生物药物综合实验----植物原生质体的制备PPT课件.ppt_第1页
生物药物综合实验----植物原生质体的制备PPT课件.ppt_第2页
生物药物综合实验----植物原生质体的制备PPT课件.ppt_第3页
生物药物综合实验----植物原生质体的制备PPT课件.ppt_第4页
生物药物综合实验----植物原生质体的制备PPT课件.ppt_第5页
已阅读5页，还剩9页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

生物药物综合实验 王维彬 1 实验八 植物原生质体的制备 实验目的实验原理实验器材实验方法实验结果注意事项思考题 2 学习用酶溶解细胞壁的方法制备原生质体 为细胞生理研究提供必要基础 掌握植物原生质体分离的基本原理及其操作过程 实验目的 3 植物原生质体是指包在植物细胞壁内的生活物质 可通过混合酶液消化细胞壁而获得 原生质体经适宜的培养能合成新壁 并进行细胞分裂 经特殊诱导可生成完整植株 除去细胞壁后为原生质所包围的 裸露细胞 是开展基础研究的理想材料 其中酶解法分离原生质体是一个常用的技术 其原理是植物细胞壁主要由纤维素 半纤维素和果胶质组成 因而使用纤维素酶 半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分 除去细胞壁 实验原理 4 材料 油菜或菠菜或烟草叶片试剂 1 酶混合液1 纤维素酶1 果胶酶0 7mol L甘露醇0 7mmol LKH2PO410mmol LCaCl2 2H2OpH6 8 7 0 实验器材 5 2 12 甘露醇 3 0 16mol LCaCl2 4 20 蔗糖液仪器 离心机 显微镜等 6 1 材料称取与质壁分离称取0 5g材料 撕去叶下表皮 先切成大块 蒸馏水冲洗4 5次 加入12 甘露醇 质壁分离0 5h 滤去甘露醇 将材料用镊子夹取转入放有滤纸的培养皿中 吸干叶片表面水分 将材料切成0 5cm2小块备用 实验方法 7 2 酶解将切碎的材料放入到培养皿中 取酶混合液5ml到培养皿中 让去除下表皮的一面接触酶液 黑暗下酶解1 5小时 中间轻晃几次 8 3 原生质体的收集与纯化 1 将酶 原生质体混合液收集于10mL刻度离心管中 盖盖 600 800r min离心7min 使原生质体沉降 2 去上清液 留沉淀即收集的原生质体 向离心管中缓缓加入0 16mol L氯化钙液约2mL 轻轻吹打均匀 使沉淀悬浮 9 3 用注射器向离心管底部缓缓注入20 蔗糖液约2 3mL 出现下部蔗糖液 上部原生质体悬浮液 4 以600rpm离心10分钟 在两液相之间出现一条绿色带 便是纯净的原生质体 10 4 原生质体的观察用吸管取一滴纯化好的原生质体放在载玻片上 用吸水纸将多余液体吸干 置显微镜下进行观察 11 实验结果 12 1 从理论上讲 植物体的任何一部分都可以通过酶解作用去除细胞壁而得到原生质体 但在实际操作中 只有幼嫩的组织才能完成去壁的过程 所以 为了制备健康的原生质体 一般选用根尖 茎尖 嫩叶及对数生长期的愈伤组织为材料 一旦细胞具有木质化或次生加厚的外壁 则不能被酶降解 因此 取材成为实验成功与否的首要问题 2 在离心过
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论