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附件一名称来源2009年晚造编号备注H76航七低直链淀粉突变体12.89%H1种小区H77航七低直链淀粉突变体11.91%H2种小区H78航七低直链淀粉突变体15.23%H5种小区H79航七低直链淀粉突变体13%H8种小区H80航七低直链淀粉突变体14%H10种小区H81航七低直链淀粉突变体12%H11种小区H82航七低直链淀粉突变体13%H14种小区H83航七低直链淀粉突变体13%H15种小区H84航七低直链淀粉突变体13%H16种小区H85航七低直链淀粉突变体16%H19种小区H86航七低直链淀粉突变体14%H23种小区H87航七低直链淀粉突变体13%H24种小区H88航七低直链淀粉突变体12%H25种小区H89航七低直链淀粉突变体14%H26种小区H90航七低直链淀粉突变体13%H27种小区H91航恢七号H28-1种小区H92航恢七号H28-2种小区H93航七低直链淀粉突变体15%H35种小区H94航七低直链淀粉突变体15%H36种小区H95桂99低直链淀粉突变体15%H38种小区H96桂99低直链淀粉突变体15%H42种小区H97桂99低直链淀粉突变体14%H43种小区H98桂99低直链淀粉突变体10%H44种小区H99桂99低直链淀粉突变体10%H45种小区H100桂99低直链淀粉突变体10%H46种小区H101桂99低直链淀粉突变体10%H47种小区H102桂99低直链淀粉突变体11%H48种小区H103桂99低直链淀粉突变体10%H49种小区H104桂99低直链淀粉突变体9%H50种小区H105桂99低直链淀粉突变体14%H51种小区H106桂99低直链淀粉突变体16%H52种小区H107桂99低直链淀粉突变体10%H53种小区H108桂99低直链淀粉突变体14%H54种小区H109桂99低直链淀粉突变体10%H55种小区H110桂99低直链淀粉突变体11%H56种小区H111桂99低直链淀粉突变体11%H57种小区H112华B低直链淀粉突变体H59种小区H113华B低直链淀粉突变体H60种小区H114华B低直链淀粉突变体H61种小区H121华航一号H71-1种小区H122华航一号H71-2种小区H123航恢七号H73-1种小区H124航恢七号H73-2种小区H125华BH75种小区H126桂99H76种小区H140荆香糯H89种小区H141荆香糯H90种小区附件二直链淀粉测定1. 称0.01g样品，两个重复；2. 加250l 95%酒精，将样品湿润摇匀；3. 加2250l NaOH（1M）：750l/次，加3次；4. 置沸水中煮10分钟；5. 冷却定容摇匀；6. 空瓶中先加一定量水，移出1250l样品，并以1250l 0.09M NaOH作对照：625l/次，加2次7. 加250l乙酸；8. 加375l碘-碘化钾；9. 定容摇匀，反应15-20分钟；10. 620nm下测分光光度值直链淀粉含量测定药品配方标配：1.00M NaOH溶液：40g NaOH定溶至1000ml0.09M NaOH溶液：90ml 1.00M NaOH溶液稀释至1000ml碘液：2.00g I2+20.00g K2I 定溶至1000ml（需边加热边搅拌）1.00M 乙酸溶液：57.8ml 冰乙酸定溶至1000ml95%乙醇附件三水稻基因组总DNA提取选取水稻单株嫩叶，采用CTAB法提取水稻基因组DNA，具体步骤如下：（1） 取适量新鲜叶片放在2ml离心管中加液氮捣碎，向离心管中加入1mlCTAB抽提液，摇匀；（2） 置于65的水浴锅或恒温箱，每隔10 min轻轻摇动一次，3045 min后取出；（3） 冷却2 min后，加入氯仿异戊醇（24:1）至满管，上下剧烈摇动，使两者混合均匀；（4） 离心管放入离心机中15,000 rpm离心10 min后取出；（5） 小心吸取上清液至新的灭菌离心管中，然后加入600 l预冷的异丙醇，上下轻轻摇动，使异丙醇与水层充分混合；（6） 20放置20 min，使DNA充分沉淀；（7） 10,000 rpm瞬间离心，立即倒掉液体（勿将白色的DNA沉淀倒出），再将离心管倒立于铺开的纸巾上；（8） 1 min后直立离心管，加入720 l 70%的乙醇及80 l 3M NaAc溶液，轻轻摇动，用手指轻弹管尖，使DNA沉淀浮游于液体中；（9） 至少放置30 min，使杂质充分溶解；（10） 10,000 rpm瞬间离心，立即倒掉液体，加入800 l 70%的乙醇将DNA再次漂洗2030 min；（11） 15,000 rpm离心35 min，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；（12） 数分钟后直立离心管，通风厨内干燥DNA；（13） 加入100 l 1TE Buffer，使DNA充分溶解；（14） 置于20保存、备用。相关试剂的配制方法1、 0.5M EDTA (pH8) 在150ml 蒸馏水中加入37.22g (EDTA-Na-2H2O)，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至200ml，高压灭菌后备用。2、 1M Tris-Hcl(pH8) 在150ml 蒸馏水中加入24.22g Tris-碱，加入浓HCL调节pH值至8.0，然后定容至200ml，高压灭菌后备用。3、 2*CTAB-DNA抽提液：先往烧杯中加140ml去离子水，再分别加入16.372g NaCl 、4gCTAB干粉、2g PVP-40000、20ml 1M Tris-Hcl、8ml 0.5M EDTA；混合液置于磁力搅拌器上混匀；加水定容至200ml；高压灭菌，冷却后加入400ul 2-巯基乙醇，轻轻摇匀备用。4、 1*TE Buffer (pH8) 在98.8ml双蒸灭菌水中加入1ml Tris-Hcl(pH8)、0.2ml 0.5M EDTA(pH8)，混匀后备用。5、 3M NaAc (pH7) 往烧杯中加入204.5g NaAc-3 H2O，然后用400ml双蒸水，再加冰乙酸调pH7，最后定容至500ml，灭菌备用。6、 氯仿-异戊醇（24：1） 一般先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇,摇匀。附件四PCR-Acc分子标记PCR反应程序及酶切程序（1）PCR反应体系：反应体系为20l，反应混合液包括：0.4l的模板DNA，10 m/L的Acc酶切正负引物各0.25l，10 l PCR Reaction(由东盛生物科技有限公司生产，包括100mM KCL、20mM Tris-HCl、3mM MgCl2 、400mM dNTP混合物、溴酚蓝)，0.5U Taq DNA聚合酶，其余由双蒸灭菌水（ddH2O）补足。 PCR反应程序：94预变性5min,(94 30sec,57 30sec,72 40sec)35个循环，72再延伸10min, 扩增产物与4下保存备用。（2）酶切程序：吸取PCR产物10l于150l离心管中，加入10buffer （Tris-acetate 33mmol/L, MgAc210 mmol/L, KAc 66 mmol/L,DTT 0.5 mmol/L, pH 7.9）8l和1U的Acc酶，在37恒温反应3h。（3）琼脂糖凝胶电泳检测制备2%琼脂糖凝胶：称取2g琼脂糖于三角瓶中，加入100ml的1.0TBE电泳缓冲液，用微波炉加热至琼脂糖完全溶解，冷却后加入5l的Goldenview，摇匀后倒入制胶槽，加入合适的梳子，待凝固后使用。电泳检测：将酶切产物取出，用移液器吸取10l产物（所有的产物）在2%的琼脂糖凝胶上电泳，以1.0TBE为电泳缓冲液，100V电压下电泳约30min。电压结束后，取出凝胶，在凝胶成像系统的透射光下观察结果并照相保存。微卫星检测：（1）PCR反应体系：反应体系为20l，反应混合液包括：0.4l的模板DNA，10 m/L的484/485正负引物各0.25l，10 l PCR Reaction(由东盛生物科技有限公司生产，包括100mM KCL、20mM Tris-HCl、3mM MgCl2 、400mM dNTP混合物、溴酚蓝)，0.5U Taq DNA聚合酶，其余由双蒸灭菌水（ddH2O）补足。 PCR反应程序：94预变性5min,(94 30sec,57 30sec,72 40sec)35个循环，72再延伸10min, 扩增产物与4下保存备用。(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳，大约3-4小时，结束后，蒸馏水洗胶2次，每次约1min，再用1g/L的AgNO3,溶液染色约10min,蒸馏水同样洗胶2次，1*显影液中摇动显影后观察分析（带颜色变深为止）。附件五直链淀粉含量表格水稻品种第一个实验组第二个实验组平均值淀粉含量H76-10.124 H76-20.111 0.1175 18.62%H77-10.100 H77-20.099 0.0995 14.71%H78-10.120 H78-20.109 0.1145 17.97%H79-10.106 H79-20.110 0.1080 16.55%H80-10.110 H80-20.106 0.1080 16.55%H81-10.110 H81-20.109 0.1095 16.88%H82-10.102 H82-20.107 0.1045 15.79%H83-10.094 H83-20.090 0.0920 13.08%H84-10.095 H84-20.096 0.0955 13.84%H85-10.108 H85-20.110 0.1090 16.77%H86-10.101 H86-20.103 0.1020 15.25%H87-10.101 H87-20.092 0.0965 14.06%H88-10.100 H88-20.096 0.0980 14.38%H89-10.106 H89-20.103 0.1045 15.79%H90-10.083 H90-20.077 0.0800 10.47%H91-10.134 H91-20.142 0.1380 23.07%航七亲本H92-10.144 H92-20.137 0.1405 23.61%航七亲本H93-10.105 H93-20.110 0.1075 16.45%H94-10.098 H94-20.100 0.0990 14.60%H95-10.086 H95-20.092 0.0890 12.43%H96-10.073 H96-20.080 0.0765 9.71%H97-10.071 H97-20.077 0.0740 9.17%H98-10.081 H98-20.077 0.0790 10.26%H99-10.078 H99-20.077 0.0775 9.93%H100-10.084 H100-20.083 0.0835 11.23%H101-10.088 H101-20.095 0.0915 12.97%H102-10.089 H102-20.087 0.0880 12.21%H103-10.087 H103-20.086 0.0865 11.89%H104-10.072 H104-20.073 0.0725 8.84%H105-10.078 H105-20.077 0.0775 9.93%H106-10.085 H106-20.090 0.0875 12.10%H107-10.083 H107-20.089 0.0860 11.78%H108-10.087 H108-20.083 0.0850 11.56%H109-10.066 H109-20.072 0.0690 8.08%H110-10.077 H110-20.077 0.0770 9.82%H111-10.085 H111-20.078 0.0815 10.80%H112-10.079 H112-20.081 0.0800 10.47%H113-10.078 H113-20.086 0.0820 10.91%H114-10.086 H114-20.082 0.0840 11.34%H125-10.115 H125-20.120 0.1175 18.62%华B亲本H126-10.082 H126-20.086 0.0840 11.34%桂99亲本H140-10.042 H140-20.041 0.0415 2.11%荆香糯H141-10.041 H141-20.041 0.0410 2.00%荆香糯标准一-10.150 标准一-20.156 0.2640 15.30%标准二-10.117 标准二-20.118 0.1850 11.75%标准四-10.040 标准四-20.038 0.0160 3.90%吸光度0.153 0.11750.039 淀粉含量0.264 18.50%0.016 附件六2%琼脂糖凝胶电泳 亲本 H91 样品 H76-H808%的聚丙烯酰胺凝胶电泳 484/485引物