志贺菌及三糖铁原理.doc

志贺氏菌的检验 发布日期：2010-09-01浏览次数：4375 核心提示：一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36培养68h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。二、分离和初步生化试验取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36培养1824h。 志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。附：HE琼脂平板原理及照片SS平板原理及照片麦康凯琼脂平板照片伊红美蓝琼脂平板照片在沙门氏菌的检验中，有时也使用HE、SS平板进行初步筛选。SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法 挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36培养1824h，分别观察结果。附：葡萄糖半固体原理及结果。 三糖铁琼脂现象及原理分析下述培养物可以弃去：a.在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b.在1824h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c.不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d.产气的培养物；e.有动力的培养物；f.产生硫化氢的培养物。凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。三、血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用115各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌312型多价血清及各型因子血清检查。附：福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原四、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖铵西蒙氏柠檬酸盐赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶pH7.2尿素KCN生长水杨苷和七叶苷的分解除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做5%乳糖发酵甘露醇棉子糖甘油的发酵靛基质试验志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。附：志贺氏菌属四个群的生化特性五、结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。编三糖铁（TSI）琼脂试验的原理 发布日期：2010-05-13浏览次数：2610 核心提示：试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置361培养1824h，观察结果。三试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置361培养1824h，观察结果。三糖铁琼脂(TSI)成分：蛋白胨 20.0g牛肉膏3.0g乳 糖 10.0g蔗糖 10.0g葡萄糖1.0g 硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g酚红 0.025g或5g/L溶液5mL氯化钠5.0g 硫代硫酸钠0.5g琼脂 12.0g蒸馏水 1000.0mL 除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.40.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm100mm),每管约24mL,高压灭菌121 10 min或11515 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。 原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。微生物在培养基上的典型特征2009-09-22 18:10:29|分类： 微生物学 |标签： |字号大中小订阅 金黄色葡萄球菌在BP琼脂上典型特征金黄色葡萄球菌呈圆形 , 表面光滑、凸起、湿润 , 直径 2 3mm 。灰黑色至黑色 , 有光泽 , 常有浅色 ( 非白色 ) 的边缘 , 周围绕以不透明圈 ( 沉淀 ), 其外常有一清晰带 ( 卵磷脂环 ) 。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株 , 除没有不透明圈和清晰带外 , 其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落 , 其黑色常较典型菌落浅些 , 且外观可能较粗糙 , 质地较干燥。大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征典型菌落为紫红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。 沙门氏菌在HE琼脂上典型特征在 37 培养 18-24 小时后， 沙门氏菌、亚利桑那菌和变形杆菌为蓝绿色至蓝色、有或无黑色中心的菌落；大肠杆菌和大肠菌群为粉红色菌落，有沉淀环； ，无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。志贺氏菌和普罗菲登斯菌为绿色、湿润而隆起菌落。 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽. 大肠菌群在去氧胆酸盐琼脂(DC)上典型特征典型菌落为红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 2-3mm 或更大。 沙门氏菌在SS琼脂上典型特征沙门氏菌在 37 培养 18-24 小时后，无色透明菌落有黑色中心；志贺氏菌呈无色透明菌落。 副溶血性弧菌在海博弧菌