丹参酮ⅡA.doc

丹参酮A对血小板活化钙信号的影响及机制的研究 袁彬1 ，吴鸿2（1.河南中医学院2011级硕士研究生，郑州 450008；2.河南中医学院细胞成像实验室，郑州 450002）摘 要 目的:总结丹参酮A对血小板活化钙信号的影响及机制。方法：通过调研和检索文献概述丹参酮A对血小板活化钙信号的影响及机制。结果：丹参酮A是活血化瘀类中药丹参的脂溶性成分之一，具有广泛的生物活性,如改善微循环、清除氧自由基、抗血小板聚集等。丹参酮A的以上生物学活性与抑制血小板活化有关；血小板活化在血栓形成的过程中起着重要重用。而其活化的标志是血小板胞质内钙离子浓度升高。钙离子与细胞传导信号密切相关，可以作为配体直接与受体结合启动信号转导，也可以作为第二信使偶联信号转导参与调节大多数的细胞活动，包括血小板活化。血小板胞质内钙离子浓度升高取决于细胞外血小板膜外基质中的钙内流和血小板细胞内钙池的钙释放。结论：丹参酮A通过影响钙离子通道的开闭而阻止血小板胞质内钙离子浓度的升高，从而发挥抗血小板活化的作用。 关键词 丹参酮A；血小板活化；钙信号心、脑血管疾病包括缺血性冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病) 、脑卒中和(或) 周围血管病,是导致人类死亡的主要病因1。血小板活化在动脉粥样硬化、止血、血栓形成、炎症、伤口愈合、免疫力、肿瘤转移的过程中发挥着要作用2。丹参酮A（Tanshinone A，Tan A）是活血化瘀类中药丹参的脂溶性成分之一，具有广泛的生物活性,具有改善微循环3、清除氧自由基4、具有抑制血小板聚集5、抗血栓形成6等作用，其作用与防止血小板内钙离子超载7或通过减少巨核细胞数量而减少血小板生成有关8等作用。血小板的活化主要标志是血小板胞质内钙离子浓度（intracellular calcium concentration, Ca2+i）升高9，有报道称10TanA可能是作用于钙离子通道而发挥作用。1 钙信号在血小板活化过程中的作用 G蛋白耦联受体所介导的细胞信号通路有钙离子(calcium ion，Ca2+)的参与11, 12。Ca2+可以作为配体直接与血小板磷脂膜上的G蛋白偶联受体(G-ProteinCoupled Receptors ,GPCRS)结合启动信号传导，也可以作为第二信使耦联信号传导参与调节大多数的细胞活动。包括血小板活化13。血小板胞质内钙离子浓度(Ca2+i)升高取决于细胞外血小板膜外基质中的钙内流和血小板细胞内钙池的钙释放14。影响血小板胞内钙离子浓度的离子通道有：受体门控钙通道（ROC）和钙池控制钙通道（SOCC）15。有实验证实16使用钙通道阻滞剂能显著抑制血小板的聚集、ADP和血栓素A2的释放，但不能完全阻断。在GPCRs家族中有不同受体在血小板活化过程中发挥着信号传导作用17。GPIIb/IIIa复合体就是其中之一，起着内外活化信号的传递作用18,同时也具有使血小板稳固聚集的信号传导作用19。使用GPIIb/IIIa受体阻滞剂20或破坏GPIIb/IIIa受体能阻断活化信号的进一步下传。血小板膜GPCRs激活后，G蛋白亚体活性成分激活磷脂酶C（PLC），将二磷酸磷脂酰肌醇（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate，PIP2）水解成肌醇三磷酸（Inositol triphosphate ，IP3）和甘油二酯（diglyceride，DAG）。IP3作用于内质网（endoplasmic reticulum ，ER）膜上IP3受体，触发Ca2+释放，引起Ca2+i升高。同时通过血小板膜钙池控制钙通道引发钙内流（store-operated calcium channels，SOCE）21，钙池细胞器膜上Ca2+传感器分子（STIM1）和血小板膜上跨膜蛋白（Orai1），两种蛋白分子共同发挥SOCE效应22, 23。血小板聚集需要活化放大,而放大过程则需要二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate ，ADP)参与24, 25, 但是其发挥作用离不开GPIIb/IIIa受体的前一阶段活化信号26。 与ADP特异性结合的是血小板膜受体P2Y1,and P2Y12 ，这两个特异性受体帮助血小板将活化信号放大27。有实验证实，阻断这两个受体与ADP的结合不能完全阻断血小板的聚集，这也说明血小板的聚集是由多途径参与的生物学行为28。钙离子通过调控磷脂酶D(Phospholipase D;NAPEPLD ;PLD) 催化生成磷脂酸的反应，间接影响细胞膜流动性,从而影响血小板的伪足伸出、变形29。钙调素（calmodulin，CaM）由单一肽链构成，具有四个钙离子结合部位。结合钙离子发生构象改变，可激活钙调素依赖性激酶（CaM-Kinase）。但是阻断钙调素的活化不能阻断血小板的活化30, 31。 2 Tan A对钙信号的影响的机制 Tan A是从多途径、多角度对钙信号的传导产生的影响的。不但能够通过减少巨核细胞数量而减少血小板生成8而且还从如下角度影响血小板的活化。1、血小板的活化需要血小板膜上的GPIIb/IIIa复合体的参与，而降低其含量能够影响活化信号的传递，研究证实Tan A可使血小板GPIIb/IIIa含量降低，具有较温和的抑制GPIIb/IIIa 复合物活性的作用32。2、ADP、凝血酶和胶原等物质是强烈的致聚剂，同时也是活化信号放大、稳固已活化血小板的关键物质，干扰ADP、凝血酶和胶原等物质诱发的大鼠血小板聚集过程表明，Tan A有明显的抑制该过程的作用，且呈剂量依赖关系33；3、如前所述，胞外钙离子内流是血小板活化的前提条件，其内流通道被阻断能够显著影响血小板活化过程，Tan A34主要可能影响ROC和SOCC，但至于其如何影响血小板细胞中受体介导的钙通道开放导致胞外钙离子大量流入胞内，目前还没有明确的答案。4.环磷酸腺苷(cAMP)是血小板活化的抑制性第二信使，干扰胞内cAMP浓度能够明显影响信号的传递。其浓度增高能够抑制PLC的活性，抑制PIP2分解成IP3和DAG的过程，而有研究表明35Tan A能够使胞内cAMP浓度升高，从而证明其有影响该信号的传递过程。在前述的的血小板活化机制中CaM发挥着重要作用，而现在尚未见到报道Tan A对其有影响、如何影响。结 语现有的临床及实验研究表明,血小板活化状态在血栓形成过程中具有重要作用,是血栓形成的重要环节。Tan A作为中药提取物,因其具有抗血小板、抗凝、无毒副作用等特点,且在抑制血栓形成的同时不易引起出血。血小板活化是由多种物质触发、由Ca2+参与的复杂的生物学过程，是血小板膜表面受体构象、活性发生改变引发Ca2+i浓度变化的结果。但如前研究仅限于描述性研究，对Tan A抗血小板活化的多个环节分子机制不清、对钙信号的影响调节的受体靶点不明的问题仍有待深入研究。 参考文献1 梁勇，羊裔明，袁淑兰. 丹参酮药理作用及临床应用研究进展J. 中草药,2000,31(4):304-306.2 Leslie M. 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