大学生创新创业训练计划申报书

附件1：四川师范大学大学生创新创业训练计划项目申 报 书项目名称：小花清风藤中的槲皮素对小鼠的抗氧化作用项目类型：R创新训练 创业训练 申 报 人：赵庭梅学 院：生命科学学院专 业：生物技术年 级：2013级指导教师：四川师范大学教务处制项目名称小花清风藤中的槲皮素对小鼠的抗氧化作用项目负责人姓名学院名称专业年级班级联系电话项目执行时间邮 箱项目组成员的情况姓名专业年级联系电话王小会生物科学2013级李佳家生物技术2013级指导教师情况姓名勾洵职称实验师学历/学位研究生/博士主讲课程生物化学实验，分子生物学实验研究方向阿兹海默症，糖尿病所在学院生命科学学院E-联系电话一、项目简介越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或抗氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同健康问题。 如果能够在我们生活中普遍的廉价的植物中，例如：小花清风藤提取物槲 皮素消除过多氧化自由基，对于许多自由基引起的相关疾病进行预防。我们应摄取足够的抗氧化剂，延缓身体退化速度，防止肌肤衰老，并时刻保持青春神采，对现在广大的化妆品世界有着巨大的前景。 小花清风藤是清风藤属的木质藤木。其根、茎、枝、叶均可入药，主要分布于广西、贵州、云南。布依族、苗族的民间常用言其可清热利湿、祛风镇痛的功度，民间常用其根茎入药治疗急性肝炎和风湿劳伤。槲皮素作为小花清风藤中有效成分之一，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集和清除自由基等多种生物活性。我组通过用槲皮素注射到小鼠体内，通过机制代谢测定槲皮素抗氧化能力，对我国现目前由自由基引起的疾病的治疗具有指导意义二、申请理由（立项依据、自身及团队具备的知识、特长、前期准备等）1、 立项依据 近时以来，随着分子生物学、医学、食品科学，尤其是衰老等一系列问题的展现，从药学学科而言，抗氧化作用越来越显示出其生命力，减缓人体衰老，清除体内的自由基等都与抗氧化作用有关，人们也越来越多的关注到抗氧化作用这一块，很多的物质都具有抗氧化的作用，但是还有许多的物质没有进行这一方面的而研究。于是我们就对小花清风藤的抗氧化作用进行了研究。小花清风藤为清风藤科清风藤属的常绿木质藤本，较易获取，其产云南东南部至西南部、贵州西部及西南部、广西西部及西南部。生于海拔800-2800米的山沟、溪边林中或山坡灌木林中。小花清风藤全株入药，味甘、微涩，性温，具祛风除湿、散瘀消肿之功效。传统用于治风湿骨痛、肾炎水肿、甲状腺肿、跌打损伤等症。贵州产小花清风藤为布依族、苗族的民间药，有清热利湿、祛风镇痛的功效，民间常用其根茎入药治疗急性黄疸性肝炎和风湿劳伤。多个研究发现, 槲皮素作为小花清风藤中有效成分之一，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集和清除自由基等多种生物活性。与分子结构中B环和位点3的酚羟基基团有关。体外实验发现,共同溶于过氧化甲基亚油酸盐的槲皮素和维生素E在抗氧化作用方面具协同作用。生育酚和槲皮素的混合物较单一的生育酚有明显延迟的耗氧作用。但是没有明确的研究针对槲皮素单独的的抗氧化作用做出一定的说明，所以我们对槲皮素的抗氧化作用作出了一定的研究。2、团队成员介绍 本团队由三名大三学生和一名大二学生构成。 理论基础：团队成员都有一定的理论知识基础，学习过植物生物学、动物生物、分子化学、细胞生物学、遗传续学、分子生物学等专业课程，其中李佳家、赵庭梅曾多次获得奖学金，王小会、李月琴等成员也获得过奖学金，专业知识掌握牢固，具备较高的专业素养，有足够的理论基础支持本次实验的研究。 实验操作：李佳家曾参与“加拿大飞蓬挥发油对蚕豆保卫细胞的影响”、“复发黑骨藤对类风湿性关节炎的治疗机制(动物实验：动物造模；切片观察)”、“咖啡因对小鼠自由基的影响”等实验项目，其中“复发黑骨藤对类风湿性关节炎的治疗机制”以参与者身份进行研究。赵庭梅曾参与“芥菜石蜡切片技术的优化”、“植物组织培养技术优化”、“蚕豆对重金属离子铯的富集作用”其中“芥菜石蜡切片技术的优化”是省级资助项目。王小会曾参与“入侵植物土荆芥次生代谢产物急性毒性研究”、“四川短尾鼩节律研究”等实验的研究。李月琴曾参与“水杨酸对提高植物抗性和降低核素”、“施用钾肥降低植物重金属铯的吸收”等实验的研究。成员均参与过实验研究，具备一定的实验操作技能，有利于本次实验的进行。 团队成员均具备良好的实验操作技能，掌握了一定的专业知识，对本次实验研究的进行也有很大的兴趣，相信在我们的坚持不懈之下一定会有所收获的。3、前期准备 在2015年9月到11月已经完成了咖啡因对小鼠抗氧化能力和免疫功能的影响的预实验准备，为本次的实验研究打下了良好的基础。在此期间我们查阅了大量的相关文件，做了充足的准备。并且在2016年3月中旬，已确定了我们实验的具体方案与流程。4、实验条件 （1）实验材料：小花清风藤粗粉、ICR小鼠（2）实验试剂：60%乙醇溶液，蒸馏水，槲皮素，甲醇 （3）实验仪器：分析天平， 烧杯、，玻璃棒，超声清洗仪，酒精灯，铁架台，150ml圆底烧瓶，冷凝管，温度计，真空泵，250ml容量瓶，高效液相色谱仪（色谱条件色谱柱:Shim-ack vp-DS(2504.6mm)；流动相:甲醇；0.1%磷酸(4357)；流速1.0m1/min；检测波长360nm；柱温30。）上述实验所需药品均可采购，仪器均可使用。5、参考文献1 舒毅,谭陶,张思宇,吴红崑. 槲皮素的药理学研究进展【J】.华西药学杂志2008,23(6)：6896912 邓赟,陈谨,陈斌,郑颖,吴凤锷. 小花清风藤生物碱成分的研究【J】. 天然产物研究与开发3黄艳,李齐修,刘元,宋志钊,文志云,刘布鸣. 簇花清风藤的化学成分研究【J】. 化学成分2014,64张敏,杨剑,韦欣,龙庆德.医药导报【J】.2014,10.5刘易蓉,梁光义,张永萍. 小花清风藤中槲皮素的提取工艺研究【J】. 贵阳中医学院2016,6三、项目方案与进度安排（一）项目进行具体步骤阶段一、小花清风藤中槲皮素的提取实验材料、试剂及用具材料：小花清风藤粗粉试剂：60%乙醇溶液，蒸馏水，槲皮素，甲醇 用具：分析天平， 烧杯、，玻璃棒，超声清洗仪，酒精灯，铁架台，150ml圆底烧瓶，冷凝管，温度计，真空泵，250ml容量瓶，高效液相色谱仪（色谱条件色谱柱:Shim-ack vp-DS(2504.6mm)；流动相:甲醇；0.1%磷酸(4357)；流速1.0m1/min；检测波长360nm；柱温30。）实验步骤一、槲皮素的提取1、准确安装好蒸馏设备。2、称取小花清风藤粗粉5000 g并加入烧杯中，再加入100 mL 60%乙醇溶液。摇匀后，在水温为60 的超声清洗仪中浸提50 min。3、把浸提后的溶液加到150mL圆底烧瓶中，在100 下进行回流提取1小时。4、将收集液再在78再进行一次蒸发回流，除去乙醇。5、用真空泵抽滤处理提取液，密封保存备用。二、用HPLC法测定材料中槲皮素的含量1、精密量取滤液5ml 于25ml容量瓶中,以甲醇稀释至刻度。2、分别精密配制浓度为0.02 944mg/ml，0.05888 mg/ml，0.08832 mg/ml，0.1472 mg/ml，0.20608 mg/ml，0.2944 mg/ml的槲皮素对照品溶液10ml，按上述色谱条件分别进样5微升，测定对照品峰面积，以峰面积积分值为坐标Y，槲皮素对照品溶液浓度为横坐标X，绘制标准曲线，并求出回归方程，从而得出小花清风藤中槲皮素的含量。阶段二、用提取的槲皮素腹腔注射小鼠30天试剂：提取液用具：烧杯，注射器，EP管，离心机。实验步骤：1、小鼠随机分为四组，分别注射高、中、低剂量槲皮素提取液和生理盐水30天。2、30天后，将四组小鼠分别进行眼球取血，分离血浆待用。阶段三、通过MDA和T-SOD试剂盒测定小鼠的抗氧化能力试剂：小鼠血液，总蛋白定量测剂盒，MDA测试盒，SOD测试盒用具：试管，高压蒸汽灭菌锅，移液枪，水浴锅，紫外分光光度计（或者酶标仪），离心机。实验步骤：1、把所需器材放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌。2、利用总蛋白测试盒把小鼠血液中总蛋白调到同一水平。3、利用MDA测试盒和T-SOD测试盒检测小鼠的抗氧化水平。4、分析小花清风中槲皮素的抗氧化能力。（二）实验方案简图（三）研究进度安排1、三月至四月初：收集资料。 2、四月初到四月中旬：提取小花清风藤中的槲皮素。3、四月中旬到五月中旬：建立模式小鼠。4、五月中旬到六月中旬：用试剂盒对模式小鼠进行抗氧化能力测定，并对所得结果进行汇总整理，分析结果。5、六月下旬：完成实验报告一份，争取撰写并发表一篇论文。 （四）设备、药物及实验材料： 本研究所需仪器设备、药物及研究材料均由研究室（第三实验楼西-205）提供或购买。（五）图书资料：1、学校图书馆； 2、生命科学学院资料室； 3、中国学术期刊全文数据库以及学校图书馆可供查阅的外文数据库。四、项目特色与创新1.特色与创新 首次探究小花清风藤中的槲皮素对小鼠抗氧化能力的影响，掌握从小花清风藤中提取槲皮素的提取工艺，为其进一步的应用研究奠定基础。2. 实际影响与应用 本实验为探究小花清风藤中所含槲皮素影响小鼠抗氧化能提供参考，同时可为小