PBS缓冲液的配制方法

PBS 缓冲液配方 不管是免疫组化 还是细胞培养中 常用到 PBS 缓冲液 下面 是我们实验室的配方 供大家参考 我们实验室的配方 A 液 0 1mol L 磷酸二氢钾 磷酸二氢钾 KH2PO4 MW136 09 1 361g 加双蒸水至 100ml B 液 0 1mol L 磷酸氢二钠 酸酸氢二钠 Na2HPO4 2H2O MW177 99 1 78g 加双蒸水至 100ml 或者酸酸氢二钠 Na2HPO4 12H2O MW358 14 3 58g 加双蒸水 至 100ml pH A 液 ml B 液 ml 5 60 9 50 0 25 5 91 9 00 1 00 6 24 8 00 2 00 6 47 7 00 3 00 6 64 6 00 4 00 6 81 5 00 5 00 6 98 4 00 6 00 7 17 3 00 7 00 7 38 2 00 8 00 7 73 1 00 9 00 8 04 0 50 9 50 一般免疫组化用 PBS 都只包含 Na2HPO4 12H2O 磷酸氢二钠 NaH2PO4 2H2O 磷酸二氢钠 Nacl 用于细胞培养的 PBS 需含有氯化钾 称取 8g NaCl 0 2g KCl 1 44g Na2HPO4 和 0 24g KH2PO4 溶于 800ml 蒸馏水中 用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7 4 最后加蒸馏水定 容至 1L 即可 0 01M PBS 缓冲液 称取 NaCl 8g KCl 0 2g Na2HPO4 12H2O 3 63g KH2PO4 0 24g 溶于 900ml 双蒸水中 用盐酸调 pH 值至 7 4 加水定容至 1L 常温 保存备用 PBS 是最普遍不过的实验室缓冲液 但其配方各异 以下是我的总 结 母液的配制 0 2M Na2HPO4 称取 71 6g Na2HPO4 12H2O 溶于 1000ml 水 0 2M NaH2PO4 称取 31 2g NaH2PO4 2H2O 溶于 1000ml 水 各种浓度 PB pH 7 4 的配制 先配 0 2M PB pH 7 4 100ml 取 19ml 0 2mol L 的 NaH2PO4 81ml 0 2mol L 的 Na2HPO4 即可 然后 只需将 0 2M PB pH 7 4 按相应比例适当稀释 即可 如 0 1M PB PH 7 4 取 500ml 0 2M PB 加水稀释至 1000ml 即可 0 01M PB PH 7 4 取 50ml 0 2M PB 加水稀释至 1000ml 即可 0 02M PB PH 7 4 取 100ml 0 2 M PB 加水稀释至 1000ml 即 可 若需要 NaCL 的话 加入 NaCL 至 0 9 g 100ml 即可 另 其它各种另 PH 值的 0 2M PB 100ml 配方 pH 0 2M NaH2PO4 ml 0 2M Na2HPO4 ml 5 7 93 5 6 5 5 8 92 8 5 9 90 10 6 0 87 7 12 3 6 1 85 15 6 2 81 5 18 5 6 3 77 5 22 5 6 4 73 5 26 5 6 5 68 5 31 5 6 6 62 5 37 5 6 7 56 5 43 5 6 8 51 49 6 9 45 55 7 0 38 62 7 1 33 67 7 2 28 72 7 3 23 77 7 4 19ml 81ml 7 5 16 84 7 6 13 87 7 7 10 5 0 5 7 8 8 5 91 5 7 9 7 93 8 0 5 3 94 7 磷酸盐缓冲液 Phosphate Buffer PB 磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓 冲液配方 磷酸盐缓冲液 Phosphate Buffer PB 试剂 NaH2PO4 2H2O Na2HPO4 12H2O 配制方法 配制时 常先配制 0 2mol L 的 NaH2PO4 和 0 2mol L 的 Na2HPO4 两者按一定比例混合即成 0 2mol L 的磷酸盐缓冲液 PB 根据需要可配制不同浓度的 PB 和 PBS 1 0 2mol L 的 Na2HPO4 称取 Na2HPO4 12H2O 31 2g 或 NaH2PO4 H2O 27 6g 加重蒸水至 1000ml 溶解 2 0 2mol L 的 Na2HPO4 称取 NaHPO4 12H2O 71 632g 或 Na2HPO4 7H2O 53 6g 或 Na2HPO4 2H2O 35 6g 加重蒸水至 1000ml 溶解 3 0 2mol L pH7 4 的 PB 的配制 取 19ml 0 2mol L 的 NaH2PO4 和 81ml 0 2mol L 的 Na2HPO4 12H2O 充分混合即为 0 2mol L 的 PB pH 约为 7 4 7 5 若 pH 偏高或偏低 可通过改变二者的比 例来加以调整 室温保存即可 0 2mol L 磷酸盐缓冲液 pH5 7 8 0 pH 0 2mol L NaH2PO4 ml 0 2mol L Na2HPO4 ml 5 7 93 5 6 5 5 8 92 0 8 0 5 9 90 0 10 0 6 0 87 7 12 3 6 1 85 0 15 0 6 2 81 5 18 5 6 3 77 5 22 5 6 4 73 5 26 5 6 5 68 5 31 5 6 6 62 5 37 5 6 7 56 5 43 5 6 8 51 0 49 0 6 9 45 0 55 0 7 0 39 0 61 0 7 1 33 0 67 0 7 2 28 0 72 0 7 3 23 0 67 0 7 4 19 0 81 0 7 5 16 0 84 0 7 6 13 0 87 0 7 7 10 5 89 5 7 8 8 5 91 5 7 9 7 0 93 0 8 0 5 3 94 7 关于磷酸缓冲溶液的知识 我在网上搜索了好多帖子 但是还是不 能确定正确的答案 现在把他们链接过来 希望有高手们参与讨论 我会把最终的正确解答整理出来 提供给大家 PBS 可以为三种溶液的英文缩写 分别是 1 磷酸盐缓冲溶液 phosphate buffered solution 2 磷酸盐缓冲盐水 phosphate buffered saline 及 3 磷酸盐缓冲钠 phosphate buffered sodium 其配制方法不同 pH 值不同 发挥的生物学作用亦不完全相同 如无特殊说明 生物学上常用的 PBS 是中性磷酸盐缓冲溶液 phos phate buffered solution 无钙镁离子磷酸缓冲盐水 PBS 0 15Mol L PH 7 2 NaCl 8 0g KCl 0 2g Na2HPO4 1 15g 如为 Na2HPO4 12H2O 则为 2 89g KH2PO4 0 2g 将上述试剂依次溶于 1 000ml 去离子水中 完全溶解后 115 高压 灭菌 10min 15min 存在 4 冰箱中备用 此液可用于配制和稀释细 胞分散剂以及洗涤细胞培养物 我们用的都是第二种 问题 1 磷酸盐缓冲盐水 phosphate buffered sodium 为什么用 第三种或第一种呢 这么多年以来我都以为 PBS 就是磷酸盐缓冲溶液 其他两种说 法的英语名称常见到 不过我一直都以为他们是差不多的东西 不 同的汉语翻译倒是第一次听说 我们公司用的 PBS 有很多种 抗体组用的中和 PBS 配方就比较 简单 没有 K 离子 只起到缓冲 PH 的作用 Na2HPO4 KH2PO 4 按照不同比例混匀 可以得到不同 PH 的缓冲液 用于不同目的 这个在分子生物学中用得很多 用于活细胞或者细菌处理的 为 了保持渗透压 会加入其他的溶液 最常见的就是 NaCl 和 KCl 调 节离子浓度 以上是个人的理解 欢迎批评 问题 2 既然抗体组的 PBS 是起到缓冲 PH 的作用 那加入 80G 的 NACL 作用是什么 需要平衡渗透压吗 还有加入 K 离子的是不是 因为细胞上 NA K 泵的原因啊 血清里面又没有细胞 何来 NA K 泵一说啊 我觉得之所以这么配 其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟 罢了 血清里面又没有细胞 何来 NA K 泵一说啊 我没说血清撒 我们用的又没加 K 我是说加了 K 的的 问题 3 不加 NACL 会怎么样啊 多省钱啊 在中和磷酸盐缓冲液中 NaCl 的主要作用应当是保持一定的离 子浓度 以维持抗体的活性 在离子浓度过高或过