课程设计论文

学院编号 136060802 学 号 0802100115 吉 林 农 业 大 学 发 展 学 院 课 程 设 计 论 文 土壤中淀粉酶生产菌的初筛 学 院 生物食品学院 专 业 食品科学与工程 班 级 1 班 姓 名 张琳 指导教师 尤丽新 2012 年 6 月 8 日 2 中文摘要 摘要摘要 本文研究了从土壤中筛选淀粉酶产生菌 并对产生淀粉酶的发酵条件进 行了探讨 研究淀粉酶产生菌的筛选方法 淀粉在酿造 纺织 食品加工 医药等领域有广泛用途 淀粉酶是一类 淀粉水解酶的统称 它能将淀粉水解成糊精等小分子物质 并进一步水解成麦 芽糖或葡萄糖 淀粉水解后 遇碘不再变蓝色 因此可根据淀粉培养基上透明 圈的大小来判断所选菌株的淀粉活力 关键词关键词 淀粉酶 菌种筛选 土壤 发酵条件 3 英文摘要 Abstract TheThe IsolationIsolation ofof Amylase producingAmylase producing BacterialBacterial StrainsStrains fromfrom SoilSoil andand StudiesStudies onon thethe Amylase producingAmylase producing FermentationFermentation ConditionsConditions The starch in the brewing textiles food processing medicine and other fields have a wide range of applications Amylase is a kind of starch hydrolytic enzymes collectively it can be hydrolyzed into starch dextrin and other small molecules and further hydrolysis into maltose or glucose starch hydrolysis meets the iodine is no longer turns blue it can be in accordance with the starch medium transparent circle to determine the size of the selected stains of enzyme activity Key words Amylase screening soil fermentation condition 4 目 录 前言 5 实验材料 6 样品 6 培养基 6 器材 6 实验方法 6 培养基制备 6 倒平板 6 样品预处理 6 平板涂布分离 7 菌株检测 7 保存菌种 7 结果分析 7 结论 7 5 正文 前言 淀粉酶是指一类能催化分解淀粉分子中糖苷键的酶的总称 主要包括 淀粉酶和 淀粉酶等 淀粉酶广泛存在于动植物和微生物中 淀粉酶对 淀粉的分解作用是工业上利用淀粉的依据 也是生物体利用淀粉进行代谢的初 级反应的依据 淀粉酶是最早用于工业生产并且抉仍是用途最广 产量最大的 酶制剂产品之一 淀粉酶种类繁多 特点各异 可应用于造纸 印染 酿造 果汁和食品加工 医药 洗涤剂 工业副产品及废料的处理 青贮饲料及微生 态制剂等多种领 由于微生物数量多 繁殖快 工业生产主要采用微生物发酵 法大量生产该制剂 关于淀粉酶活力的测定方法有多种 其中最常用的是以下三种 平板 水解圈法 此方法是根据淀粉遇碘呈现蓝色 随着淀粉水解为糊精 蓝色逐 渐消失面成为棕色反应物 硝基水杨酸法反应比色法 淀粉酶活力大小可 用其作用于淀粉生成的还原糖与 3 5 二硝基水杨酸的显色反应来测定 碘 反应比色法 根据淀粉酶作用后淀粉溶液与碘反应时蓝色物消失 通过比色 测定光吸收值 就可衡量该酶活力的大小 土壤是微生物存在的最佳场所 土壤中的微生物种类和数量都是惊人的 从土壤筛选淀粉酶高产菌株是一个有效途径 本次实验是从土壤中筛选可产生高活性淀粉酶细菌为目的 在产生淀粉酶 的微生物中 关于产生淀粉酶的真菌的研究较多 应用也较为广泛 其中生产 上用到最多的是真菌中的根霉和曲霉 由于细菌的研究较少 且细菌的不仅培 养更为容易 而且其代谢活力更强 因此 从土壤中筛选可产生高活力淀粉酶 的细菌菌株 以期获得更经济 易得的高活力淀粉酶 6 一 实验材料 1 样品 淀粉含量丰富的土样 2 培养基 肉汤培养基 牛肉膏 0 3g 蛋白胨 1 0g NaCL0 5g 加水至 100ML PH7 0 121 灭菌 20min 初筛平板培养基 牛肉膏 1 5g 蛋白胨 5g NaCL2 5g 可溶性淀粉 1g 琼脂 9g 加水至 800ml PH7 4 121 灭菌 20min Lugol 碘液 碘 1g 碘化钾 2g 蒸馏水 300ml 先将碘化钾溶解在少量水 中 再将碘溶解于碘化钾溶液中 待碘全溶后 加足水即可 3 器材 高压蒸汽灭菌锅 超净工作台 电子天平 电炉 恒温振荡器 恒温培养 箱 烧杯 量筒 三角瓶 培养皿 移液管 洗耳球 试管 试管架 接种针 涂布棒 二 实验方法 1 培养基制备 配置肉汤培养基 45ml 分装于 250ml 三角瓶中 纱布封口 灭菌 配置 初筛平板培养基 350ml 分装于 500ml 三角瓶中 封口 灭菌 2 倒平板 将融化的初筛平板培养基冷却至 50 60 以无菌操作法倒置已灭菌的培 养皿中 至盖满底部 冷却凝固待用 3 样品预处理 取土样 5g 接入 45ml 培养基中 30 摇床震荡 15min 制成土壤悬液 此时 的稀释度为 10 1 另取 4 支试管 分别记作 10 2 10 3 10 4 10 5 共 5 个梯 度 每支试管内加入 9ml 无菌水 用无菌移液管从三角瓶中吸取 1ml 土壤悬液 加入到 10 2 试管中混匀 再从此试管中吸取 1ml 加入到 10 3 试管中 以此类 7 推直到 10 5 试管 4 平板涂布分离 分别从不同稀释浓度的试管中吸取 0 1ml 悬液 均匀的涂布于初筛培养基 平板上 于 30 培养 24 48 小时 5 菌株检测 待初筛平板长出菌落后 根据菌落不同挑取菌落进行保存并编号 同时 将检测试剂加入到平板上 涂布均匀 菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉 酶的菌株 记住其编号 以便进行下一部实验 6 保存菌种 将得到的菌株转接到斜面培养基上 30 培养 48 72 小时 待菌苔长好 后 在 4 保存 三 结果分析 该菌株发酵产生淀粉酶的最佳氮是酵母膏 而酵母膏比牛肉膏和蛋白胨相 比 除了具有丰富的有机氮外 还具有多种维生素 这都有利于菌体的生长和 酶的产生 通过对菌的