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用心 爱心 专心1 第六章第六章 蛋白质和蛋白质和 DNADNA 技术技术 1 我们通常选用猪 牛 羊等动物的血液进行实验 来提取和分离血清蛋白 请回答下列有关问题 1 实验前取新鲜血液 静置凝固后会析出淡黄色的液体 血清 其中含有的蛋白质有 等 2 血清蛋白提取和分离的活动程序为 在染色和脱色步骤中 所用试剂分别为 3 能利用电泳技术分离血清蛋白的原理是 解析 本题考查提取和分离血清蛋白的相关知识 1 血清中含有两种球蛋白 凝集素等多种蛋白质 2 血清蛋白的提取和分离步骤为 点样 电泳 染色 脱色 制干胶板 其中染色 脱色所用试剂 分别为质量分数为 0 05 的考马斯亮蓝 R250染色液 体积分数为 7 的醋酸溶液 3 血清蛋白为两性电解质 在一定条件下带有电荷 可在电场中移动 故可用电泳技术进行分离 答案 1 两种球蛋白 凝集素 2 点样 电泳 电泳 染色 脱色 制干胶板 质量分数为 0 05 的考马斯亮蓝 R250染色液 体积分数为 7 的醋酸溶液 3 血清蛋白为两性电解质 在一定条件下带 有电荷 可在电场中移动 2 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分 负责血液中 O2和部分 CO2的运输 请根据血红 蛋白的提取和分离流程图回答问题 1 将实验流程补充完整 A 为 B 为 凝胶色谱法的基本原理是 根据 而达到蛋白质分离的有效方法 2 洗涤红细胞的目的是去除 洗涤次数过少 无法除去 离心速度过高和时间过 长会使 一同沉淀 达不到分离的效果 洗涤干净的标志是 用心 爱心 专心2 释放血红蛋白的过程中起作用的是 3 在洗脱过程中加入物质的量浓度为 20 mol L 的磷酸缓冲液 pH 为 7 0 的目的是 如果红色区带 说明色谱柱制作成功 答案 1 血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小 2 杂蛋白 血浆蛋白 血浆 蛋白 白细胞和淋巴细胞 离心后的上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯 3 准确模拟生物体内的生 理环境 保持体外的 pH 和体内的一致 均匀一致的移动 3 下图为细胞内 DNA 复制过程示意图 该过程在体外也可进行 以获得大量相同的 DNA 片段 该项技术 称之为 PCR 技术 又称多聚酶链式反应 请分析回答 1 PCR 过程与细胞内 DNA 复制相比 主要有两点不同 2 PCR 技术过程的三个步骤 3 假设 PCR 过程中 只用一条 DNA 片段作为模板 请计算 30 次循环后 反应物中大约有多少个这样 的 DNA 片段 4 PCR 技术能在几小时内将极微量的 DNA 片段特异性地扩增上百万倍 从而解决了样品中 DNA 含量 低 难以分离的难题 试举两例 说明 PCR 技术的应用 答案 1 PCR 过程的引物是一小段单链 DNA 或 RNA 而细胞内 DNA 复制的引物是 RNA PCR 过程是高 温变性解旋 不需要解旋酶 2 变性 复性 延伸 3 230 4 刑侦案件 亲子鉴定 疑难疾病的 诊断 基因序列分析等 任选两例 4 1970 年 特明和巴尔的摩证实了 RNA 病毒能以 RNA 为模板合成 DNA 并发现了催化此过程的酶 图为 形成 cDNA 的过程和 PCR 扩增过程示意图 请据图回答 用心 爱心 专心3 1 催化 过程的酶是 2 过程也称为 DNA 的变性 此过程在温度高达 90 95 时才能完成 说明 DNA 分子具有 性 3 由图中信息分析可知 催化 过程的酶都是 两者在作用特性上的区别是 4 江苏有一道凉菜 白斩鸡 鸡肉嫩而不韧 味美鲜香 其加工过程中添加了从木瓜中提取的酶 制成的 嫩肉粉 下列有关嫩肉粉的叙述中 正确的是 A 嫩肉粉 可能是通过催化细胞间的纤维素水解而实现 嫩肉 的 B 与高温蒸煮相比 嫩肉粉 是通过降低反应活化能而实现 嫩肉 的 C 嫩肉粉 应在蒸煮鸡肉时加入 才能实现 嫩肉 D 嫩肉粉 是一种化工产品 不利于人体健康 实际应用中能少则少 能无则无 解析 由题图可知 RNA DNA 为逆转录过程 需要逆转录酶 都是 DNA 复制过程 需要 DNA 聚 合酶 PCR 扩增使用的某些酶具有耐高温的特性 答案 1 逆转录酶 2 稳定 3 DNA 聚合酶 催化 过程的酶耐高温 4 B 5 下面是某校某班同学在 生物技术实践 课中进行的实验 请回答 1 在 20 世纪 50 年代 酶已经大规模地应用于各个生产领域 到了 70 年代又发明了固定化酶与固定 化细胞技术 在实际生产中 固定化酶技术的优点是 与固定化酶技术相比 固定化细胞固定的是 在制备固定化酵母细胞的实验中 常用的包埋材料是 2 某一同学运用 PCR 技术 准备对分离得到的大肠杆菌一个 DNA 分子进行体外扩增 他往扩增仪中 加入模板 DNA 四种脱氧核苷酸 此外还应加入 和 DNA 体外扩增过程包括了三个连续的步骤分别是变性 和 3 还有同学将大肠杆菌破碎并提取得到大肠杆菌蛋白质 一同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的 蛋白质进行分离 在电泳过程中 影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的 以及分子的形状等 而另一位同学则利用凝胶过滤法分离蛋白质 下图 他在操作中加样的正确顺序 是 待蛋白质接近色柱底端时 用试管连续收集流出液 先收集到的蛋白质与后收集到的蛋 白质的区别是 用心 爱心 专心4 答案 1 酶既能与反应物接触 又容易与产物分离 固定在载体上的酶能反复利用 多酶系统 一系 列 多种酶 海藻酸钠 2 DNA 聚合酶 引物 复性 延伸 3 带电性质 分子大小 先收集到的蛋白质分子量大 后收集到的分子量小 6 在遗传病及刑侦破案中常需要对样品 DNA 进行分析 PCR 技术能快速扩增 DNA 片段 在几个小时内复 制出上百万份的 DNA 拷贝 有效地解决了因为样品中 DNA 含量太低而难以对样品进行分析研究的问题 据图回答相关问题 1 在相应的横线上写出引物 并在复性这一步骤中将引物 置于合适的位置 2 在相应的横线上写出循环一次后生成的 DNA 分子 3 若将作为原料的四种脱氧核苷酸用 32P 标记 请分析循环一次后生成的 DNA 分子的特点 循环 n 次后生成的 DNA 分子中不含放射性的单链占总单链的比例为 4 PCR 反应过程的前提条件是 PCR 技术利用了 DNA 的 原理解决了这个问题 5 在对样品 DNA 分析过程中发现 DNA 掺杂着一些组蛋白 要去除这些组蛋白可加入的物质是 解析 1 DNA 聚合酶不能从头开始合成 DNA 只能从 3 端延伸 DNA 链 所以引物就提供了 3 端 子链延伸方向为 5 3 引物 与 b 链部分碱基互补 引物 则与 a 链部分碱基互补 且连接到 a 链的 3 端 故引物 的结构为 5 G A OH HO A G 5 复性结果为 3 C C A G 5 2 经过一次循环后 产生的两个 DNA 分子分别含有引物 和引物 3 由于作为原料的四种脱氧核苷酸被 32P 标记 所以新合成的子链均含有放射性 一次循环后的两 个 DNA 分子各有一条链含 32P 若复制 n 次 产生子链共 2n 2 其中只有 DNA 母链不含32P 则其所 占比例为 2 2n 2 1 2n 4 DNA 复制是以两条母链为模板 按照碱基互补配对原则进行的 因此 首先要解旋 使两条母链 用心 爱心 专心5 的碱基暴露出来 才能按照碱基互补配对原则把相应的碱基一个个地连接起来 只有解旋后 再以母 链为模板合成一小段引物 引物才起作用 DNA 分子在 80 100 的温度范围内变性 双链解开成 单链 当温度慢慢降低时 又
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