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实验二核糖核酸酶活力测定 一 实验目的 核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶 DNase 和核糖核酸酶 RNase 是水解DNA和RNA磷酸二酯键的核酸内切酶 与植物的生长 分化 衰老 种子成熟和萌发等生理生化过程密切相关 通过测定这两个酶的活性 可间接获得植物体内核酸含量极代谢情况 推测其所处的生长发育状态和阶段 以植物叶片试验材料 提取粗酶液 进行酶促反应 以反应混合物中0 1ml酶液在30min内催化形成具有O D值为1的硝酸镧可溶性RNA或DNA碎片的酶量为1个酶活性单位 二 实验原理 三 操作做步骤 1 酶液的提取称取0 4g海桐叶片剪碎用3ml0 01M的HAc 醋酸缓冲液pH4 8 分三次加入 1 1 1 研磨提取 在5000rpm下离心10min 取上清液 2 核酸酶活力测定取0 1ml酶液放入离心管中 0 05ml30mM巯基乙醇 1ml酵母RNA 或1ml酵母DNA 0 35mlHAc pH4 8 混合均匀 在37水浴保温30min 3 加硝酸镧 HCl到时间后 将离心管放入冰浴中放置3 4min 加入1 5ml冷的硝酸镧 HCl溶液 强烈震荡混合液 至于冷冻离心机中离心15min 5000rpm min 测定上清液的体积 4 光密度测定取上清液0 3ml 2 7ml蒸馏水定容至3ml 在260nm下 紫外
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