DB32T 3762.5-2020 新型冠状病毒检测技术规范 第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序

ICS11.020C 62DB32江苏省地方标准DB 32/T 3762.52020新型冠状病毒检测技术规范第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序 Technical specifications for SARS-CoV-2 detection Part 5: Serum IgM and IgG antibodies test procedure by ELISA 2020 - 03 - 02发布2020 - 03 - 03实施江苏省市场监督管理局发布DB32/T 3762.52020目次前言II1范围12规范性引用文件13术语和定义14环境与设施15设备与耗材16试剂与材料17样本采集28样本运输29酶联免疫吸附检测步骤2前言DB32/T 3762新型冠状病毒检测技术规范目前分为以下部分：第1部分：生物样本采集、运输和保存；第2部分：病毒分离与鉴定； 第3部分：核酸荧光PCR检测程序；第4部分：重组酶介导等温扩增程序；第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序；第6部分：血清IgM和IgG抗体胶体金免疫层析检测程序；第7部分：空气样本检测与评估；第8部分：物体表面检测与评估；第9部分：医务人员职业暴露检测与评估。本部分为DB32/T 3762 的第5部分。本部分按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本部分由江苏省卫生健康委员会提出。本部分由江苏省卫生标准化技术委员会归口。本部分主要起草单位：江苏省疾病预防控制中心、南京医科大学、苏州第五人民医院、苏州大学附二院、昆山市疾病预防控制中心。本部分主要起草人：曾晓燕、朱宝立、焦永军、郭喜玲、迟莹、吴斌、程军平、徐佳南、钱志远、罗晓明、沈欢喜。2新型冠状病毒检测技术规范 第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序1 范围本部分规定了新型冠状病毒者血清中IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测的环境与设施、设备与耗材、试剂与材料、血清样本采集、酶联免疫吸附实验操作。本部分适用于新型冠状病毒感染确诊病例、疑似病例以及确诊病例的密切接触者血清学检查。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 Doc9284-AN/905 危险品航空安全运输技术细则 3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件 3.1IgM和IgG抗体 IgM and IgG antibodiesSARS-CoV-2感染人体后，除了对靶器官产生致病过程外，病毒基因组编码的结构蛋白、非结构蛋白还刺激机体免疫系统，产生特异性免疫应答，分泌病原体特异性IgM和IgG抗体至血液循环中。4 环境与设施在BSL-2级实验室内进行实验。5 设备与耗材5.1 设备：生物安全柜、洗板机、酶标仪（含有450nm波长滤光片）、高压锅、生物安全运输箱、水浴锅。5.2 耗材：个人防护装备：N95及以上防护口罩、护目镜、一次性防护面罩、医用无纺布帽、连体防护服、一次性手术衣、乳胶手套、 防水靴套、真空釆血管、无菌螺旋口塑料管。6 试剂与材料新型冠状病毒人IgM抗体ELISA检测试剂盒、新型冠状病毒人IgG抗体ELISA检测试剂盒。7 样本采集用真空负压采血管采集血液样本5mL，室温静置30分钟，1500rpm2000rpm离心10分钟，收集血清于无菌螺口塑料管中。8 样本运输同本标准 第1部分6.1和6.2。9 酶联免疫吸附检测步骤9.1 酶联免疫吸附实验-IgM (间接法)9.1.1 根据样本数量取出一定量的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，每次实验设阴、阳和空白复孔对照；9.1.2 向板中加入100L/管样本稀释液，然后向其中加入1L的待测血清（根据需要添加阳性、阴性参考对照），将酶标板用封板膜封闭，置37孵箱中孵育30分钟；9.1.3 取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤）5次后，甩干孔内残留液或倒扣酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液；9.1.4 于各孔中加入HRP标记的抗人IgM工作液100L/孔，置37孵箱中孵育30分钟；9.1.5 重复8.1.3步骤；9.1.6 将显色液A、B液按1:1混合后取混合显色液每孔加100L，轻拍酶标反应板，混匀后置室温5分钟；9.1.7 于各孔中加入终止液50L/孔，轻拍混匀；9.1.8 将酶标板置于酶标仪450nm波长下，测定各孔光吸收OD值；9.1.9 根据检测试剂设计者的要求判断结果。9.2 酶联免疫吸附实验-IgG (间接法)9.2.1 根据样本数量取出一定量的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，每次实验设阴、阳和空白复孔对照；9.2.2 向板中加入100L/管样本稀释液，然后向其中加入1L的待测血清（根据需要添加阳性、阴性参考对照），亦可把血清在1:100稀释的基础上再进行倍比稀释。将酶标板用封板膜封闭，置37孵箱中孵育30分钟；9.2.3 取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤）5次后，甩干孔内残留液或倒扣酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液；9.2.4 于各孔中加入HRP标记的抗人IgG工作液100L/孔，置37孵箱中孵育30分钟；9.2.5 重复8.2.3步骤； 9.2.6 将显色液A、B液按1:1混合后取