革兰阴球菌PPT课件.ppt

革兰阴性球菌 伯杰鉴定细菌学手册 第9版将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4 将奈瑟菌属 莫拉菌属 金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科 1 概述 奈瑟菌属对人致病的有脑膜炎奈瑟菌 N gonorrhoeae 和淋病奈瑟菌 N meningitidis 其余均为人类呼吸道正常菌群莫拉菌属中的卡他莫拉菌 M catarrhalis 是致病菌目前对卡他莫拉菌的归属尚未定论 2 一 分类 淋病奈瑟菌 脑膜炎奈瑟菌对人致病寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌解乳糖奈瑟菌 干燥奈瑟菌 微黄奈瑟菌 粘液奈瑟菌 浅黄奈瑟菌 灰色奈瑟菌 延长奈瑟菌 去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌 第一节奈瑟菌属 3 二 脑膜炎奈瑟菌临床意义 寄居于人的鼻咽腔 口腔粘膜上 通过呼吸道分泌物或空气微滴核而传播 流行性脑脊髓膜炎冬末春初 多为学龄儿童 青少年感染后多为隐性感染 少数可发展为菌血症或败血症 进而累及脑 脊髓膜 形成化脓性脑膜炎可出现严重的临床症状如发热 头痛 脑膜刺激症阳性 甚至休克和DIC等 菌血症和细菌的损伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑 4 尽管可以在鼻咽部形成带菌状态 但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染 急性发病 发病时机体内缺乏杀菌抗体 主要致病物质是内毒素 可引起发热 微循环障碍 严重者可致内毒素休克 血栓 DIC等依据荚膜多糖的抗原成分可分为 A B C 等13个血清群 我国A群占95 8 其余为B C等群 5 淋病奈瑟菌临床意义 淋病的病原菌主要通过性接触直接感染在分娩时通过产道感染新生儿临床表现为 单纯性淋病盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病淋菌性结膜炎播散性淋病致病物质包括菌毛 外膜蛋白 蛋白水解酶 脂多糖和铁调节蛋白 6 奈瑟菌形态 革兰阴性双球菌直径0 6 1 5 m肾形或咖啡豆样 凹面相对某些菌种形成荚膜 三 生物学特性 7 2 培养特性 营养要求高专性需氧 初次分离需5 7 CO2和高湿度低于30 不生长孵育24h后在培养基上自溶脑膜炎奈瑟菌血琼脂平板或巧克力琼脂平板 光滑 湿润 透明或半透明 直径1 2mm的不溶血 圆形 露珠状菌落卵黄琼脂平板 无色 光滑 湿润奶油状菌落 8 淋病奈瑟菌巧克力或MTM选择性培养基 万古霉素 菌落圆形 光滑湿润 凸起 半透明自溶 淋病奈瑟菌在巧克力琼脂平板上的菌落特征 9 3 生化特性氧化酶阳性 触酶阳性4 抵抗力很弱四敏感 热 寒冷 干燥 消毒剂对青霉素敏感近年来由质粒介导的 内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多 10 四 微生物检验 11 一 脑膜炎奈瑟菌 1 标本采集脑脊液 关节液 血液 瘀点穿刺液等采集后立即送检标本运送时需要35 保温血平板床边接种后置35 孵育血标本接种在血液培养瓶中置35 孵育 12 2 标本直接检查 直接涂片检查脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片皮肤瘀点渗出液涂片见白细胞内外革兰阴性双球菌 可报告 检出革兰阴性双球菌 疑似脑膜炎奈瑟菌 有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断抗原检查胶乳凝集试验和其他凝集试验包括A C Y W125血清型的多价抗体和血清型B抗体检测结果结合涂片和培养结果抗原检测阳性结果可作出快速 推测性诊断 13 3 分离培养鉴定 脑脊液巧克力琼脂或羊血琼脂平板咽拭子或鼻咽拭子选择性培养基上如改良的Thayer Martin MTM GC Lect NewYorkCity NCY 等培养基血标本经增菌培养基增菌后 移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板置5 7 CO235 孵育 每隔24h观察平板 14 鉴定 初步确定为奈瑟菌属直径1 2mm 灰褐色 光滑 半透明 稍扁的菌落涂片革兰阴性双球菌氧化酶触酶阳性进一步 葡萄糖和麦芽糖阳性 其他糖类阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌用分型血清确定血清型别平板上未发现菌落 继续观察72h后无菌生长可报告为阴性 15 二 淋病奈瑟菌 检验程序 16 1 标本采集 阴道和宫颈分泌物用无菌塑料棒涤纶拭子 伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处停留10 15秒时间 蘸取尿道分泌物弃去前段脓性分泌物 留取后段作为标本尿液直肠肛拭标本废弃第一根污染棉签 用第二根棉签醮取的分泌物新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物 17 2 标本直接检查 革兰染色镜检男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内 外较多革兰阴性双球菌 有助于男性淋病早期诊断女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内 外大量革兰阴性双球菌 由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居 故涂片所见结果必须由培养结果证实方可报告新生儿结膜分泌物可见胞内 外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎 18 3 分离培养与鉴定 选择培养基如MTM Martin Lewis ML 或NYC5 CO2孵育每隔24h观察平板 19 1 形态和生化学鉴定 可疑菌落直径0 5 1mm 灰褐色 光滑 半透明呈露滴状凸起的菌落确认菌落涂片 见革兰阴性双球菌氧化酶和触酶试验阳性葡萄糖阳性 其它糖类阴性培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性 20 2 免疫学鉴定 直接荧光染色凝集试验或免疫渗滤技术 21 3 分子生物学鉴定 检测靶片段的基因隐蔽性质粒 染色体基因探针 抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA甲基转移酶基因 透明蛋白 opa 基因 菌毛DNA探针 rRNA基因探针和porA假基因 基因探针杂交 核酸扩增 22 药物敏感性试验奈瑟菌药敏试验选择药物为青霉素 头孢菌素及环丙沙星等 治疗首选药物为青霉素 23 第二节卡他莫拉菌 卡他莫拉菌 M catarrhalis 又称为卡他布兰汉菌 Branhamaceaecatarrhalis 可存在于健康人群的上呼吸道导致中耳炎 鼻窦炎 慢性阻塞性肺炎免疫抑制和ICU患者可导致菌血症社区呼吸道感染的主要病原体之一 24 形态G 双球菌有抗退色倾向 卡他莫拉菌革兰染色 25 营养要求不高血平板或巧克力平板 菌落灰白色 不透明 光滑凸起 继培养 菌落干燥 坚硬 整体推移感 不易乳化 NS中自凝 26 微生物检验 中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本呼吸道感染患者采取合格痰标本或支气管灌洗液口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本痰液标本直接涂片革兰染色如出现多个中性粒细胞 柱状上皮细胞以及大量的直径为0 5 1 5 m革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染 27 培养及鉴定 血琼