生物实验常用溶液的配制

常用溶液的配制常用溶液的配制 贮存液配方 solutionIngredientsMWDoseNote NaOH40 004g10M L NaOH T H2O 10ml 搅拌溶解 Tris HOCH2 3CNH 2 121 1412 11g 浓盐酸约 5ml 1M L Tris Cl T H2O 80ml 微波炉加热溶 解 冷却后浓 盐酸调 pH 至 8 0 加三蒸水 定容至 100ml EDTA C10H6N2O8 292 252 92g0 1M L EDTA T H2O 80ml 微波炉加热溶 解 冷却后 10M L NaOH 调 pH 至 8 0 加三蒸水定容 至 100ml RNA 酶 A 10mmol L Tris Cl pH7 5 RNA 酶 A 母液 10mg ml 15mmol L NaCl 100 加热 15 分钟 使混有的 DNA 酶失活 冷却后用 1 5ml eppendorf 管分 装成小份保存 于 20 工作液配方 solutionIngredientsmaterialsDoseNote 50mmol L GlucoseGlucose C6H12O6 H2O 198 17 0 99g 溶液 25mmol L Tris Cl1M L Tris Cl 2 5ml 搅拌溶解后定容至 100ml 高压灭菌 4 保存 10mmol L EDTA0 1M L EDTA10ml T H2O 50ml 1 SDSSDS1g T H2O 100ml 溶液 0 2mol L NaOH 分开常温保存 用 时临配 1ml 溶液 1 SDS 980 l 10mol L NaOH 20 l 5 mol L KAcCH3COOK MW 98 14 60ml 冰醋酸11 5ml 溶液 T H2O 28 5ml 定容至 100ml 并高 压灭菌 溶液终浓 度 K 3mol L Ac 5mol L 蛋白胨 Tryptone 10 g 酵母提取物 Yeast extract 5 g LB 液体培养 基 Luria Bertani NaCl 10 g 溶于 800ml 去离子 水中 NaOH 调 pH 至 7 5 加去离子水 至总体积 1 升 高压 下蒸气灭菌 20 分钟 LB 液体培养基100mlLB 固体培养 基 琼脂粉 1 2g 高压灭菌后成凝胶 状 用时微波炉加 热至 100 以上溶 解 加入 5mg ml Ampcillin 1ml 终 浓度为 50ug ml 摇匀后倒入培养皿 中 冷却凝固即可 涂板 Ampcillin 规格 0 48g 80 万 U 1 支氨苄青霉素 Ampicillin Amp 工作液三蒸水 100ml 5mg ml 贮存液 终 浓度为 50ug ml 20 保存备用 溶菌酶溶液 0 1g溶菌酶溶液 10mg ml 10mmol L Tris Cl pH8 0 10ml 分装成 1ml 小份 保存于 20 每一小 份一经使用后便予 丢弃 NaAc 3H2O 40 81g3mol l NaAc pH5 2 三蒸水 50ml 冰醋酸调 pH 至 5 2 加水定容至 100ml 分装后高压 灭菌 储存于 4 冰 箱 10mmo LTris Cl 1M LTris Cl pH8 0 0 5ml 1mmol L EDTA0 1M LEDTA pH8 0 0 5ml TE 缓冲液 T H2O 49ml 加水定容至 50ml 高压灭菌后 EP 管 分装备用 Tris54g 硼酸27 5g TBE 缓冲液 5 0 5M LEDTA pH8 0 20m l 定容至 1000ml 0 25 溴酚蓝溴酚蓝0 25g 40 w v 蔗糖水溶液 蔗糖40g 上样缓冲液 6 三蒸水80ml 定容至 100ml 琼脂糖粉0 14g0 7 琼脂糖 凝胶 1 TBE 20ml 微波炉加热溶解 温度降至 50 左右 加入 2 l EB 溴化 乙锭 后制胶 Tris 碱242 g 冰醋酸57 1g ml 50 x TAE pH 8 5 40mM Tris 碱 40 mM 醋 酸 1 mM EDTA Na2EDTA 2H2O 0 5M EDTA pH8 0 18 61 g 100ml Tris 加 300ml 去离 子水加热搅拌溶解 后 加入 0 5M 的 EDTA pH8 0 100ml 再加冰醋酸 去离子水调整体积 到 1 升 10 x TBE 89 mM Tris碱 89 mM 硼酸 2 mM EDTA Tris 碱 108 g 硼酸 55 g Na2EDTA 2H2O 7 44g 加去离子水调整体积到1升 生物化学实验常用缓冲液的配制方法生物化学实验常用缓冲液的配制方法 1 0 2mol L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液 组份浓度 0 2mol L pH 6 0 配制量 1L 配置方法 1 称取磷酸氢二钠 12水 8 82 g 2 称取磷酸二氢钠 2水 27 34g 3 用去离子水溶解并定容至 1L 室温保存 注意 此为母液 使用时稀释 40倍使用 2 洗脱液 洗脱液 组份浓度 0 15mol L 含 0 15mol L 氯化钠的 0 005mol L pH 6 0的磷酸缓冲液 配制量 10L 配置方法 1 称取氯化钠 87 66g 2 用 0 2mol L pH6 0的 磷酸缓冲液 250mL 溶解 3 用去离子水稀释至 10L 室温保存 3 0 3mol L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液 组份浓度 0 3mol L pH7 8 配制量 0 5L 配置方法 1 准确称取磷酸氢二钠 12水 49 150g 2 磷酸二氢钠 2水 2 000g 3 用去离子水溶解并定容至 0 5L 室温保存 注意 此为母液 使用时稀释 10 倍使用 4 0 2mol L 乙酸缓冲液乙酸缓冲液 组份浓度 0 2mol L pH4 6 配制量 2L 配置方法 1 准确称取乙酸钠 3水 54 44g 2 加入 23mL 冰乙酸 溶解 3 用去离子水溶解并定容至 2L 4 保存 5 0 2mol L 磷酸磷酸 柠檬酸缓冲液 柠檬酸缓冲液 pH 2 6 4 6 6 6 组份浓度 0 2mol L 配制量 各 1L 配置方法 1 母液 A 0 2mol L 的 Na2HPO4溶液 称取 Na2HPO4 12 水 143 256g 用 去离子水定容至 2L 2 母液 B 0 1mol L 的柠檬酸溶液 称取柠檬酸 1水 42 028g 用去离子水溶解 定容至 2L 3 pH2 6 4 6 6 6的三种缓冲液如下表配制 pH 值 A mL B mL 2 6 109 0 891 0 4 6 467 5 532 5 6 6 727 5 272 5 4 按上表混匀后 4 保存 6 20 SSC 缓冲液缓冲液 配制量 1L pH7 0 配置方法 1 准确称取 175 2g 氯化钠 2 准确称取 88 2g 柠檬酸钠 2水 3 溶解于 800mL 去离子水中 4 加入数滴 10mol L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 7 0 5 加去离子水定容至 1L 注意 按实验需要可分装后高压灭菌 10 SSC 5 SSC 1 SSC 可由 20 SSC 做相应稀释得到 7 0 15mol L 氯化钠氯化钠 乙二胺四乙酸二钠缓冲液 乙二胺四乙酸二钠缓冲液 pH8 0 组份浓度 0 15mol L 配制量 1L 配置方法 1 准确称取氯化钠 8 77g 2 称取乙二胺四乙酸二钠 37 2g 3 溶于 800mL 去离子水中 4 用固体的氢氧化钠调 pH 值为 8 0 5 加去离子水定容至 1L 8 1 15mol L 的磷酸盐缓冲液 的磷酸盐缓冲液 pH7 6 组份浓度 0 15mol L 配制量 1L 配置方法 1 溶液甲 1 15mol L 的 KH2PO4溶液 称取 KH2PO49 078g 用去离子水溶 解定容至 1L 2 溶液乙 1 15mol L 的 Na2HPO4溶液 称取 Na2HPO4 2水 11 876g 或磷酸氢 二钠 12水 23 894g 用去离子水溶解定容至 1L 3 pH7 6磷酸盐缓冲液 将 和 按 1 4 8 6比例混合即可 9 5 TrisGlycineBuffer SDSPAGE 电泳缓冲液 电泳缓冲液 组份浓度 0 125M Tris 1 25M Glycine 0 5 w v SDS 配制量 1L 配置方法 1 称取下列试剂试剂 置于 1L 烧杯中 Tris 15 1g Glycine 94g SDS 5 0g 2 加入约 800mL 的去离子水 搅拌溶解 3 加去离子水将溶液定容至 1L 后 室温保存 10 5 SDSPAGE Loading Buffer 组份浓度 250mM TrisHCl pH6 8 10 W V SDS 0 5 W V BPB 50 V V 甘油 5 W V 巯基乙醇 配制量 5mL 配置方法 1 量取下列试剂 置于 10mL 塑料离心管中 1M TrisHCl1 25mL SDS 0 5g BPB 25mg 甘油 2 5mL 2 加入去离子水溶解后定容至 5mL 3 小份 500 l 份 分装后 于室温保存 4 使用前将 25 l 的 2 ME 加到每小份中 5 加入 2M E 的 LoadingBuffer 可在室温下保存一个月左右 1 1M TrisHCl 组份浓度 1M TrisHCl pH7 4 7 6 8 0 配制量 1L 配置方法 1 称量 121 1gTris 置于 1L 烧杯中 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值 pH 值 浓 HCl 7 4 约 70mL 7 6 约 60mL 8 0 约 42mL 4 将溶解定容至 1L 5 高温高压灭菌后 室温保存 注意 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值 因为 Tris 溶液的 pH 值随温度 的变化差很大 温度每升高 1 溶液的 pH 值大约降低 0 03个单位 2 1 5M TrisHCl 组份浓度 1 5M TrisHCl pH8 8 配制量 1L 配置方法 1 称取 181 7gTris 置于 1L 烧杯中 2 加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 用浓盐酸调 pH 值至 8 8 4 将溶液定容至 1L 5 高温高压灭菌后 室温保存 注意 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值 因为 Tris 溶液的 pH 值随 温度的变化差异很大 温度每升高 1 溶液的 pH 值大约降低 0 03个单位 3 10 TE Buffer 组份浓度 100 mM TrisHCl 10 mM EDTA pH 7 4 7 6 8 0 配制量 1L 配置方法 1 量取下列溶液 置于 1L 烧杯中 1M TrisHClBuffer pH7 4 7 6 8 0 100mL 500 mM EDTA pH8 0 20mL 2 向烧杯中加入约 800mL 的去离子水 均匀混合 3 将溶液定至 1L 后 高温高压灭菌 4 室温保存 4 3 M 醋酸钠醋酸钠 组份浓度 3M 醋酸钠 pH5 2 配制量 100mL 配置方法 1 称取 40 8gNaOAc 3H2O 置于 100 200mL 烧杯中 加入约 40mL 的去离子 水 搅拌溶解 2 加入冰乙酸调节 pH 值至 5 2 3 加入去离子水将溶液定容至 100mL 4 高温高压灭菌后 室温保存 5 PBSBuffer 组份浓度 137mM NaCl 2 7mM KCl 10 mM Na2HPO4 2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 1 称量下列试剂 置于 1L 烧杯中 NaCl 8 g KCl 0 2g Na2HPO4 1 42 g KH2PO4 0 27g 2 向烧杯中加入约 800mL 的去离子水 充分搅拌溶解 3 滴加 HCl 将 pH 值调节至 7 4 然后加入去离子水将溶液定容至 1L 4 高温高压灭菌后 室温保存 注意 上述 PBS Buffer 中无二价阳离子 如需要 可在配方中补充 1mM CaCl2 和 0 5mM MgCl2 6 10 M 醋酸铵醋酸铵 组份浓度 10M 醋酸铵 配制量 100mL 配置方法 1 称量 77 1g 醋酸铵置于 100 200 mL 烧杯中 加入约 30mL 的去离子水搅拌溶解 2 加去离子水将溶液定容至 100mL 3 使用 0 22 m 滤膜过滤除菌 4 密封瓶口于室温保存 注意 醋酸铵受热易分解 所以不能高温高压灭菌 7 TrisHCl 平衡苯酚平衡苯酚 配置方法 1 使用原料 大多数市售液化苯酚是清亮无色的 无需重蒸馏便可用于分子生物生物 学实验 但有些液化苯酚呈粉红色或黄色 应避免使用 同时也应避免使用结晶苯酚 结晶 苯酚必须在 160 对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物 这些氧化产物可引起磷酸二酯键 的断裂或导致 RNA 和 DNA 的交联等 因此 苯酚的质量对 DNA RNA 的提取极为重要 我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验 2 操作注意 苯酚腐蚀性极强 并可引起严重灼伤 操作时应戴手套及防护镜等 所有操作均应在通风橱中进行 与苯酚接触过的皮肤部位应用应用大量水清洗 并用肥皂和水洗 涤 忌用乙醇 3 苯酚平衡 因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相 因此使用苯酚前必须 对苯酚进行平衡使其 pH 值达到 7 8以上 苯酚平衡操作方法如下 液化苯酚应贮存于 20 此时的苯酚呈现结晶状态 从冰柜中取出的苯酚首先在室温 下放置使其达到室温 然后在 68 水浴中使苯酚充分溶解 加入羟基喹啉 8Quinolinol 至终浓度 0 1 该化合物是一种还原剂 RNA 酶的不 完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂 同时因其呈黄色 有助于方便识别有机相 加入等体积的 1M TrisHCl pH8 0 使用磁力搅拌器搅拌 15分钟 静置使其充分分层 后 除去上层水相 重复操作步骤 加入等体积的 0 1M TrisHCl pH8 0 使用磁力搅拌器搅拌 15分钟 静置使其充分分 层后 除去上层水相 重复操作步骤 稍微残留部分上层水相 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7 8 将苯酚置于棕色玻璃瓶中 4 避光保存 8 苯酚 苯酚 氯仿氯仿 异戊醇异戊醇 配置方法 1 说明 从核酸样品中除去蛋白蛋白质时常常使用苯 酚 氯仿 异戊醇 25 24 1 氯仿可使 蛋白 25 24 1 质变性并有助于液相与有机相的分离分离 而异戊醇则有助于消除抽提 过程中出现的气泡 2 配置方法 将 TrisHCl 平衡苯酚与等体积的氯仿 异戊醇 24 1 均匀混合后 移入棕 色玻璃瓶中 4 保存 9 10 W V SDS 组份浓度组份浓度 10 W V SDS 配制量 100mL 配置方法 1 称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100 200mL 烧杯中 加入约80mL 的去离子 水 68 加热溶解 2 滴加数滴浓盐酸调节 pH 值至 7 2 3 将溶液定容至 100mL 后 室温保存 10 2 N NaOH 组份浓度 2N NaOH 配制量 100mL 配置方法 1 量取 80mL 去离子水置于 100 200mL 塑料烧杯中 NaOH 溶解过程 中大量放热 有可能使玻璃烧杯炸裂 2 称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中 边加边搅拌 3 待 NaOH 完全溶解后 用去离子水将溶液体积定容至 100mL 4 将溶液转移至塑料容器中后 室温保存 11 2 5N HCl 组份浓度 2 5 N HCl 配制量 100mL 配置方法 1 在 78 4mL 的去离子水中加入 21 6mL 的浓盐酸 11 6N 均匀混合 2 室温保存 12 5 M NaCl 组份浓度 5M NaCl 配制量 1L 配置方法 1 称取 292 2gNaCl 置于 1L 烧杯中 加入约 800mL 的去离子水后搅拌溶解 2 加去离子水将溶液定容至 1L 后 适量分成小份 3 高温高压灭菌后 4 保存 13 20 W V Glucose 组份浓度 20 W V Glucose 配制量 100mL 配置方法 1 称取 20gGlucose 置于 100 200mL 烧杯中 加入约 80mL 的 去离子水后 搅拌溶解 2 加去离子水将溶液定容至 100mL 3 高温高压灭菌后 4 保存 14 Solution I 组份浓度 25mM TrisHCl pH8 0 10mM EDTA 50mM Glucose 质 粒提取用 配制量 1L 配置方法 1 量取下列溶液 置于 1L 烧杯中 1M TrisHCl pH8 0 25mL 0 5M EDTA pH8 0 20mL 20 Glucose 1 11M 45mL dH2O 910mL 2 高温高压灭菌后 4 保存 3 使用前每 50mL 的 Soliution I 中加入 2mL 的 RNase A 20mg mL 15 Solution II 组份