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文档简介

实验项目蛋白质变性与沉淀 一 实验目的 1 掌握蛋白质变性与沉淀的原理及各种沉淀方法 2 熟悉刻度吸量管的正确使用 3 了解蛋白质变性与沉淀两者的关系 二 实验原理 一 蛋白质沉淀原理蛋白质溶于水形成稳定的胶体溶液 维持蛋白质胶体溶液稳定因素 1 蛋白质颗粒表面的水化膜 2 蛋白质颗粒表面的电荷 去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出 蛋白质沉淀析出常用的方法有等电点法 盐析法 重金属离子沉淀法 有机酸试剂沉淀法 有机溶剂沉淀法等 二 蛋白质变性原理 蛋白质受某些物理或化学因素的影响 空间结构发生改变 生物活性丧失 称为蛋白质变性 蛋白质变性 分可逆 不可逆 三 实验仪器与试剂 1 仪器试管 刻度吸量管 洗耳球等 2 试剂5 蛋白质溶液 2 5 蛋白质溶液 10 ZnSO4溶液 o 1mol LNaOH 1 三氯醋酸 无水乙醇 NaCl 固体 四 实验内容及操作步骤 1 重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质 2 乙醇沉淀蛋白质 一 实验内容 二 操作步骤 1 重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质 1 实验原理 pH pI pH pI pI 两性离子 负电荷 正电荷 盐 盐 2 操作步骤 3 观察 记录实验现象 并解释之 结构记录 实验现象分析 试管1中加入碱 其pH pI 蛋白质分子带负电荷 与Zn2 结合生成不溶于水的盐沉淀 试管2中加入酸 其pH pI 蛋白质分子带正电荷 与三氯醋酸根结合生成不溶于水的盐沉淀 试管3中只加有蛋白液和ZnSO4蛋白质分子因带较少的正 负电荷 与Zn2 不反应 2 乙醇沉淀蛋白质 1 实验原理乙醇溶解于水 破坏蛋白质分子的水化膜 加入少量中性盐抑制蛋白质的解离 使电荷减少 沉淀更完全 2 操作步骤 3 观察 记录实验现象 并解释之 结果记录 实验现象分析 试管1中加入无水乙醇 破坏蛋白质分子表面的水化膜 使蛋白质沉淀 试管2中加入无水乙醇和少量的氯化钠 不但破坏蛋白质分子表面的水化膜 同时蛋白质分子表面的电荷减少 沉淀更充分 五 注意事项1 试剂瓶滴管不能交叉使用 否则污染试剂 2 刻度吸量管不能交叉使用 否则污染试剂 影响反应现象 3 做完实验把把试剂按原样摆放 试管和刻度吸量管冲洗干净 桌面擦干净 登记签名 4 值日生听老师安排 认真打扫 经老师批准才能离开实验室 六 思考题1 临床抢救重金属中毒患者 为什么用鸡蛋清或牛奶 2 蛋白液中加入适量乙醇 为什么会产生沉淀 3 蛋白液在碱性条件下加入ZnSO4 为什么会产生沉淀 4 蛋白液中加入三氯醋酸 为什么会产生沉淀 下次实验 P74页激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验报告明天交 请组长负起责任 谢谢同学们配合 下次实验 P70页酶的特异性实验报告可以下课交 最晚明天
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