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血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 内蒙古农业大学生物化学与分子生物学实验教学中心 制作人 王瑞刚 实验原理实验材料与仪器实验试剂实验步骤 实验原理 醋酸纤维薄膜电泳 CAME 是以醋酸纤维薄膜 CAM 作支持物的一种区带电泳技术 醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯 将它溶于有机溶剂 如 丙酮 氯仿 氯乙烯 乙酸乙酯等 后 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜 该膜具有均一的泡沫状结构 渗透性强 对分子移动阻力小 厚度为120 本实验以醋酸纤维素薄膜为电泳支持物 分离人血清蛋白 血清蛋白中含有清蛋白 球蛋白 球蛋白 球蛋白和各种脂蛋白等 各种蛋白质由于氨基酸组分 立体构象 分子量 等电点及行状不同 在电场中的迁移速度不同 分子量小 等电点低的 在相同碱性PH缓冲体系中 带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快 例如人血清蛋白在PH8 6的缓冲体系中电泳 染色后可显示5条区带 清蛋白泳动最快 其余依次是球蛋白 实验材料与仪器 一 材料 人血清 二 仪器醋酸纤维薄膜 8X2mm 点样器 染色皿 漂洗器 镊子 玻璃板 常压电泳仪 直流电源整流器 水平电泳槽 粗滤纸 直尺和铅笔 实验试剂 巴比妥缓冲液 pH8 6I 0 06 氨基黑10B染色液 漂洗液 95 乙醇45ml 冰醋酸5ml 蒸馏水50ml 洗脱液0 4mol LNaOH 透明液 无水乙醇 冰醋酸 7 3 实验步骤 1 浸泡 用镊子取醋酸纤维薄膜放在缓冲液中浸泡20分钟 2 点样 把膜条从缓冲液中取出 夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体 然后铺在玻璃板上 无光泽面朝上 将点样器在血清中沾一下 量薄薄一层为好 再在膜条一端2 3厘米处轻轻水平地落下并随时提起 这样即在膜条上点上了细条状的血清样品 3 电泳 在电泳槽内加入缓冲液 使两个电极槽内的液面等高 将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上 膜条点样的一端放在负极上 通电 电流强度每条膜1mA 注意强度 电泳时间约为50分钟 4 染色 电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡5分钟 5 漂洗 将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液申漂洗数次至无蛋白区底色脱净为止 可得到色带清晰的电泳图谱 6 透明 将脱色后干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡2 3分钟后取出平铺在玻璃板上 用一直径0 5cm的玻璃棒
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