DEC1论文：DEC1的SUMO化修饰及其相关功能的研究.doc

DEC1论文：DEC1的SUMO化修饰及其相关功能的研究【中文摘要】软骨分化的表达基因1(Differentiated embryo-chondrocyte expressed genel,DEC1)属于碱性螺旋-环-螺旋蛋白(basic helix-loop-helix,bHLH)家族。DEC1作为一个转录因子在基因表达调控过程中起着非常重要的作用,而且广泛地参与了核受体信号通路,HIF(hypoxia-inducible factor)信号通路和p53信号通路并且影响了细胞的生长,增殖以及分化等过程。另外,DEC1与乳腺癌的发生和发展也密切相关。研究发现,DEC1作为一个时钟蛋白,其自身的表达具有一定的周期节律性,并且参与了对时钟基因的表达调控过程。在哺乳动物的分子钟系统中,DEC1通过与时钟基因启动子上的E-box作用元件(CACGTG)结合后抑制由CLOCK/BMAL1异二聚体介导的转录激活过程。尽管,DEC1参与了时钟基因的周期调控过程,但是具体的分子调控机制还不是很清楚。SUMO化修饰作为一种重要的翻译后修饰对蛋白质的功能有广泛的调节作用,包括蛋白质的细胞定位,蛋白质之间的相互作用以及蛋白质的活性等方面。因此,本文的主要研究内容就是确定DEC1的S.【英文摘要】Differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1(DEC1) belongs to the family of the basic helix-loop-helix (bHLH) protein that is very important in regulating the gene expression through as a transcription factor. Moreover, DEC1 is also involved in many signal pathways, such as nuclear receptor, hypoxia-inducible factor (HIF) and the p53, and regulates the processes of the cell growth, proliferation and differentiation. On the other hand, DEC1 has been implicated in the development of breast cancer.It.【关键词】DEC1 SUMO CLOCK/BMAL1 HDAC1 基因表达【英文关键词】DEC1 SUMO CLOCK/BMAL1 HDAC1 Gene expression【目录】DEC1的SUMO化修饰及其相关功能的研究摘要4-6Abstract6-7引言11-131 文献综述13-291.1 时钟蛋白DEC1概述13-211.1.1 DEC1的基本结构13-141.1.2 DEC1参与的信号通路14-181.1.3 DEC1与时钟周期18-211.2 SUMO与SUMO化修饰21-271.2.1 SUMO蛋白家族21-221.2.2 SUMO化修饰的分子机制22-241.2.3 SUMO化修饰的功能24-271.3 本论文的选题依据和研究内容27-291.3.1 选题依据271.3.2 研究内容27-292 细胞内DEC1的SUMO化修饰29-392.1 引言292.2 仪器与试剂29-322.2.1 仪器29-302.2.2 试剂30-322.3 实验方法32-352.3.1 细胞培养322.3.2 质粒表达载体的细胞转染32-332.3.3 Western blotting(WB)实验33-342.3.4 免疫共沉淀(IP)实验34-352.4 结果与讨论35-382.4.1 COS-7细胞中外源转染DEC1的SUMO化修饰35-372.4.2 MCF-7细胞中内源DEC1的SUMO化修饰37-382.5 小结38-393 K159和K279是DEC1的主要SUMO化位点39-473.1 引言393.2 仪器与试剂39-413.2.1 仪器393.2.2 试剂39-413.3 实验方法41-433.3.1 DEC1定点突变体的构建41-423.3.2 突变体的质粒转化423.3.3 质粒提取423.3.4 细胞培养42-433.3.5 质粒表达载体的细胞转染433.3.6 Western blotting实验433.3.7 蛋白质定量实验(考马斯亮蓝法)433.4 结果与讨论43-463.4.1 DEC1的定点突变体在COS-7细胞中的表达43-443.4.2 K159和K279是DEC1的主要SUMO化位点44-463.5 小结46-474 SUMO化修饰对时钟蛋白DEC1功能的调控47-564.1 引言474.2 仪器与试剂47-484.2.1 仪器474.2.2 试剂47-484.3 实验方法48-504.3.1 细胞培养484.3.2 质粒表达载体的细胞转染484.3.3 免疫荧光实验48-494.3.4 核质分离实验49-504.3.5 Western blotting实验504.3.6 IP实验504.3.7 荧光素酶报告基因实验504.4 结果与讨论50-554.4.1 SU