药物分析第三章.ppt

第三章药物的杂质检查 杂质指存在于药物中的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效 甚至对人体健康有害的物质 总结来说 杂质就是 1 有毒副作用的物质2 本身无毒副作用 但影响药物的稳定性和疗效的物质简言之 任何影响药品纯度的物质 第一节药物中杂质的来源及其种类一 杂质的来源 一 药物纯度的概念药物的纯度即药物的纯净程度 是反映药品质量的一项重要指标 含有杂质是影响药物纯度的主要因素 因此纯度检查通常又称为杂质检查 注意 药物纯度与化学纯度的区别化学试剂纯度不考虑生理作用 杂质限量只是从可能引起化学变化对使用影响来限定 药物纯度从用药安全 有效和药物稳定性的影响考虑 比如 BaSO4 可溶性钡盐检项 药物的纯度考虑杂质的生理作用 药品只有两个等级 合格或不合格 化学试剂有很多等级 如基准试剂 优级纯 GR 分析纯 AR 化学纯 CP 色谱纯 光谱纯等 二 药物杂质的来源 1 生产过程中引入 1 原料 反应中间体及副产物 2 试剂 溶剂 催化剂类 3 生产中所用金属器皿 装置以及其他不耐酸 碱的金属工具所带来的杂质 葡萄糖制备过程中产生杂质 酸度 水解试剂带入乙醇中不溶物 水解中间体 糊精 SO32 产品用H2SO3漂白可溶性淀粉 水解不完全 2 贮藏过程中产生 水解 氧化 分解 异构化 晶形转变 聚合 潮解和发霉等 易发生水解反应的结构 酯 内酯 酰胺 卤代烃 苷类等 易发生氧化反应的结构 醚 醛 酚羟基 巯基 亚硝基 双键等 贮藏过程中产生 外界条件影响 日光 空气 温度 湿度 微生物等引起药物产生 例如 麻醉乙醚醛及有毒的过氧化物 1 在药物生产过程中引入杂质的途径为 ABCD A 原料不纯或部分未反应完全的原料造成B 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成C 需加入的各种试剂产生吸附 共沉淀生成混晶等造成D 所用金属器皿及装置等引入杂质E 由于操作不妥 日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质 二 杂质的分类 一 按性质分类1 影响药物稳定性的杂质如 金属离子会催化氧化还原反应2 毒性杂质如药物中含有重金属和砷盐的过量存在3 信号杂质本身一般无害 但其含量的多少可以反应出药物的纯度水平 因此称其为 信号杂质 如氯化物 硫酸盐的等属于信号杂质 二 按来源分类1 一般杂质一般杂质是指在自然界中分布较广泛 在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质 如酸 碱 水分 氯化物 硫酸盐 砷盐 重金属等 2 特殊杂质是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质 如 阿司匹林中的水杨酸 甲硝唑中的2 甲基 5 硝基咪唑等 注意 药典中各药物品种项下规定的杂质检查项目 是指正常生产和贮存中可能产生并需控制的杂质 药典中未规定检查的杂质 一般有以下几种情况 在正常生产和贮藏过程中不可能引入 含量甚微或临床限量允许较宽 对人体和药物质量无不良影响 有些药物中可能含有某些杂质 对其认识尚不够 有待积累资料 也可暂缓订入检查项下 凡药典未规定检查的杂质 一般不需要检查 但遇特殊情况如检验某药物时发现性状和反应不正常 应根据需要进一步追踪 检查 若药厂在生产上改变了原料或方法 也应根据实际情况检查其他可能引入的杂质 三 药物的杂质检查方法杂质的限量是指药物中所含杂质的最大允许量称为杂质限量 通常用百分之几 或百万分之几 ppm10 6 来表示 允许杂质存在的最大量杂质限量 100 供试品量 一 对照法当供试品 S 中所含杂质的量是通过与一定量杂质标准溶液进行比较来确定时 杂质的最大允许量可由杂质标准溶液的浓度 C 与体积 V 的乘积获得 上式又可以表达为 标准溶液的浓度 标准溶液的体积杂质限量 100 供试品量或C VL 100 S 该法应该注意平行原则 即供试溶液和对照溶液应在完全相同的条件下反应 如加入的试剂 反应的温度 放置的时间均应相等 这样的结果才有可比性 注意 单位一致 稀释倍数 表示方法 ppm 应用示例一对乙酰氨基酚中氯化物检查取对乙酰氨基酚2 0g 加水100ml时 加热溶解后冷却 滤过 取滤液25ml 依法检查氯化物 中国药典 附录 A 所发生的浑浊与标准氯化钠溶液5 0ml 10 g mlCl 制成的对照液比较 不得更浓 问氯化物的限量是多少 解 C V10 10 6 5 0L 100 100 S2 0 25 100 0 01 应用示例二磷酸可待因中吗啡检查取本品0 10g 加盐酸溶液 9 1000 使溶解成5ml 加亚硝酸钠试液2ml 放置15分钟 加氨试液3ml 所显颜色与吗啡溶液 取无水吗啡2 0mg加盐酸溶液 9 1000 使溶解100ml 5 0ml用同一方法制成的对照液比较 不得更深 问限量为多少 解 C V2 0 100 5 0L 100 100 S0 10 103 0 1 应用示例三葡萄糖中重金属检查取葡萄糖4 0g 加水23ml溶解后 加醋酸盐缓冲液 pH3 5 2ml 依法检查重金属 中国药典附录 H 含重金属不得过百万分之五 取标准铅溶液多少ml 每1ml相当于10 g的Pb 解 L S5 10 6 4 0V 2 0mlC10 10 6 习题1 检查某药物中的砷盐 取标准砷溶液2ml 每1ml相当于1 g的As 制备标准砷斑 砷盐限量为0 0001 应取供试品的量为 B A 0 20gB 2 0gC 0 020gD 1 0gE 0 10g 已知 c 1 g ml 1 10 6g mlV 2mlL 0 0001 习题2 检查维生素C中的重金属时 若取样量为1 0g 要求含重金属不得过百万分之十 问应吸取标准铅溶液 每1ml 0 01mg的Pb 多少ml D 0 2mlB 0 4mlC 2mlD 1mlE 20ml 二 灵敏度法在供试品溶液中加入试剂 在一定条件下反应 以不出现正反应为合格 如 纯化水中检查氯化物 是在50ml水中加入硝酸与硝酸银试液 不得发生浑浊 特点 不需要对照品 三 比较法主要是含量测定 测定杂质的绝对含量 如测定吸收度 pH值等 使用此方法时 须注意平行原则 即供试品和标准溶液应在完全相同的条件下反应 所加入的试剂 反应的温度 放置的时间等均应相同 只有这样 反应的结果才有可比性 特点 准确测定杂质的含量 第二节一般杂质检查法掌握 一般杂质检查规则 药品检验标准操作规范 规定 1 遵循平行的原则 仪器的配对性如纳氏比色管应配对 如颜色 长度 刻度线高度相差不超过2mm 砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致 对照品和供试品要同步操作 2 正确的取样及供试品的称量范围 1g时不得超过 2 1g时不超过 1 3 正确的比色 比浊法 4 检查结果如果不符合规定或者在限度边缘时应对供试品管和对照品管各再进行复检二次 1 氯化物的检查 对照法 1 原理利用氯化物在硝酸银酸性溶液中与硝酸银试液发生作用 生成氯化银白色浑浊液 与一定量标准氯化银浑浊液比较 浑浊的度不得更大 HNO3药物 Cl AgNO3 AgCl 白色混浊 HNO3对照品 NaCl AgNO3 AgCl 白色混浊 供试品 稀HNO310ml H2O AgNO31ml 标准溶液 稀HNO310ml H2O AgNO31ml 暗处放置5min 避免AgCl分解 3 注意事项1 标准氯化钠溶液应为临用前配制 浓度为10ug ml的Cl 氯化物浓度以50ml中含50 g 80 g的Cl 相当于标准氯化钠溶液5 0ml 8 0ml 2 硝酸加入避免杂质干扰检查 除去CO2 3 SO2 4 C2O4 2 PO3 4的干扰 加速氯化银的形成 以50ml中含有稀硝酸10ml为宜 1 加速AgCl浑浊的形成 2 产生较好乳浊的形成 3 避免弱酸银盐如碳酸银 磷酸银以及氧化银沉淀的形成 3 供试液和对照液生成的是白色浑浊而不是白色沉淀 4 避光暗处放置5分钟 因为氯化银见光易分解 5 比浊的方法是置黑色背景下 自上而下观察 6 温度的影响 30 40 产生浊度最大且恒定 但作为浊度检查 供试品和对照品可在室温下平行操作 7 供试品如带颜色 通常采用消色法处理 1 外消色法 如高锰酸钾中氯化物的检查 可先加乙醇适量 使其还原褪色后再依法检查 2 内消色法 倍量法 8 其它干扰物质存在时 必须在检查前除去 1 有机药物的氯化物检查 溶于水的 直接检查 不溶于水的 多数采用加水振摇 使氯化物溶解 滤除不溶物或加热溶解 放冷析出沉淀 滤过 取滤液检查 2 检查有机氯 进行有机破坏 使有机氯转变为无机氯化物后检查 3 检查碘化物或溴化物中的氯化物时 选择适当方法去除干扰后再检查 习题1 药物中氯化物杂质检查 是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊 所用的稀酸是 B A 硫酸B 硝酸C 盐酸D 醋酸E 磷酸 2 采用硝酸银试液检查氯化物时 加入硝酸使溶液酸化的目的是 ABCDE A 加速生成氯化银浑浊反应B 消除某些弱酸盐的干扰C 消除碳酸盐干扰D 消除磷酸盐干扰E 避免氧化银沉淀生成 3 检查氯化物杂质时 一般取用标准氯化钠溶液 10 gCl ml 5 8ml的原因是 D A 使检查反应完全B 药物中含氯化物的量均在此范围C 加速反应D 所产生的浊度梯度明显E 避免干扰 4 当采用比浊法检查氯化物杂质时 若药物本身有颜色而干扰检查的话 应该选用的处理方法为 AB A 内消色法B 外消色法C 比色法D 差示比浊法E 差示可见分光法 5 下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件 ABC A 所用比色管需配套B 稀硝酸酸性下 10ml 50ml C 避光放置5分钟D 用硝酸银标准溶液做对照E 在白色背景下观察 二 硫酸盐检查法 对照品法 1 原理硫酸盐与氯化钡在HCl酸性溶液中 生成硫酸钡沉淀 与一定量的标准硫酸钾溶液在同样条件下生成的浑浊比较 浊度不得更大 HCl药物 SO2 4 Ba2 BaSO4 白色浑浊 HCl对照 K2SO4 BaCl2 BaSO4 白色浑浊 2 测定条件1 标准硫酸钾浓度为100ug ml的SO2 4 适宜比浊的浓度范围为每50ml溶液中含0 1mg 0 5mg的SO2 4 2 反应应在酸性条件下进行 且以50ml供试液含稀盐酸2ml为宜 3 供试液和对照液生成的是白色浑浊而不是白色沉淀 4 比浊的方法是置黑色背景下 自上而下观察 三 讨论1 盐酸的加入避免碳酸钡 磷酸钡沉淀生成 以50ml含盐酸2ml pH约为1为宜 2 供试溶液不澄清 用含盐酸的水洗涤滤纸中的硫酸盐后 过滤 如供试品有色 处理方法同氯化物检查法 习题 药物中硫酸盐检查时 所用的标准对照液是 D A 标准氯化钡B 标准醋酸铅溶液C 标准硝酸银溶液D 标准硫酸钾溶液E 以上都不对 三 铁盐检查法 一 原理硫氰酸盐法 对照法 Fe3 6SCN Fe SCN 3 6 红色 利用铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性的硫氰酸铁络合离子 与一定量的标准铁溶液在同样条件下生成红色进行比较 二 操作方法除另有规定外 取各药品项下规定量的供试品 加水溶解使成25ml 移置于50ml纳氏比色管 加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg 加水稀释至约35ml后 加30 硫氰酸铵溶液3ml 再加水适量使成50ml 如显色 立即与标准铁溶液一定量按相同方法制成的对照溶液比较 三 讨论1 标准铁溶液的要求 标准铁溶液每1ml相当于10 g的Fe3 比色时以50ml溶液中含10 g 50 gFe3 为宜 2 加入过量的硫氰酸铵的作用 为氧化剂 氧化供试品中的Fe2 为Fe3 同时可以防止硫氰酸铵受光照还原或分解 3 检查Fe2 和Fe3 4 某些药物 如葡萄糖 糊精和硫酸镁等 在检查过程中的处理 中国药典 附录中都有详细处理方法 5 某些酸根阴离子 如Cl PO4 SO4 枸橼酸根离子等 能与Fe3 形成有色配位化合物而干扰检查 6 某些有机药物在实验条件下不溶解或对检查有干扰的 需经炽灼破坏 使铁盐呈三氧化二铁留于残渣中 处理后检查 7 若供试品管的色调与对照品管不一致时 进行提取后再比色 巯基醋酸法 灵敏度较高 试剂较贵 习题1 中国药典 二部 规定铁盐的检查方法为 A A 硫氰酸盐法B 巯基醋酸法C 普鲁士蓝法D邻二氮菲法E 水杨酸显色法 习题2 中国药典 二部 规定 硫氰酸铵法检查铁盐时 加入氧化剂过硫酸铵的目的是 AB A 使药物中铁盐都转变为Fe3 B 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色C 使产生的红色产物颜色更深D 防止干扰E 便于观察 比较 习题3 中国药典收载的铁盐检查 主要是检查 D A FeB Fe2 C Fe3 D Fe2 和Fe3 E 以上都不对 四 重金属检查法重金属系指在实验条件下能硫代乙酰胺或硫化钠作用而显色的金属杂质 如银 铅 汞 铜 镉 锡 锑 铋等 在药品生产过程中遇到铅的机会较多 铅在体内又易积蓄中毒 故检查时以铅为代表 作为限量检查 二 操作方法 中国药典 现行版共收载有4种方法 第一法 硫代乙酰胺法 第二法 炽灼法 是将供试品在500 600 炽灼破坏后 再按第一法测定第三法 硫化钠法 是检查能溶于碱溶液而不能溶于酸溶液的药物 在碱性条件下用硫化钠做显色剂 第四法 微孔滤膜法 比较供试品和标准品砷斑的颜色 判定供试品重金属是否超标 第一法 硫代乙酰胺法适用对象 溶于水 稀酸和乙醇的药物原理 药物 Pb2 醋酸盐缓冲液 pH3 5 硫代乙酰胺 CH3CSNH2 PbS 黄色 棕黑 对照 PbNO3 醋酸盐缓冲液 pH3 5 硫代乙酰胺 CH3CSNH2 PbS 黄色 棕黑 2 测定条件 1 用硝酸铅配制标准铅贮备液 加硝酸防止Pb2 水解 标准铅溶液临用前稀释而成 标准硝酸铅溶液10 gPb2 ml 适宜比色范围为27ml溶液中含10 20 g的Pb2 2 本法用2mlpH3 5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为3 3 5 3 显色剂 从ChP 1990 开始改用硫代乙酰胺做显色剂 1 供试品如有色 需经处理后方可检查 外消色法 在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液 B 内消色法C 改用第四法 微孔滤膜过滤法 3 干扰及排除 2 若供试品中有微量Fe3 存在 会氧化硫化氢生成单质硫 干扰比色 加入抗坏血酸或盐酸羟胺 0 5 1 0g 还原Fe3 为Fe2 可消除干扰 3 若药物本身能生成不溶性硫化物时 可加入掩蔽剂消除干扰 如ZnSO4中重金属的检查 要在碱性下加KCN掩蔽Zn2 后 依第三法检查 二 第二法炽灼残渣法 适用于含芳环 杂环以及不溶于水 稀酸 乙醇及碱的有机药物 1 原理对照法500 600 炽灼后的残渣 经处理后 依一法检查 三 第三法硫化钠法 适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物 如磺胺类 巴比妥类 1 原理 对照法 2 测定条件 1 NaOH碱性条件下 2 显色剂 硫化钠 第四法微孔滤膜法 适用于含2 5 g重金属杂质及有色供试液的检查 依一法检查 结果微孔滤膜过滤后比较色斑 习题1 重金属检查中 加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是 B A 1 5B 3 5C 7 5D 9 5E 11 5 2 微孔滤膜法是用来检查 C A 氯化物B 砷盐C 重金属D 硫化物E 氰化物 3 下面哪些方法为 中国药典 收载的重金属检查方法 ACD A 500 600 炽灼残渣后 按一法操作B pH3 3 5条件下 加入硫化氢试液C 碱性下 加入硫化钠试液D 按一法操作 结果用微孔滤膜过滤后观察色斑E 以上都对 五 砷盐检查法 一 古蔡氏法1 检查原理金属锌与酸作用产生新生态的氢 与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢 遇溴化汞试纸 产生黄色至棕色的砷斑 与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较 颜色不得更深 优点 灵敏度高1ugAs可检出 2 操作方法 1 标准砷斑用2ml标准砷溶液制备 2 供试品如需经有机破坏 标准砷溶液应平行操作 操作 精密量取标准砷溶液2ml 置锥形瓶中 加盐酸5ml与水21ml 再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴 在室温放置10min后 加锌粒2g 立即将装妥的导气管c密塞于A瓶上 并将A瓶置25 40 水浴中 反应45min 取出溴化汞试纸 即得 另取规定量的供试品 加盐酸5ml与水23ml溶解后 照标准砷斑制备 依法操作 将生成的砷斑与标准砷斑比较 不得更深 3 测定条件 测定条件 1 标准砷溶液临用新配 1 gAs ml 2 酸为反应物 酸量应足够 所以加浓盐酸5ml 3 酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是 A 还原As5 为As3 加快反应速度 B 碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I I 与反应中生成的Zn2 能形成稳定的配位离子 有利于生成砷化氢的反应不断进行 C 氯化亚锡与锌作用 在锌表面形成锌锡齐 使氢气均匀而连续地发生 D 可抑制微量Sb的干扰 在实验条件下 100 gSb存在不干扰 4 醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰 醋酸铅棉花60mg装管高度60 80mm 5 锌粒应无砷 6 砷斑不稳定 应立即观察 4 干扰及排除 1 供试品若为硫化物 亚硫酸盐 硫代硫酸盐时 加HNO3 使氧化成硫酸盐 以除去干扰 如硫代硫酸钠中砷盐的检查 2 供试品若为铁盐 需先加酸性氯化亚锡试液 将Fe3 还原为Fe2 如枸橼酸铁铵中砷盐的检查 3 具环状结构的有机药物 要先行有机破坏后再进行检查 常用的有机破坏方法 碱破坏法 石灰法 无水碳酸钠碱融法酸破坏法 如葡萄糖中砷盐的检查 二 二乙基二硫代氨基甲酸银法 Ag DDC法 不仅可用于砷盐的限量检查 也可用作微量砷盐的含量测定 1 原理金属锌与酸作用 产生新生态的氢 与微量砷盐反应 生成具有挥发性的砷化氢 砷化氢遇二乙基二硫代氨基甲酸银 使其还原产生红色的胶态银 用目视比色法或在510nm波长处测定吸收度 再与一定量标准砷溶液用同法处理后得到的有色溶液进行比较 习题1 在药物的杂质检查中 其限量一般不超过百万分之十的是 D A 氯化物B 硫酸盐C 醋酸盐D 砷盐E 淀粉 2 古蔡氏法中 SnC12的作用有 ACD A 使As5 As3 B 除去H2SC 除去I2D 组成锌锡齐E 除去其它杂质 3 Ag DDC法检查砷盐的原理为 砷化氢与Ag DDC吡啶作用 生成的物质是 E A 砷斑B 锑斑C 胶态砷D 三氧化二砷E 胶态银 4 中国药典收载的古蔡法检查砷盐的基本原理是 BE A 与锌 酸作用生成H2S气体B 与锌 酸作用生成AsH3气体C 产生的气体遇氯化汞试纸产生砷斑D 比较供试品砷斑与标准品砷斑的面积大小E 比较供试品砷斑与标准品砷斑的颜色强度 例10 古蔡氏法检砷 药典规定制备标准砷斑时 应取标准砷溶液 C A 1mlB 5mlC 2mlD 依限量大小决定E 以上都不对 六 干燥失重测定法干燥失重系指药品在规定的条件下 经干燥后所减失的量 以百分率表示 干燥失重的量应恒重 由干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定的条件下继续干燥1h后进行 干燥失重的内容物主要指水分 也包括其它挥发性物质 如残留的挥发性有机溶剂等 干燥失重测定方法主要有下列四种 一 常压干燥法本法适用于受热较稳定的药物 中国药典收载的药物有重酒石酸间羟胺 胆茶碱 度米芬 洋地黄毒苷 盐酸乙胺丁醇 格列吡嗪 核黄素磷酸钠 磺胺嘧啶银 磷酸二氢钠等40余种采用本法测定 方法 将供试品置于相同条件下已干燥至恒重的扁形称量瓶中 在烘箱内于规定温度下干燥至恒重 由减失的重量和取样量即可计算供试品的干燥失重 干燥温度一般为105 二 干燥剂干燥法本法适用于受热分解 或易于挥发的供试品 中国药典收载的药物如盐酸丁丙诺啡 盐酸米托蒽醌 盐酸洛贝林 氯化铵 苯佐卡因 硝酸异山梨酯 马来酸麦角新碱等采用本法测定 方法将供试品置干燥器中 利用干燥器内的干燥剂吸收水分 干燥至恒重 注意事项药典中常用的干燥剂有硅胶 硫酸和五氧化二磷等 三 减压干燥法本法适用于熔点低 受热不稳定或难赶除水分的药物 中国药典收载的药物有盐酸阿糖胞苷 盐酸去甲万古霉素 山梨醇 乙酰半胱氨酸 洛莫司汀癸氟奋乃静 绒促性素 盐酸丁丙诺啡等多种 原理相对于常压 减压条件下干燥温度降低 干燥时间缩短 方法在一定温度下 采用减压干燥器或恒温减压干燥箱干燥 压力应控制在2 67kPa 20mmHg 以下 干燥失重的计算供试品干燥至恒重后减失的重量干燥失重 100 供试品取样量 四 热分析法在程序控制温度的情况下 测定物质的物理 化学变化与温度关系的一类仪器分析方法称为热分析法 该方法具有样品用量少 灵敏 快速等优点 在药物分析中广泛用于物质的熔点 多晶型 纯度 溶剂化物 水分及热解产物的测定 习题1 干燥失重测定的方法有 BCDE A 炽灼 500 600 法B 常压恒温干澡法C 减压干燥法D 干燥剂干燥法E 减压干燥剂干燥法 2 干燥失重测定中应注意哪几个方面 ABCD A 供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mmB 干燥温度一般为105 C 可用干燥剂干燥D 主要指水分和挥发性物质E 测定时间不超过3小时 七 水分测定法 中国药典 现行版采用费休氏法 甲苯法测定药物中的水分 主要用费休氏法 该法又叫卡尔费休氏水分滴定法 一 测定原理1 属于非水溶液中的氧化还原滴定 2 费休氏标准滴定液称费休氏试液 由碘 二氧化硫 吡啶和甲醇按一定比例组成 3 费休氏水分测定法是利用碘在吡啶和甲醇溶液中氧化二氧化硫时需要定量的水参加反应的原理来测定样品中的水分含量 本法可适用任何可溶解于费休氏试液但不与费休氏试液起化学反应的药品的水分测定 4 滴定终点的方法有 自身作指示剂 利用碘的颜色指示终点 永停滴定法 依法操作 终点时电流计指针突然偏转 并持续数分钟不退回 二 操作方法 采用水分测定仪直接标定费休氏试液 采用滴定方法 用永停滴定法指示终点并做空白试验 按下式计算费休试剂的滴定度 F 标定应取3份以上 3次连续标定结果应在 1 以内 以平均值作为费休氏试液的强度 A 供试品消耗的Fisher试液的体积B 空白消耗的Fisher试液的体积F 每1mlFisher试剂相当于水的重量 mg W 供试品的重量 八 炽灼残渣检查法炽灼残渣检查法是检查有机药物中混入的各种无机杂质 金属氧化物或无机盐类 原理样品炭化后 H2SO4湿润 700 800 炽灼至恒重 炽灼残渣 硫酸灰分 限量一般为0 1 0 2 残渣及坩埚重 坩埚重炽灼残渣 100 供试品取样量 恒重系指供试品连续两次干燥或灼烧后的重量差异在0 3mg以下的重量 干燥至恒重的第二次级以后各次称重均应在规定条件下干燥1h后进行干燥炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30min后进行 注意事项1 供试品的取用量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定 样品量过多 炭化和灰化时间太长 样品量过少 称量误差增大 一般应使炽灼残渣量为1 2mg 残渣限量一般为0 1 0 2 当限量为0 1 取样量约1g 限量为0 05 取样约2g 限量为1 以上者 取样可在1g以下 2 恒重系指供试品连续两次炽灼或干燥后的重量差异在0 3mg以下 炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30min后进行 3 如果残渣需做重金属检查 炽灼温度在500 600 至恒重 否则重金属检查结果偏低 4 加硫酸处理是使杂质转化为较为稳定的硫酸盐 并帮助有机物炭化 习题1 炽灼残渣检查法一般加热恒重的温度为 C A 500 600 B 600 700 C 700 800 D 800 1000 E 1000 1200 2 炽灼残渣的限量一般为 E A 1 B 0 5 1 C 0 4 0 5 D 0 2 0 3 E 0 1 0 2 3 炽灼残渣检查后 将残渣留作重金属检查时 炽灼温度应为 A A 500 600 B 600 700 C 700 800 D 800 1000 E 1000 1200 九 易炭化物检查法易炭化物检查法是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质 方法 这类杂质多数结构未知 常采用标准比色液比色的方法进行检查 习题1 易炭化物是指 B A 药物中存在的有色杂质B 药物中遇H2SO4易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质C 药物中遇H2SO4易炭化或易氧化而呈色的微量无机杂质D 有机氧化物E 有色络合物 十 溶液颜色检查法药物溶液的颜色及其与规定颜色的差异能在一定程度上反映药物的纯度 对溶液颜色进行检查 可控制药物中有色杂质的含量 中国药典采用的检查方法有三种 一 目视比色法标准比色液 二 分光光度法分光光度仪 三 色差计法色差计 目视比色法即与标准比色液比较的方法 全波长范围定性观察 观察方法 平视 颜色较深时从上向下 颜色较浅时 第二法分光光度法单一波长定量 第三法色差计法全波长范围定量 本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值 对其颜色进行定量表述和分析的方法 测色仪器一般为光电积分型色差计 标准比色液由三种有色金属盐重铬酸钾 硫酸铜 氯化钴按不同比例配制而成 标准比色液的配制 十一 澄清度检查法1 原理检查药物中微量的不溶性杂质 常采用与浊度标准液比浊的方法进行比较 2 浊度标准液的配制中国药典规定用浊度标准液作为澄清度检查的标准 反应原理 乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛 甲醛与肼缩合生成甲醛腙 不溶于水 形成白色浑浊 注意 在冷藏条件下使用2个月 使用前必须摇匀 1 00 硫酸肼溶液与10 00 乌洛托品稀释溶液等量混合配制浊度标准贮备液 浊稀释度标准原液 浊度标准液 5个级号 浊度标准液配制 表3 1不同级号浊度标准液 级号0 51234浊度标准原液 mL 2 55 010 030 050 0水 mL 97 595 090 070 050 0 中国药典规定 供试品溶液的澄清度与所用溶剂相同或未超过级号为0 5号浊度标准液时 为澄清 超过0 5浊度标准液时 则不澄清 判断 中国药典规定 供试品溶液的澄清度与所用溶剂相同或未超过0 5号浊度标准液时 为澄清 供试品溶液的乳色比0 5号明显 而不及1级时 称为浊度0 5号 其余依此类推 供制备注射用的原料药物往往既要检查溶液澄清度又要检查溶液颜色 如华法林钠的检查 取本品0 20g 加丙酮l0ml溶解后 溶液应澄清无色 如显浑浊与1号浊度标准液比较 不得更浓 如显色 置4cm吸收池中 采用分光光度法检查 在460nm波长处测定的吸收度 不得超过0 12 十二 酸碱度检查法 一 酸碱滴定法 采用滴定的方法 以消耗酸或碱滴定液的毫升数作为限度指标 例 NaCl的酸碱度样品5 0g 水50ml溶解 溴麝香草酚蓝 pH6 0 7 6 黄 蓝 指示液2滴 若显黄色 酸性 加0 02mol LNaOH滴定液0 1ml 应变兰色 若显蓝色或绿色 碱性 加0 02mol LHCl滴定液0 1ml 应变黄色 二 指示剂法 利用规定的指示剂的变色pH范围来控制供试液中酸碱性杂质限量 例 纯化水的酸碱度样品10ml 甲基红 pH4 2 6 3 红 黄 指示液2滴 不得显红色 酸度 溴麝香草酚蓝指示液5滴 不得显蓝色 碱度 蒸馏水的pH范围4 2 7 6 三 pH测定法 采用pH酸度计测定溶液的pH 准确度最高 例 注射用水的pH值应为5 0 7 0 习题 中国药典 现行版对药物的酸碱度检查 采用的方法有 ABE A 酸碱滴定法B 指示剂法C 旋光法D 折光法E pH测定法 十三 残留溶剂测定法主要检查在合成原料药 辅料或制剂生产过程中使用的 但在工艺生产中未能完全除去的有机溶剂 如苯 氯仿 二氯甲烷 吡啶 甲烷 环氧乙烷等等 一 测定方法 中国药典 采用气相色谱法测定 1 色谱条件 固定相 直径为0 25 0 18mm的二乙烯苯 乙基乙烯苯型高分子多孔小球2 测定的方法有三种 第一法溶液直接进样测定法 第二法顶空进样法 适用于挥发性大组分的分析第三法顶空进样程序升温法 3 测定前进行系统适用性试验 1 理论板数N 应大于1000 2 分离度R 应大于1 5 3 标准偏差 RSD 内标法应不大于5 外标法应不大于10 残留有机溶剂测定的方法和限量 十四灰分测定法 总灰分测定法 测定用的供试品须粉碎 使能通过二号筛 混合均匀后 取供试品2 3g 如须测定酸不溶性灰分 可取供试品3 5g 置炽灼至恒重的坩埚中 称定重量 准确至0 01g 缓缓炽热 注意避免燃烧 至完全炭化时 逐渐升高温度至500 600 使完全灰化并至恒重 根据残渣重量 计算供试品中含总灰分的百分数 如供试品不易灰化 可将坩埚放冷 加热水或10 硝酸铵溶液2ml 使残渣湿润 然后置水浴上蒸干 残渣照前法炽灼 至坩埚内容物完全灰化 酸不溶性灰分测定法 取上项所得的灰分 在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml 用表面皿覆盖坩埚 置水浴上加热10min 表面皿用热水5ml冲洗 洗液并入坩埚中 用无灰滤纸滤过 坩埚内的残渣用水洗于滤纸上 并洗涤至洗液不显氯化物反应为止 滤渣连同滤纸移至同一坩埚中 干燥 炽灼至恒重 根据残渣重量 计算供试品中酸不溶性灰分的含量 十五农药残留检查法中药材在历史上是世界各国医疗的主要药物 在中国有着2000多年的历史 然而中药材的质量分析的标准确实最近一个世纪才得到各方面的重视 近几年来 随着中国出口的中药材 中成药中农药残留量超标 中医药在的声誉受到了一定的影响 农药残留的要求标准的制定即测量方法的规定也迫在眉睫 一般所谓的农药残留 是农药使用后一个时期内没有被分解而残留于生物体 收获物 土壤 水体 大气中的微量农药原体 有毒代谢物 降解物和杂质的总称 目前所使用的农药 有些在较短时间内可以通过生物降解而生成无害物质 但是有些例如有机氯和有机磷类农药却是残留性强的农药 而我们一般的意义上的农药残留监测基本上是监测有机磷和有机氯的农药残留 有机磷农药是我国目前生产最多 使用最广的一类农药 它是一种神经性毒物 在人体内长期蓄积滞留会引发慢性中毒 导致人体神经功能紊乱 发生出汗 迟钝 神经失常和语言失常等症状 有机氯农药是一类广谱杀虫剂 其化学性质稳定 脂溶性大 易在体内蓄积 严重危害人体健康 目前个别样品仍能在药材中检出 药材生长周期较长 因此容易含有残留农药的污染 随着对药材农药残留的报道日益增多 人们对农药残留危害的认识也越来越深入 药典对其制定检测方法也越来越全面 越来越科学 中国药典 2000年版首次规定了9种有机氯农药残留的检测方法 2005年版 除甘草 黄芪等药材外 对其余药材均未提出限量要求 我国最近的第2010版 中国药典 中不仅规定了9种有机氯农药残留的检测方法 而且规定了12种有机磷类的检测方法 还规定了3种拟除虫菊酯农药残留量的检测方法 然而在限量标准方面仅规定了甘草和黄芪两种药物的六六六 滴滴涕 五氯硝基苯的限量标准 其它中药材尚未涉及 第三节特殊杂质检查法概念 不同的药物 由于其合成工艺 原料和结构性能等不同 在生产和贮藏过程中可能引入的中间体 分解产物及副产物等特有的杂质 即特殊杂质 药物中特殊杂质的检查 主要是根据药物和杂质在物理和化学性质上的差异来进行的 方法的专属性十分关键 一 利用药物和杂质在物理性质上的差异 一 臭味及挥发性质的差异例如 黄凡士林中异性有机物检查 本品2 0g 直火加热无辛味 浓过氧化氢中不挥发性杂质检查 10ml水浴蒸干残渣 15mg 二 颜色差异例如 磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查 取本品2 0g 加NaOH试液10ml 加水25ml 与黄色3号比色液比 不得更深 三 溶解行为的差异 如葡萄糖中检查糊精 葡萄糖在乙醇中加热溶解 糊精则不溶 规定应澄明 这是检查样品的澄清度 四 旋光性质的差异1 药物有旋光度而杂质无例 黄体酮在乙醇中的比旋度为 186 198 2 杂质有旋光度而药物无例 硫酸阿托品 50mg ml 中莨菪碱的检查 规定旋光度不得过 0 40 五 对光吸收性质的差异1 紫外分光光度法 利用药物和待检杂质对光选择吸收性质的差异进行 220260300nm 肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线 max310nm 2 原子吸收分光光度法 是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气 吸收发自光源的该元素特定波长的程度 以求出药物中待测元素的含量 2 红外分光光度法 主要用于药物中无效或低效晶型检查 如甲苯咪唑中A晶型检查 二 利用药物和杂质在化学性质上的差异1 酸碱度的差异 若有杂质 可用如下方法检查 规定消耗液的体积例如己酸羟孕酮中正己酐 对甲苯磺酸检查 NaOH0 02mol L 取本品0 20g 中性乙醇 溴麝香草酚蓝微蓝色 0 50ml pH测定法例如乙琥胺中2 甲基 2 乙基丁二酸检查 0 01g mlpH3 0 4 5 指示剂法例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查 其水溶液不得使甲基橙显红色 2 氧化还原性的差异 利用药物与杂质氧化还原电位的差异进行的检查 盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查 后者可被碘氧化生成水溶性绿色化合物 因此ChP规定 本品50mg 4mlH2O 1滴I2 1mol L 5ml乙醚乙醚层不得显红色 水层不得显绿色 3 杂质与一定试剂反应产生沉淀如生物碱中其它生物碱的检查 多采用此方法 硝酸毛果芸香碱中其他生物的检查 后者 氨水 K2Cr2O7 生成沉淀ChP规定 本品0 2g 20mlH2O两份 I份 数滴氨试液 另1份 数滴K2Cr2O7试液 均不得发生混浊 4 杂质与一定的试剂反应产生颜色 利用药物中的杂质与某些试剂发生氧化 络合 耦合等显色反应 进行药物中的杂质检查 例一 盐酸普萘洛尔中游离 萘酚检查 利用后者可与重氮盐发生重氮化 偶合反应 生成偶氮染料 ChP规定 供试品20mg 乙醇与10 NaOH液各2ml 重氮苯磺酸试液1ml 放置3min 如显色 与0 3ml 萘酚对照液 20 g ml 比较不得更深 例二 碘他拉酸中氨基化合物的检查 利用重氮化 偶合反应ChP规定 供试品2 5mg ml经重氮化 偶合反应后 在波长485nm测得A 0 25 三 利用药物和杂质在色谱行为上的差异 1 薄层色谱法 利用药物和杂质对吸附剂的吸附或展开