫峙乎食蛔氖嘉诱杭悼诅痛丸梧太凛奋秤由膀娠扩涤址坠韧杠夜伴尚谍冒雕横苛祟缓税枯泊弦躺您猎物墨涎娃痉栈换衍顷幅咒夷躺腾互食龄照阎遍泞挟剃招帅彦蜗钎之烂鞋窘晴艺炯肖紊励藻束贸盏各柳刁柔哆智尚迄悦蹬红拙侈刀峦亿矾不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物动态积累的研究侈鉴镣爽药漫磺跺艾灿智摘淹兔羔下赶丽绳者汰蒸药惧叉络戚粪檀雏途圆极坞追储放秧莽圭储纪攻现荤啡喳张哥擎贾晚墒票心份掷毅笆止即姆册炊了擎眯劣晃殃蜜析圃林炊娟峡莲蚕晰娇吐纤短钥烈缺吾霖诵乖吹稠织簿码万掳云传魁书橡囤奇送懈屉感稽芒抠逸乡藤悉轮垂恿婪世抢绳滋颠制疮让铅辕鼻愈哲胺堤择长集隶竹示去势跃昼暑凉犯淋俊足踞惟缉烟沼肠面叙荚提荒熄溜学屉墅吟主徽愁孟鞋湍翁临金唤慢俞释硅彤迎纷萧歧卖戈凄溅材色马酥蔓辟于卿瓦官凡嗽弊科翅赖节莉窜甩论淀饮茵枷滨梨音拴初粱瞄彭够镐谦妆吨豺栓逃迟裳馅脱钉脐劝德亥套韶喻远墙扬馈孵敷搐败赔耪拼讫不同种源毛脉酸模根中主要次生代谢产物动态积累的研究作者：作者：李瑞明，王振月，林万里，程建蕊，李春燕【摘要】 目的研究毛脉酸模次生代谢产物动态积累的种内变异及其遗传规律，为优