中药学论文大黄

1 大黄对慢性肾功能不全的影响 摘 要 目的 观察大黄对慢性肾功能不全大鼠肾功能及肾组织 TGF 1 和 smad7 表达的影响 方法 采用腺嘌呤法建立大鼠慢性肾功能不全模型 治疗组予以大黄 4 g kg d 灌胃 治疗 4 周后 检测各组大鼠的 24 小时尿蛋白定量 肾功能 通过组织学及蛋白印记观察 肾组织 TGF 1 和 smad7 的表达 结果 治疗组大鼠的 24h 尿蛋白定量 肾功能明显增加 P 0 01 而治疗组大鼠 24 h 尿蛋白定量 肾功能较非治疗组减少 P 0 05 非治疗组大鼠肾组织 TGF 1 smad7 表达较正常组明显增加 P 0 01 结论 大黄可降低慢性肾功能不全大鼠 24 小时尿蛋白 肾功能水平 抑制肾组织 TGF 1 和 smad7 表达 大黄对慢性肾功能不全的保护机制可能与降低肾脏 TGF 1 和 smad7 表达有关 关键词 大黄 慢性肾功能不全 腺嘌呤 转化生长因子 1 smad 2 大黄的基本信息 1 综述 本品为蓼科植物掌叶大黄 Rheum palmatum L 唐古特大黄 Rheum tanguticum Maxim ex Balf 或药用大黄 Rheum officinale Baill 的干燥根及根茎 秋末茎叶枯萎或次春发 芽前采挖 除去细根 刮去外皮 切瓣或段 绳穿成串干燥或直接干燥 2 性状 本品呈类圆柱形 圆锥形 卵圆形或不规则块状 长 3 17cm 直径 3 10cm 除尽外 皮者表面黄棕色至红棕色 有的可见类白色网状纹理及星点 异型维管束 散在 残留的 外皮棕褐色 多具绳孔及粗皱纹 质坚实 有的中心稍松软 断面淡红棕色或黄棕色 显 颗粒性 根茎髓部宽广 有星点环列或散在 根木部发达 具放射状纹理 成层环明显 无星点 气清香 味苦而微涩 嚼之粘牙 有砂粒感 3 药效作用 3 1 对消化系统的影响 泻下作用 作用表现 一般在服药后 6 10 小时排出稀便 泻下有效成分 认为主要 是番泻甙类 泻下作用机理 番泻甙在肠道细菌酶的作用下分解产生大黄酸蒽酮 大黄酸 蒽酮可刺激大肠粘膜 使肠蠕动增加而泻下 另外还可抑制肠细胞膜上 Na K ATP 酶 阻碍 Na 转运 使肠内渗透压升高 保留大量水分 促进肠蠕动而泻下 利胆 保肝 促 进胰液分泌 抑制胰酶活性 抗胃及十二指肠溃疡 3 2 对血液系统的影响 止血作用 特点 作用确切 见效快 止血有效成分 儿茶素 没食子酸 止血 作用机理 促进血小板的粘附和聚集功能 增加血小板数和纤维蛋白原含大黄量 降低抗 凝血酶 活性 使受伤局部的血管收缩 降血脂 降低总胆固醇 甘油三酯 低密度脂蛋 白 极低密度脂蛋白及过氧化脂质 3 3 抗感染作用 抗病原微生物作用 抗菌谱 敏感的细菌有葡萄球菌 溶血性链球菌 淋病球菌 白 喉杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌等 敏感的病毒有流感病毒 孤儿病毒 乙肝病毒 脊髓灰 质炎病毒等 其他敏感微生物有阿米巴原虫 阴道滴虫 血吸虫及钩端螺旋体等 抗菌有 效成分 大黄酸 大黄素 芦荟大黄素 抗菌作用机理 影响叶酸的酶系统 抑制细菌 核酸和蛋白质合成 抑制细菌生物氧化酶系统 诱生干扰素 抗炎 解热作用 免疫调节 蒽醌衍生物可抑制非特异性免疫功能 抗衰老抗氧化作用 国内外越来越多学者证明 大 黄所含鞣质有很好的抗氧化作用 4 用药禁忌 4 1 禁忌 凡表证未罢 血虚气弱 脾胃虚寒 无实热 积滞 瘀结 以及胎前 产后 均应慎 服 如用本品泻下通便 煎服时应后下 或用沸开水泡汁 否则药效会减弱 服用大黄后 3 其色素会从小便或汗腺中排泄 故小便 汗液可以出现黄色 此外 大黄哺乳妇女服用后 婴儿吮食乳汁 可能引起腹泻 因此授乳妇女不宜服用 由于本品又能活血行瘀 故妇女 胎前产后及月经期间也必须慎用 4 2 不良反应 大黄除可引起胃肠道反应外 曾有报道 2 例老年患者因长期服用 2 年 大黄苏打片 每日 15 21 片 引起严重的缺铁性贫血 血红蛋白下降到 5 5 6g 当减少用药量并补充 铁等维生素 C 后恢复正常 通过炭末在肠道内转运时间和排泄时间研究以及肠道内水分测 定等证明 大黄作用部位在大肠 是一种大肠性致泻剂 而铁主要在大肠中吸收 认为导 缺致铁的原因可能为 大黄导泻作用干扰了铁的吸收 大黄鞣酸可能与 Fe 结合成不溶性 复合物 妨碍了吸收 苏打中和了胃酸 干扰了铁与维生素 C 螯合 妨碍了铁的吸收 还 有报道 1 例哮喘病人服大黄苏打 4 片后 出现皮肤痒疹 红斑 哮喘加重 经斑贴试验证 实为大黄致敏 检测 1 材料 湖北产中药材大黄 腺嘌呤 兔抗 TGF 1 Smad7 抗体 En Vision 免疫组化试剂 盒 BCA 试剂盒 2 动物分组和模型建立 雄性 SD 大鼠 60 只 7 周龄 体重 190 20 g 适应性饲养 1 周 随机分为正常组 20 只和腺嘌呤组 40 只 腺嘌呤组每日腺嘌呤 300 mg kg 灌胃 6 周后以代谢笼留取 24 小时尿液 眶内静脉采血 测定 24 小时尿蛋白定量 血尿素氮 血肌酐 检测发现全部 造模成功 随机分为 2 组 非治疗组 20 只 治疗组 20 只 治疗组大鼠每日给予黄葵胶 囊 2 g kg d 灌胃 同时正常组和非治疗组给予等量生理盐水灌胃 4 周后全部大鼠以 代谢笼留取 24 小时尿液 眶内静脉采血 测定 24 小时尿蛋白定量 血尿素氮及肌酐 大鼠处死后取部分肾组织置于 10 中性甲醛中固定 部分肾组织液氮保存用于蛋白印迹 杂交方法 Western blot 检测蛋白表达 实验期间大鼠自由饮水 进食 3 尿蛋白定量及肾功能测定 肾组织经 10 中性甲醛固定 梯度乙醇脱水 二甲苯透明 浸腊 包埋 切片 厚 3 m 行 HE 染色 观察肾小球硬化及肾间质纤维化的程度 4 蛋白印记分析 各组取约 100 mg 肾组织置于 1 ml 裂解缓冲液 含蛋白酶抑制剂 PMSF 100ug ul aprotinin 1 ug ml leupeptin 1 ug ml 匀浆后冰浴 30 分钟 然后 4 度 12000 g 离心 20 分钟 提取蛋白后用 BCA 法测量蛋白浓度 取等量蛋白质进行 SDS 聚丙 烯酰胺凝胶电泳 半干法转移至聚氟乙烯膜上 封闭液封闭 加入 1 200 稀释的 TGF 1 抗体 4 过夜 0 05 TBST 洗膜 3 次 ECL 显影 5 统计学处理 计量资料采用均数 标准差表示 数据用 SPSS 13 0 软件包进行统计学处理 各组间 4 均数比较采用单因素方差分析 P 0 05 认为有统计学意义 方差齐时用 LSD 法 方差不 齐时用 Tamhane 法 6 检测结果 非治疗组和治疗组大鼠尿蛋白排泄明显高于正常组 P 0 01 治疗组大鼠尿蛋白定 量与非治疗组比较有所降低 P 0 05 非治疗组和治疗组大鼠血肌酐明显高于正常组 P 0 01 治疗组大鼠血肌酐与非治疗组比较有所降低 P 0 05 尿素氮变化同血肌酐变 化 见表 1 表 1 各组大鼠尿蛋白定量 血尿素氮 肌酐水平 组别n 尿蛋白定量 mg d 尿素氮 mmol L 肌酐 mol L 正常组209 24 2 167 26 1 0348 26 9 36 治疗组20169 3 27 69 18 5 3 89 119 15 86 非治疗组2089 1 17 34 14 1 5 34 80 6 12 25 与正常组相比 P 0 01 与非治疗组相比 P 0 05 在 HE 染色中 非治疗组大鼠可见明显的肾小球增生 系膜增殖 肾小球毛细血管部 分塌陷 球囊粘连 部分肾小球完全硬化 间质有炎细胞浸润 部分肾小管已萎缩 系膜 外基质显著增加 治疗组与非治疗组比较 肾小球损伤 硬化轻 肾间质炎细胞浸润少 间质纤维化 慢性肾功能不全是所有肾脏疾病进展的共同结局 其实质是肾脏纤维化 严重威胁人 类健康 目前研究表明 TGF 1 和其受体下游的信号转导因子 Smad7 蛋白在促进肾小球 纤维化及肾小管间质纤维化方面起重要作用 TGF 1 是迄今已知作用最强的一种促肾纤维化的细胞因子 具有调节细胞的增殖 分泌 迁移和凋亡等多种生物学活性 TGF 1 在肾纤维化中的作用涉及到细胞外基 ECM 细胞增殖及转分化 炎症浸润等各个环节 是介导肾小球硬化和肾间质纤维化关键细胞因 子 在肾纤维化过程中 TGF 1 起着关键作 目前认为 Smad7 主要通过与 TGF 1 型受体结合抑制 TGF 1 信号转导 以往在许 多肾脏疾病如肾小球肾炎 肾病综合征 狼疮性肾炎 糖尿病肾病等的动物模型和人的肾 活检标本的研究中 都提示 TGF 1 Smad7 信号通路被激活 用抗 TGF 1 的抗体或 Smad7 转基因治疗时 慢性肾脏病的肾脏纤维化得到改善 提示 Smad7 信号通路在肾脏纤 维化的发生发展中起着重要作用 3 现代实验表明大黄能抑制 TGF 1 的过度表达 减缓肾功能恶化速度 而被被广泛 用于治疗慢性肾小球肾炎和慢性肾衰竭 4 慢性肾功能不全的实质是肾脏纤维化 而 TGF 1 是促肾纤维化最重要的细胞因子 smad7 蛋白是 TGF 1 受体的胞内激酶底物 在调节 TGF 1 促肾纤维化过程中起重要作用 本实验结果显示大黄可能通过减少腺嘌呤 致慢性肾功能不全大鼠的 TGF 1 及增加 smad7 蛋白表达 来减缓甚至抑制肾小球及肾间 质纤维化 降低大鼠 24 小时尿蛋白定量 血尿素氮及血肌酐 减轻慢性肾功能不全大鼠 5 肾病组织的病理改变 延缓慢性肾功不全进入终末期肾衰竭的时间 参考文献 1 Wang W Koka V Lan HY Et al Transforming growth factor beta and Smad signalling in kidney diseases J Nephmlogy Carlton 2005 10 1 48 56 2 Keith H Jeremiah M OP l prevents renal fibrogenesis associated with ureteral obstruction J Am J Phy Ren Phy 2000 280 3 130 136 3 Hirotaka Fukasawa Tatsuo Yamamoto Treatment with