生物专业毕业范文实例

生物专业毕业范文实例生物专业毕业范文实例 学院毕业论文题目 标题一般以不超过20个汉字 姓名专业年级 学号指导教师 学院教务处制年月日目录 一 中文摘要 关键词 二 英文摘要 关键词 三 论文正文前言1 材料与方法2 结果3 讨论4 结论5 致谢6 参考 文献以下为一毕业论文的范文 供同学们书写时候进行格式参考 范文实例中文摘要I HLA1分子在胃癌中的表达机制摘要目的肿瘤细胞表达HLA human leukocyteantigen 分子是激发肿瘤抗原特异性CTL cytotoxic Tlymphocytes 进行肿瘤免疫治疗的关键 其中肿瘤细胞中HLA I类分子表达异常是肿瘤逃逸机体免疫监视的重要机制之一 本研究探讨胃癌组织中HLA I类抗原及相关分子的表达情况 检测HLA基因区域微卫星DNA的杂合 性丢失 loss ofheterozygosity LOH 并分析它们的相关性 为研究胃癌中HLA I类分子的异常表达机制提供理论依据 方法首先应用4种HLA相关分子单抗 采用免疫组化的方法 ABC法 检测胃癌石蜡组织标本中HLA I类及相关分子的表达情况 统计分析各分子表达与临床分期及病理 分级的相关性 同时应用5种HLA I类分子相关抗体 采用冰冻切片免疫组化的方法 检测新鲜胃癌组 织中HLA I类分子的表达情况 并应用微卫星多态性分析技术检测胃癌组织中 6p HLA及15q 2m 2 microglobulin 基因区域的LOH 结果在组织学水平 185例胃癌石蜡切片中HLA I类分子表达异常 HLA I类分子B C位点下调率41 丢失率22 A位点下调率32 丢失率1 9 其中B C位点的表达与肿瘤分期相关 且随着胃癌分化程度的降低逐 渐下调 20例淋巴结转移灶中 有8例 40 HLA I类分子表达低于原发癌 与癌旁组织比较 50例新鲜胃癌组织冰冻切片中HLA I类分子表达下调显著 P 0 05 其中重链各分子与HLA I类分子表达下调密切相关 尤以HLA B C位点显著 P 0 05rs 0 8236 应用微卫星多态性分析技术发 现 胃癌组织HLA基因区域发生LOH的频率为18 3 2m基因发生LO H的频率为14 5 HLA区域内各位点LOH的频率分别为D6S1618 16 D6S291 12 D6S2 73 15 D6S265 15 D6S105 34 D6S276 16 所研究病例未见有6号染色体完全丢失现象的存在 与 2m基因紧密相邻的两个微卫星位点 其LOH频率分别为D15S 126 18 D15S 209 11 其中与HLA I类分子重链基因紧密相邻的D6s 105位点LOH频率最高 34 2 结论在胃癌组织中 存在着明显的HLA I类分子表达下调或缺失 且重链各分子与HLA I类分子表达下调密切相关 P 0 05 淋巴结转移病例HLA I类分子表达下调或丢失高于原发癌 通过HLA I类各分子的表达与相应位点LOH的对比分析 大部分HLA I类各分子与癌旁组织相比表达一致或增强者未发生LOH 表达下调 或阴性者则发生了LOH 特别是与HLA重链基因区域紧密相邻的微卫 星位点发生LOH的频率最高 说明HLA重中文摘要II链基因区域微卫 星DNA的LOH可能影响了HLA重链各分子的表达 并进一步影响了HLA I类分子在细胞表面的完整性表达 本研究显示HLA重链基因区域的LOH是影响胃癌组织HLA I类分子异常表达的重要机制之一 关键词胃癌 HLA I类抗原 免疫组化 杂合性丢失英文摘要III Themechanism of HLA class I moleculesexpressed abnormallyin gastric cancer ABSTRACTObjective Pathogenesisof tumorsand anti tumor immuneresponse inhost hasattracted alot ofattention HLA class I moleculesplay acritical rolein theantigen processing presenting andspecial recognitionof tumor cells bycytotoxic Tlymphocytes CTL There isa generalconsensus thatthe abnormal expression of HLA class I moleculesreflects theescape mechanism of tumor cells andit ispivotal toexcite tumorantigen special CTLto carrythrough immuherapy for the expressionof HLA class I molecules intumorcellssurface We discussedthe expressionof HLA class I molecules in gastric cancer tissues anddetected theLOH of microsatellite DNA at HLA gene region which provideda theorybasis forstudying theabnormalexpressionmechanismof HLA class Imoleculesin gastric cancer Methods185formalin fixed paraffin embeded tumortissues 22corresponding autologousnormal specimensand20lymphnode metastatiases were tested using4monoclonal antibodies mAbs by meaningsof immunohistochemicaltechnique ABC method 50OCT embeded freshgastric cancer and corresponding normal tissues which weremade intofreezing slice weretestedapplying5monoclonal antibodies mAbs by thesame method and analyzedof theLOH frequencyat HLA 6p and 2m 15q gene regionby microsatellitepolymorphic analysistechnology Results HLA class I antigens wereobviously downregulated A locus41 B C locus32 and lost A locus22 B C locus19 in185formalin fixed paraffin embeded gastric cancertissues and thedownregulated expressionof B C locusis significantlyassociated withpathological grade p 0 05 In20lymphnode metastatiases 8cases showdownregulated expressionof HLA class I antigens pared with the primary tumor HLAclass Iantigenswere alsoobviously downregulatedin50OCT embeded freshgastriancerparedwithcorrespondingnormaltissues P 0 05 The downregulatedexpression is correlated with heavy chain molecules especiallyHLA B C locus It wasaordant tothe resultsof the英文摘要IV paraffin embeded tissues The LOH frequency of HLA generegion is18 3 in gastriancerandthe highestis D6s105 34 2 The individualLOHfrequencyforthesix intra MHC markerswas D6S1618 16 D6S291 12 D6S273 15 D6S265 15 D6S 105 34 D6S276 16 It wasnot seenabout loss of thewhole chromosome6in thestudied samples The LOHfrequency of 2m geneis14 5 D15S 126and D15S 209 next to 2m was18 and11 respectively Conclusion expressionofHLAclassIantigens isobviously downregulatedingastriancer and whichis moreobvious inlymphnode metastatiases thantheprimarytumor The downregulationiscorrelatedwithheavychainmolecules P75 75 25 25 分别为阳性 弱阳性 和阴性 染色强度分为强 弱和无 两种计分结果相加综合打分为 相邻正常结构 如淋巴和内皮细胞 可作为内对照来评价细胞的染 色强度 无关抗体MK2 23作阴性对照 坏死的胃癌细胞不计数 10注本实验结果判定方法是按照第12届国际组织相容性大会上确定 的统一标准 47 冰冻切片染色结果分别由两人按以下标准判断 以组织中淋巴细胞 作为阳性参照对象 再根据肿瘤细胞是否被染色 分为阴性和阳性 阳性分成 三个等级 染色强度为淡黄色 棕黄色 深 棕色 分别记分为0 1 2 3 部分肿瘤组织染色不均一 根据肿瘤组织阳性面积计算 阳性面积 25 按阴性计算 阳性面积 75 按阳性计算 在两者之间 根 据其染色强度减0 5 该标准参照Lopez nevot的方法 48 1 2 5统计学分析根据以上标准 结合临床病理资料进行分期 分级 TNM分级根据1987年制定的标准 统计每组各抗原的表达水平 用SAS6 12软件对资料用列联表卡方检验进行统计分析 2结果 根据实验的结果 分为几个部分分别书写 图文并茂 加入 适当的表格 图 表的说明要规范 2 1石蜡组织切片表达情况染色结果显示胃 癌及癌旁组织细胞染色较均一 间质 内皮细胞 淋巴细胞 均表 达阳性 HC10和HCA2染色以膜为主 2m表达为膜浆型 以膜为主 而LMP2 则表达在胞浆中 图1 6 在22例癌旁胃粘膜组织中 大部分HLA I 2m和LMP2表达为阳性 只有4例 18 HLA I类分子表达阴性 与癌旁组织相比 HLA I类分子有明显的表达下调或缺失 B C位点最显著 见表1 2m和LMP2有表达下调或缺失 但与I类分子的下调或丢失无统计学 意义 表1HLA I类抗原及相关分子在胃癌中的表达情况HLA B C HLA A 2m LMP2 37 49 55 73 41 32 32 22 22 19 13 5 表达正常 表达下调 表达缺失 表格使用三线表 在表的上方标注表序和 表题 标题及表格内容用宋体五号 标题字体加粗 整个居中 2 2冰冻组 织切片表达情况1150例新鲜胃癌组织切片中淋巴细胞都表达HLA I类各分子 成为本实验良好的内参照 HLA各分子均表达在细胞浆或细胞膜表面 呈黄色或淡黄色 如图8 15 其表达情况同石蜡组织切片基本一致 胃癌组织中HLA I类各分子的表达与癌旁组织相比表达下调显著 图7 且HLA I类重链各分子及I类分子复合物表达下调有显著性差异 P0 05 表2胃癌及癌旁组织中HLA I类各分子的表达情况应用偏相关分析 HLA重链各分子与HLA I类分子表达下调显著相关 尤以HLA B C位点显著 P0 05 表3胃癌中HLA I类各分子与HLA I类分子复合物之间的关系HLA A HLA B C HLA A B C 2m W6 321 09 0 831 27 0 961 36 0 811 11 0 901 24 0 92P 0 0001P 0 0001P 0 0001P 0 0961 rs 0 6943rs 0 8236rs 0 6775rs 0 3207 插图依文中出现的先后排序 如图1 图2 有图题及图说明 图1 癌旁胃粘膜HLA B C抗原阳性染色图2胃癌HLA A抗原阳性染色膜型ABC法400 膜型ABC法400 其它图从略 HLA A HLA B C HLA A B C 2m W6 32癌旁组织1 61 0 491 70 0 521 67 0 531 36 0 611 85 0 56胃癌组织1 10 0 831 30 0 971 36 0 811 11 0 901 24 0 92P0 00080 01520 05460 22630 0001123讨论 围绕几个要点进行 参考论据要围绕你要说明的论点展开论述 切忌无病呻吟 不切合 主题 同时讨论要深入 不要肤浅而显得太简单 从八十年代后期开始 Ferrone A Lopez Nenot MA Teh M等陆续报导了胃癌中HLA分子的表达情况及其与病理学分型 临床 预后的关系 但同其它肿瘤一样 由于各实验室所用的方法和试剂的不同 结论 不尽一致 也不利于互相比较和归纳总结 为此 第十二届国际组织相容性抗原会议 IHWG 成立了 HLA表达与 肿瘤 工作组 组织有关实验室利用一套标准的试剂和方法以研究 各型肿瘤的HLA抗原的改变频率 并通过肿瘤的组织病理学特征 病程和HLA抗原表达水平的关系来评 价各型肿瘤原发灶和转移灶中HLA抗原改变的临床意义 目前 国际上关于HLA分子在不同肿瘤中低表达或失表达的文献较多 主要的结论有以下几点 1 HLA I类分子在许多肿瘤中有低表达或失表达的现象 主要形式有5种 3 I类分子全部失表达或低表达可能与 2m蛋白合 成 抗原肽转运蛋白 MHC基因结构缺陷有关 这类表型的细胞系有 淋巴细胞系Daudi 黑色素瘤FO 1 结肠癌COVO I类分子单倍型失表达很少见 可能与染色体不分离和有丝分裂重 组有关 A B C TAP LMP等位点选择性失表达黑色素瘤HLA B7下调与原癌基因c myc的转录增加有关 可干扰HLA B在启动子水平的转录 这种类型能被细胞因子治疗所逆转 I类分子某些特定等位基因选择性失表达可能由于点突变 HLA基 因部分缺失或基因断裂重组的结果 不能被细胞因子治疗所逆转 复合表型不能归纳为以上4种情况者 例如在转移的黑色素瘤上仅发现有HLA A24表达 10 另外还发现了HLA B下调和HLA A缺失造成的新表型 33 2 HLA I类分子全部失表达以及特定位点选择性失表达的频率在不同种肿瘤 中有差异 16 50 在子宫颈癌 前列腺癌和黑色素瘤中失表达的频率高于头颈 部癌 乳房癌 肺癌和结肠癌 3 HLA I类分子低表达的发生机制在不同肿瘤和个体中不同 主要涉及两方 面 1 基因突变或大片段缺失及表达调控异常 2 抗原加工异常TAP失表达会导致A B C在胞内不能与抗原肽结 合 从而不能表达于细胞膜上 LMP失表达对A B C的表达水平无 明显影响 但可改变它们提呈的多肽谱 18 4 HLA I类分子和TAP的低表达常常预示着肿瘤的临床进程加快和预后不良 如在多种肿瘤中 I类分子和TAP在转移癌组织中低表达频率明显高 于原位癌组织 在黑色素13瘤组织中 已证实它们的低表达与预后 不良的判断指标 如原位癌组织的厚度 疾病的进展阶段 无症状 的间歇期长短和存活率等 相关 5 在黑色素瘤的研究中表明HLA I类分子的低表达在体外培养中能导致肿瘤细胞对T细胞和NK细胞的 敏感性丧失或降低 在体内 低表达能明显影响病人进行T细胞免疫 治疗的效果 如在几个黑色素瘤病人中 HLA表达正常的原位癌阶段 T细胞免疫 治疗的效果相当满意 当转移复发后 T细胞疗法则收效甚微 因此国际HLA工作组建议在选择病人进行T细胞免疫治疗时 应常规 检测癌组织中HLA I类分子的表达情况 把HLA低表达程度和功能的完整性作为是否治 疗的标准 本实验室利用IHWG提供的标准方法和试剂对江苏省185例胃癌石蜡标 本和50例新鲜胃癌组织标本进行免疫组化染色 探讨HLA抗原及相关 分子在胃癌组织中的表达及意义 其中胃癌石蜡标本部分数据已在 第十三届国际组织相容性抗原会议上报导 49 结果显示 石蜡与冰冻组织切片的免疫组化染色结果基本一致 本研究用存档的石蜡组织进行免疫组化分析 方法简便 结果满意 使 研究者能够获得丰富的材料进行回顾性研究 不受标本的限制 值得 推广和应用 我们还对50例胃癌及相应癌旁组织的冰冻切片进行了免疫组化分析 已知HLA I类分子复合物是三聚体分子 细胞表面HLA I类分子复合物结构的完整性 是判断其是否具有功能的关键因素之 一 能够准确 充分体现HLA I类分子复合物表达情况的单克隆抗体是W6 32 该抗体仅适用于冰 冻组织切片 且新鲜组织的冰冻切片相对于石蜡组织切片 无须抗 原修复等相应特殊步骤的处理 对组织抗原的破坏性小 其结果更 加真实 可靠 此外 其他抗体均是位点特异性的单克隆抗体 不能真实地反映HLA I类分子结构和功能的完整性 更为重要的是 同例胃癌组织冰冻切片免疫组化与HLA基因区域LOH 的综合分析 对阐明胃癌组织HLA I类及相关分子异常表达机制提供了良好的实验依据 关于正常胃粘膜上皮HLA分子的表达存在争议 本实验胃癌石蜡组织与冰冻切片中 大部分癌旁胃粘膜上皮HLA I类抗原表达阳性 着色均一 这与Klein B 50 张宏博 51 等的结论一致 但Lopez Nenot MA 48 等认为其表达弱且不均一 结果的差异可能与各实验室所选用的方法 试剂和判定标准不同有 关 此外 由于HLA的表达存在个体的差异性 某些个别病例并不能反应 正常胃粘膜HLA分子表达的整体情况 因此 我们的研究结果表明正常胃粘膜HLA I类及相关分子的表达是稳定 均一的 胃癌细胞HLA I类及相关分子表达有明显的下调或缺失 细胞表面的HLA I类分子是14由重链 轻链和抗原肽共同组成的三元复合体 重链 轻链基因突变或I类分子依赖的抗原加工递呈分子缺陷均可导致I类 抗原表达下调或缺失 本实验显示 胃癌中HLA重链各分子和HLA I类分子复合物表达下调显著 而且重链各分子与HLA I类分子复合物表达下调密切相关 尤以HLA B C抗原显著 P 0 05 轻链和一种抗原加工分子LMP2的改变较少 且与I类抗原的下调和丢 失无统计学意义 这些数据表明HLA重链各分子可能是影响胃癌中HLA I类分子异常表达的重要因素之一 胃癌细胞HLA I类抗原表达与病理学类型有关 随着腺癌分化程度的增高 HLA I类分子表达下调和缺失率减低 185例胃癌石蜡组织中 HLA B C位点的表达下调与病理学分期相关 低分化腺癌的下调率显著高 于高分化腺癌 P0 05 可能与我们的样本例数较少 所用的抗体 组织材料的差异有关 基于目前的实验资料 只能就HLA分子表达与病理分级 临床分期的 关系做一趋势性分析 如有可能应扩大样本量作进一步研究 此外 在20例原发胃癌转移灶中 40 病例HLA I类分子的表达均弱于原发癌 在头颈部恶性肿瘤 乳腺癌 肺癌等肿瘤中也存在这样的现象 52 说明在机体的免疫选择作用下 HLA分子表达下调或丢失的肿瘤更 容易逃避免疫攻击 发生远处转移 本研究中 我们对石蜡和冰冻组织切片的免疫组织化学染色结果采 用了不同的判断标准进行统计学分析 因为我们所收集的185例胃癌 石蜡标本 仅有20例相应的癌旁组织 按照第12届国际组织相容性 大会上确定的统一判定标准 了解胃癌组织HLA及相关分子的表达情 况 无须相应的癌旁组织 其结果同样是安全可靠的 但是 为了与同例胃癌组织LOH的结果相对应 我们对50例胃癌及相 应癌旁组织的冰冻切片采用了Lopez nevot改良的方法作为判断标准 它不仅使我们可以了解肿瘤组织HL A及其相关分子的表达情况 同时对于了解正常胃粘膜上皮HLA及其 相关分子的表达有一定的帮助 更为重要的是 依据Lopez nevot改良的方法 对HLA I类分子在胃癌及相应癌旁组织中的表达强度和表达面积进行综合对 比分析 更能充分体现其表达的差异性 并且成为同例胃癌组织HLA 及 2m基因区域等位基因LOH强有力的支持依据 免疫组化技术 53 是近十年发展很快的原位杂交检测蛋白表达水平 的技术 随着单抗的大量涌现 其应用领域从新鲜组织的冰冻切片扩展到病 理存档的石蜡切片 并以其快捷性 15方便性 应用范围广而成为 临床科研领域广泛应用的技术 免疫组化结果的判断带有一定的主观性 不同的判断标准会带来一 定程度上的偏差 本实验室作为 HLA表达与肿瘤 国际参考实验室 采用的是第十二 届国际主要组织相容性会议所制定的标准 54 免疫组化技术中存在的另一个问题是假阳性 假阴性的问题 为解决这一问题 在每次实验中都设置了阴性对照 阳性对照及空 白对照 同时考虑到抗原修复的方法及强度是影响整个免疫组化结 果的关键步骤 在进行正式实验前 进行大量的预实验 针对每种单抗摸索出包括 抗原修复在内的一套标准Protocol 保证正式实验结果的可靠性 准确性及可重复性 免疫组化的结果提示 HLA I类分子的表达可能与癌细胞的分化有关 通过肿瘤细胞分化程度影响HLA I类分子的表达 从而亦影响了肿瘤抗原的递呈 使肿瘤细胞逃避宿 主免疫监视 最终导致癌肿的发生和转移 近年来体外诱导特异性的T淋巴细胞回输给肿瘤患者是肿瘤免疫治疗 领域的一个热点 55 但本实验室的研究及其他报导均证实胃癌中有明显的HLA I类分子表达下调或缺失 是一类免疫原性较弱的肿瘤 对T细胞依 赖性的免疫治疗效果差 因此 在对这类病人的免疫治疗前 通过免疫组化等方法选择HLA分 子表达阳性 对T细胞依赖性免疫治疗敏感的病例是非常必要的 其次 对于胃癌中大量存在的HLA分子表达下调或丢失的机制进行研 究 在分子水平寻找提高其表达的方法 对于HLA分子缺陷肿瘤患者 的治疗也是必需的 结论164结论 准确 明了 胃癌是我国发病率最高的肿瘤之一 本研究应用HLA及其相关分子单抗 采用免疫组织化学方法 ABC法 研究胃癌组织中HLA分子的表达情况 分析各分子表达与临床分期 及病理分极的相关性 并应用微卫星多态性分析技术进一步探讨其 异常表达机制 得到以下结论1 癌旁胃粘膜HLA I类抗原及相关分子表达阳性 胃癌组织HLA A HLA B C HLA ABC 和W6 32分子表达下调显著 P 0 05 2m和LMP2表达也呈 下调趋势 但未见有统计学差异 其中HLA A和HLA B C分子与HLA I类分子复合物表达下调密切相关 尤以HLA B C抗原显著 2 HLA A HLA ABC 和W6 32 2m和LMP2分子在肿瘤的不同分级 分期无显著性差异 而HLA B C的表达与肿瘤的分级有显著相关性 随着腺癌分化程度的减低 HLA I类分子表达下调和缺失有逐渐增高的趋势 3 胃癌组织HLA I类分子表达与淋巴结转移有关 40 的淋巴结转移灶HLA I类分子表达低于原发癌 4 胃癌组织HLA基因区域LOH的频率为18 3 2m基因发生LOH的频 率为14 5 本研究提示HLA重链基因区域的LOH可能是影响HLA I类分子异常表达的重要机制之一 致谢17致谢首先感谢江苏省自然科学基金委员会对本课题给予的资 金项目资助 课题名称胃癌HLA I类分子表达下调机制的研究 资助项目号BK 项目负责人教授 起止日期xx xx 三年的研究生生活 我有幸得到了 授的悉心指导和无微不至的关 怀 在我的三年学习和科研道路上 导师倾注了大量的心血 导师严谨求实的治学态度 兢兢业业的工作作风和始终对生活乐观 开朗 不计较个人荣辱得失的高尚情操 一直深深地感染和鼓舞着 我 使我学会克服学习 科研和生活中遇到的