消毒剂消毒效果的验证报告

1 / 39 下载文档可编辑 消毒剂消毒效果的验证 组长：* 组员：* * * * * * * * * 编号： 2 版次： 2014 年 第 1 版 目录目录 1 1概述概述.3 3 1.1 消毒剂 .3 1.2 消毒剂使用说明 .3 2 2验证目的验证目的.3 3 3 3验证内容验证内容.4 4 4 4验证组织验证组织.4 4 4.1 验证小组 .4 4.2 验证委员会 .4 5 5验证实施步骤验证实施步骤.5 5 5.1 验证前准备 .5 5.2 验证所需文件资料 .5 2 / 39 下载文档可编辑 5.3 悬液法定量杀灭试验 .6 5.4 对裸手消毒效果试验 .7 5.5 消毒剂对佩戴手套后的消毒效果验证 .9 5.6 消毒剂对物体表面消毒效果验证 .11 5.7 消毒剂消毒效果验证结论 .15 6 6验证主要依据验证主要依据.1515 7 7验证合格标准验证合格标准.1515 7.1 判断标准 .15 7.2 现场考察试验合格标准 .15 8.8. 再验证周期再验证周期.1515 附录附录.1616 附录一 验证方案会审记录 .16 附录二 验证方案修改申请及批准书 .17 附录三 漏项和偏差处理记录 .18 附录四 悬液法定量杀灭试验记录 .19 附录五 消毒剂对佩戴手套后人员手现场试验记录 .22 1 1概述概述 1.1 消毒剂 消毒剂的作用原理：破坏细胞膜类，阻断细胞食物摄取和废物 排泄，钝化关键酶。以下是几种常用的消毒剂： （1）新洁尔灭(苯扎溴铵)：是一种常用的季铵盐类消毒剂，在 3 / 39 下载文档可编辑 浓度较低时即可有抑菌的作用；当浓度较高时，可以杀灭多种细菌 繁殖体和部分的病毒，但是不能杀灭细菌芽孢，属于低效消毒剂。 （2）75%乙醇：适用于一般物体表面消毒以及手和皮肤的消毒， 它无法杀灭细菌芽孢和病毒。 （3）优洁：属于长效、强效、广谱杀菌剂，是一种新型消毒剂， 其有效成分为复合季铵盐和六亚甲基四胺，可有效快速地杀灭细菌 繁殖体、芽孢、真菌和部分病毒等，各种微生物对其均无抗药性， 抑菌时间较长，可用于一般物体表面消毒，稳定性好，无腐蚀性， 无毒无害，并且由于杀菌时不受蛋白质及有机物的干扰，故使用衰 减周期长，可循环使用，相对使用成本低。 本次验证以优洁消毒剂的杀灭效果为主，同时也可根据此验证 方案对 75%乙醇、新洁尔灭等消毒剂的杀灭效果进行评价。 1.2 消毒剂使用说明 对于不同的消毒对象，应使用不同的消毒剂，并制订消毒程序， 消毒程序中应明确规定： （1）消毒剂的浓度及配制方法； （2）消毒剂使用的条件； （3）消毒使用的设备、设施； （4）消毒操作的详细步骤； （5）消毒周期； （5）消毒效果的监测方法。 制订的消毒程序的消毒效果应经过验证后，才能批准使用。 本验证具体规定了评价消毒剂消毒效力的生物学检测方法及其 4 / 39 下载文档可编辑 效果评价方法。 2 2验证目的验证目的 药品在生产过程中会遭到来自微生物的污染，因此必须要采取 一定措施使微生物污染处于受控状态或者完全被消除，这就需要对 消毒剂消毒效果进行验证以确定相应的方案来处理这些问题。在对 消毒剂进行消毒效果验证的过程中，主要是要用特定的微生物与消 毒剂在规定的使用浓度下接触规定的时间后，对微生物进行培养计 数，考察该消毒剂的消毒效果，确定消毒剂消毒后的最长有效时间， 并对消毒剂对微生物的杀灭效果进行评价。 确认洁净区按照规定的清洁、消毒程序进行清洁消毒后，能够 达到防止交叉污染的目的，并在消毒有效期内能确保达到生产工艺 所需要的效果。 本次验证以优洁消毒剂的杀灭效果为主，同时也可根据此验证 方案对75%乙醇、新洁尔灭等消毒剂的杀灭效果进行评价。 3 3验证内容验证内容 消毒剂消毒效果验证包括两项考察：实验室考察和现场考察。 实验室考察通常以悬液定量法为主，且试验须重复3次，而现场考察 可用来评估消毒剂对相应设施的实际消毒效果。 在消毒剂消毒效果试验中，消毒方法和消毒对象有很多。常用 的方法有：喷洒法，浸泡法，擦拭法等。常见的对象有：皮肤，洁 净区的地面、墙面，设备表面等。此次试验我们采用的消毒方法为 喷洒法，消毒对象为人员裸手皮肤、人员佩戴无菌手套后的手套表 5 / 39 下载文档可编辑 面和物体表面。 根据消毒对象所制定相应的试验方案有：悬液法定量杀灭试验、 消毒剂对裸手消毒现场试验、载体喷雾定量杀菌试验、消毒剂对佩 戴手套后的手消毒现场试验以及消毒剂对物体表面现场鉴定试验。 通过以上几种试验来对消毒剂消毒的效果进行验证。 4 4验证组织验证组织 4.1 验证小组 表表 4-14-1 验证小组及职责验证小组及职责 人人 员员 部部 门门 职职 务务职职 责责 组 长 质保 部 部门负 责人 （1）负责成立验证小组，明确各验证成员 职责 （2）负责组织起草验证方案、验证记录和 验证报告 （3）负责验证方案、验证记录和验证报告 的审核工作 验证管 理员 （1）负责起草验证方案 （2）负责对试验结果进行统计分析 （3）负责起草验证报告 质保 部 质保员 （1）负责现场取样 （2）负责验证过程在线监督 组 员 质检部门经（1）负责组织对样品的检验 6 / 39 下载文档可编辑 部理（2）负责验证所需试剂、试液等的准备。 质检 部 质检员 （1）负责样品的检验 （2）负责检验数据的收集、整理。 部门经 理 负责组织现场操作，确保验证按进度进行。 卫生员负责消毒液的配制和发放。生产 部各工序 操作人 员 （1）负责洁净厂房的清洁 （2）负责按消毒程序进行消毒。 设备 部 部门经 理 （1）负责仪器、仪表、量具的校正 （2）负责验证所用仪器、设备的安装、调 试，并做好相应的记录 （3）负责纯化水的供给。 4.2 验证委员会 4.2.1人员组成：由企业质量副总、生产副总及生产部、质量保证部、 质量检验部、设备动力部经理或主管组成。 4.2.2职责： 负责验证方案的审批； 负责验证的协调工作，以保证验证方案的顺利实施； 负责验证数据及结果的审核； 负责验证报告的审核； 负责确定该项验证的再验证周期； 7 / 39 下载文档可编辑 负责验证证书的发放。 5 5验证实施步骤验证实施步骤 5.1 验证前准备 在进行消毒剂消毒效果验证前，洁净厂房空气净化系统应经验 证合格并正常运行，设备动力部应提供洁净厂房空气净化系统的验 证报告、空气净化系统操作程序；与验证相关的各种设备、仪器均 需通过相应验证，所需仪表、计量器具均需校验合格并具备校验证 书。 5.2 验证所需文件资料 表表5-15-1 验证所需的文件资料及存放处验证所需的文件资料及存放处 资料名称资料名称编号编号存放处存放处 活菌数检测操作规程 ZL-03-066 GMP 办公室 菌落计数操作规程 ZL-03-070 GMP 办公室 培养基配制操作规程 ZL-03-073 GMP 办公室 培养基配制、使用管理规 程 ZL-03-110 GMP 办公室 消毒剂配制操作规程 WS-04-029 GMP 办公室 消毒剂的使用操作规程 WS-04-030 GMP 办公室 致病菌阳性菌株传代操作 规程 ZL-03-075 GMP 办公室 实验器具清洗操作规程 ZL-03-087 GMP 办公室 实验器具灭菌、消毒及使 ZL-03-088 GMP 办公室 8 / 39 下载文档可编辑 用操作规程 进出微生物限度实验室操 作规程 ZL-03-259 GMP 办公室 CHK 型显微镜操作规程 SB-03-153 GMP 办公室 厌氧罐操作规程 SB-03-156 GMP 办公室 MS1 型振荡器操作规程 SB-03-381 GMP 办公室 BL610 型电子天平操作规程 SB-03-324 GMP 办公室 SKP-02B 型电热恒温箱操作 规程 SB-03-375 GMP 办公室 SKP-02B 型电热恒温箱清洁 规程 SB-03-376 GMP 办公室 微生物实验室清场操作规 程 ZL-03-064 GMP 办公室 破伤风杆菌检测操作规程 ZL-03-220 GMP 办公室 DELTA-320PH 计操作规程 SB-03-234 GMP 办公室 致病菌阳性菌管理规程 ZL-03-112 GMP 办公室 微波炉的操作规程 SB-03-177 GMP 办公室 洁净区情场操作规程 ZL-03-112 GMP 办公室 设备清洁操作规程 SB-03-187 GMP 办公室 5.3 悬液法定量杀灭试验 5.3.1 试验所需要用的试剂 中和剂：0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S） 9 / 39 下载文档可编辑 活菌计数用培养基：TSA培养基 稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS 0.03mol/L 消毒剂配制用水：纯化水 有机干扰物质 5.3.2 试验所需要用的仪器 移液器、电动混匀器、计时器、生化培养箱 5.3.3 试验所需要用的菌种 可根据消毒技术规范2008年版4“细菌定量杀灭试验”中 指导，本次试验选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、 白色念珠菌、黑曲霉。再增加车间常见的菌：洋葱伯克霍尔德菌。 5.3.4 试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间 根据优洁消毒液说明书建议浓度为1%-3%，作用时间为1-2min， 但根据厂家验证报告0.1%及0.2%的浓度作用5min和15min也能符合规 定，因此本次试验浓度选择0.2%，作用时间选择2.5min、5min以及 7.5min的条件进行确认，又因车间裸手消毒作用时间可能只有30s， 故本次试验同时对0.2%消毒剂作用15s、30s以及45s的条件进行确认。 5.3.5 试验所需要用到的场所 微生物实验室阳性间 5.3.6 悬液定量杀菌试验操作程序 （1）菌悬液：浓度为1108cfu/ml-5108cfu/ml （2）消毒液的配制：用纯化水按体积比配制浓度为0.2%的消毒 液500ml 10 / 39 下载文档可编辑 （3）磷酸盐缓冲液的配制：磷酸盐缓冲液（PBS 0.03mol/L） 称取无水磷酸氢二钠2.83g、磷酸二氢钾1.36g加入到1000ml蒸馏水 中，待完全溶解后，调PH至7.2-7.4，灭菌后使用。 （4）有机干扰物质的配制：按30g牛血清白蛋白中加入1000ml 蒸馏水的比例配制约100ml，溶解后用0.45um的无菌滤膜进行过滤除 菌后使用，未用完的可于2-8冰箱中保存。 （5）试验过程（以浓度为0.2%优洁消毒剂对金黄色葡萄球菌作 用2.5min为例） 试验组：取无菌大试管加入0.5ml金黄色葡萄球菌菌悬液，再加 入0.5ml的有机干扰物质，分别用无菌吸管吸取0.2%的优洁消毒液 4.0ml，加入试管中，迅速混匀并立即计时。待金黄色葡萄球菌与 0.2%的优洁消毒液相互作用2.5min时，吸取0.5ml试验菌与消毒剂的 混合液，加于4.5ml经灭菌的0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中，混 匀。金黄色葡萄球菌与消毒剂混合液经硫代硫酸钠-生理盐水溶液作 用10min后，吸取1.0ml样液，按活菌培养计数测定方法测定存活菌 数，每管样液接种2个平皿即可。如果菌液浓度较高时，可进行10倍 系列稀释后，在进行活菌培养计数，作为试验组，其计数结果为 CX。 阳性对照组：用4.0ml磷酸盐缓冲液代替4.0ml0.2%的优洁消毒 液与0.5ml金黄色葡萄球菌菌悬液、0.5ml有机干扰物质混合2.5min 后，取0.5ml混合液与4.5ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液反应，作 用10min后。计数方法同试验组，计数结果为C0。 阴性对照组：吸取此次试验用的纯化水0.5ml、0.5ml有机干扰 11 / 39 下载文档可编辑 物质、4.0ml磷酸盐缓冲液混匀，混匀后取0.5ml混合液与4.5ml0.1M 硫代硫酸钠-生理盐水溶液作用10min后，吸取1.0ml混合液，按活菌 培养计数测定方法测定存活菌数，作为阴性对照。 培养：所有用细菌试验的样品均放入30-35培养箱中培养，培 养48小时观察结果；用真菌试验的样品放入23-28培养箱中培养， 培养72小时观察结果。 5.3.7 试验要求 作用于不同试验菌不同作用时间后的消毒效果试验均须进行3次， 每次进行时应注意所用的试剂等物品均应重新配制，防止系统误差 的发生。 5.3.8 活菌计数结果应换算为对数值（N） 按计算公式杀灭对数值KL=阳性对照组平均浓度对数值（N0）- 试验组活菌浓度对数值（NX） 。计算杀灭对数值的时候，取小数点后 两位值，可以进行数字修约。如果消毒试验组消毒处理后平均生产 菌落数小于等于1时，其杀灭对数值，即大于等于试验前对照组平均 活菌浓度的对数值。 5.3.9 判断标准 阴性对照应无菌生长；细菌各次试验的杀灭对数值均应 5.00，可判断为对细菌消毒合格；真菌各次试验的杀灭对数值为 4.00，可判定该产品对真菌污染物消毒合格。 5.3.10 试验记录 附件四附件四 悬液法定量杀灭试验记录悬液法定量杀灭试验记录 第一次第一次 表表5-25-2 第二次第二次 表表5-35-3 12 / 39 下载文档可编辑 第三次第三次 表表5-45-4 5.3.11 试验结 作用于不同试验菌不同作用时间后的消毒效果试验进行了3次， 且每次试验结果均符合标准，所以判定0.2%优洁消毒剂通过悬液定 量杀灭试验，对细菌、真菌消毒合格。 5.4 对裸手消毒效果试验 5.4.1 试验所需要用的试剂 Rodac 碟培养基平板 5.4.2 试验所需要用的仪器 计时器、生化培养箱 5.4.3 试验所需要用的消毒液 浓度为0.2%的优洁消毒剂作用0.5min 5.4.4 试验所需要用到的场所 抗肿瘤粉针车间 5.4.5 试验的操作程序 从车间抽取6名生产人员，均按照标准洗手操作规程进行洗手， 将手烘干，用0.2%的优洁消毒剂对双手进行喷洒消毒，自然晾干， 于消毒后的0.5min将一手五指尖在Rodac平板上按压取样，于30- 35培养箱中培养三天，观察最终结果。 5.4.6 试验的判断标准 在消毒剂作用0.5min后6份样品的菌落数均须5cfu/皿，可判 为合格，本次试验应重复进行三次，用来判断该方法是否稳定。 5.4.7 试验记录 13 / 39 下载文档可编辑 表表5-55-5 对裸手消毒效果试验第一次试验记录对裸手消毒效果试验第一次试验记录 培养时间（培养时间（cfu/cfu/皿）皿）试验人试验人 员员第一天第一天第二天第二天第三天第三天 可接受标准可接受标准 （cfu/cfu/皿）皿） 结果判结果判 断断 80010295 不合格 8002039395 不合格 80030135 合格 8004040405 不合格 8005016145 不合格 80060245 合格 QA 左手 0000 合格 QA 右手 0000 合格 表表5-65-6 对裸手消毒效果试验第二次试验记录对裸手消毒效果试验第二次试验记录 培养时间（培养时间（cfu/cfu/皿）皿）试验人试验人 员员第一天第一天第二天第二天第三天第三天 可接受标准可接受标准 （cfu/cfu/皿）皿） 结果判结果判 断断 8001033315 不合格 80020865 不合格 800301001055 不合格 8004055515 不合格 8005033365 不合格 80060435 合格 QA 左手 0000 合格 QA 右手 0000 合格 14 / 39 下载文档可编辑 表表5-75-7 对裸手消毒效果试验第三次试验记录对裸手消毒效果试验第三次试验记录 培养时间（培养时间（cfu/cfu/皿）皿）试验人试验人 员员第一天第一天第二天第二天第三天第三天 可接受标准可接受标准 （cfu/cfu/皿）皿） 结果判结果判 断断 800101071055 不合格 8002060605 不合格 80030455 合格 8004063615 不合格 8005036365 不合格 8006028325 不合格 QA 左手 0000 合格 QA 右手 0000 合格 5.4.8 试验结论 对车间人员进行了三次（每次6名）裸手消毒试验，试验结果显 示基本不符合标准，因此判定0.2%浓度优洁消毒剂对人员裸手消毒 0.5min试验不合格。 5.5 消毒剂对佩戴手套后的消毒效果验证 5.5.1 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验 （1）试验所需要用的试剂 中和剂：0.1M 硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S） ； 活菌计数用培养基：TSA 培养基； 稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS0.03mol/L） ； 消毒剂配制用水：纯化水 15 / 39 下载文档可编辑 （2）试验所需要用的仪器 刻度吸管、数字可调移液器、电动混匀器、计时器、培养箱、 无菌手套及无菌剪刀 （3）试验所需要用的菌种 本次试验主要是验证该消毒剂对手部微生物的消毒效果，故选 择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌作为试验菌。 （4）试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间 浓度为0.2%优洁消毒剂作用0.5min （5）试验所需要用到的场所 微生物实验室阳性间 （6）试验的操作步骤 菌悬液：浓度为1108cfu/ml-5108cfu/ml 消毒液：用纯化水按体积比配制浓度为0.2%的消毒液500ml 稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS0.03mol/L） 试验组:取无菌剪刀从无菌手套上剪取三个手指样品，大小为 10mm10mm以三角形阵列，均匀排布于一块未沾有任何消毒剂的无 菌平皿内，逐片滴加10d的金黄色葡萄球菌，必要时用无菌接种环涂 布均匀。使制备后样品上的菌片浓度在5105cfu/片-5106cfu/片， 用0.2%的优洁消毒剂对制备好含有金黄色葡萄球菌的样本进行均匀 喷雾，喷雾的距离约为10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数 量一致。喷雾量以不使样本湿透、流液为度，计时。待金黄色葡萄 球菌与消毒剂相互作用至0.5min，取出样本1片，放入一含有 5.0ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液的无菌试管中。将试管用电动 16 / 39 下载文档可编辑 混匀器混合20s，使菌片上的细菌被洗脱进入0.1M硫代硫酸钠-生理 盐水溶液中。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数法测定存活菌数， 每管接种2个平皿。 阳性对照组：取无菌剪刀从无菌手套上剪取3个大小为 10mm10mm的手指样品，均匀排布于一块未沾有任何消毒剂的无菌 平皿内，用制备好的符合菌液浓度的金黄色葡萄球菌滴加进去，必 要时用涂布棒涂布均匀。用磷酸盐缓冲液代替0.2%的优洁消毒剂对 制备好的金黄色葡萄球菌的样本进行均匀喷雾，喷雾的距离约为 10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数量一致。喷雾量以不使 样本湿透、流液为度，计时。待金黄色葡萄球菌与磷酸盐缓冲液相 互作用至0.5min，取出样本1片，放入一含有5.0ml0.1M硫代硫酸钠- 生理盐水溶液的无菌试管中。将试管用电动混匀器混合20s，使菌片 上细菌被洗脱进入0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中。吸取1.0ml上 述洗液，按活菌培养计数法测定存活菌数，每管接种2个平皿。 阴性对照组：取无菌剪刀从同批无菌手套上剪取三个手指样品， 大小为10mm10mm均匀排布于一块未沾有任何消毒剂的无菌平皿内 用。用纯化水代替0.2%的优洁消毒剂对手套样本进行均匀喷雾，喷 雾的距离约为10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数量一致。 喷雾量以不使样本湿透、流液为度，计时。0.5min后取出样本一片， 放入一含5.0ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液的无菌试管中。将试 管用电动混匀器混合20s。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数方 法测定存活菌数，每管接种2个平皿，作为阴性对照。 培养：所有细菌试验用样本均在30-35培养箱中培养，培养至 17 / 39 下载文档可编辑 48h，观察最终结果；真菌试验用样本在23-28培养箱中培养，培 养至72h，观察最终结果。 （7）试验要求及计算 试验重复3次，计算各组的活菌数（cfu/片） ，并换算为对数值 （N） ，然后按计算公式杀灭对数值KL=阳性对照组平均浓度的对数值 （N0）-试验组活菌浓度的对数值（NX） （8）试验的判断标准 阴性对照组应无菌生长，消毒剂作用于各菌的不同作用时间的 杀灭对数值3.00，即判定结果合格。 （9）试验的记录 表表5-85-8 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第一次试验记录无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第一次试验记录 验证菌种验证菌种 C C0 0(cfu(cfu / /片片) ) N N0 0 C CX X(cfu(cfu / /片片) ) N NX X KL(NKL(N0 0- - N NX X) ) 接受标接受标 准准 结果结果 判断判断 金黄色葡 萄球菌 5.8 105 5.7 6 005.763.00 合格 大肠埃希 菌 1.1 106 6.0 4 22 1.3 4 4.703.00 合格 白色念珠 菌 5.4 104 4.7 3 004.733.00 合格 表表5-95-9 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第二次试验记录无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第二次试验记录 验证菌种验证菌种 C C0 0 (cfu/(cfu/ N N0 0 C CX X(cfu(cfu / /片片) ) N NX X KL(NKL(N0 0- - N NX X) ) 接受标接受标 准准 结果结果 判断判断 18 / 39 下载文档可编辑 片片) ) 金黄色葡萄 球菌 5.8 105 5.7 6 005.763.00 合格 大肠埃希菌 1.1 106 6.0 4 11 1.0 4 5.003.00 合格 白色念珠菌 5.4 104 4.7 3 004.733.00 合格 表表5-105-10 无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第三次试验记录无菌手套载体喷雾定量杀菌试验第三次试验记录 验证菌种验证菌种 C C0 0(cfu(cfu / /片片) ) N N0 0 C CX X(cfu(cfu / /片片) ) N NX X KL(NKL(N0 0- - N NX X) ) 接受接受 标准标准 结果判结果判 断断 金黄色葡萄 球菌 6.21 04 4.7 9 004.79 3.0 0 合格 大肠埃希菌 2.01 05 5.3 0 12 1.0 8 4.22 3.0 0 合格 白色念珠菌 2.71 04 4.4 3 004.43 3.0 0 合格 （10）试验的结论 浓度为0.2%优洁消毒剂，三次对无菌手套载体喷雾定量杀菌试 验均符合标准，判定手套载体喷雾定量杀菌试验合格。 5.5.2 消毒剂对佩戴手套后人员手现场消毒试验 （1）试验所需要用的试剂 Rodac 碟培养基平板 19 / 39 下载文档可编辑 （2）试验所需要用的仪器 计时器、生化培养箱 （3）试验所需要用的消毒液的浓度及取样时间 取5.5.1中符合规定的消毒剂浓度对人员手套消毒后 0.5min、15min、35min分别取样 （4）试验所需要用到的场所 抗肿瘤分针车间或普通分针车间 （5）试验的操作步骤 从车间抽取12名生产人员，分别在A级区安排6名，B级区安排6 名。各自按照标准洗手操作规程进行洗手，将手烘干。用试验浓度 的优洁消毒剂对双手进行喷洒消毒，自然晾干，分别于消毒后 0.5min、15min、35min将五指手指尖在Rodac平板上按压取样，取样 后于30-35培养箱中培养三天，观察最终结果（0.5min取样后生产 人员对双手重新进行消毒，之后应尽量模拟生产时的动作进行手部 活动。15min取样后无需重新消毒） （6）试验的判断标准 在消毒剂作用不同时间后的菌落数的合格标准见下表5-11，每 个时间段的6份样品必须全部符合标准，才可判断合格，本次试验应 重复进行三次，用来判断该方法是否稳定。 表表5-115-11 菌落数的合格标准菌落数的合格标准 洁净度级别洁净度级别5 5 指手套指手套 A 104cfu/ml）涂 抹于不锈钢设备表面、地面、墙面及呼吸袋，选择回收率较高的载 体作为物体表面消毒效果试验室部分的试验载体。判断标准：回收 菌液浓度：103cfu/ml。 （1）试验所需要用的试剂 中和剂：0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S） 活菌计数用培养基：TSA培养基 消毒剂配制用水：纯化水 （2）试验所需要用的仪器 刻度吸管、移液器、电动混匀器、计时器、培养箱、规格板 （用不锈钢材料制备，中央留一5.0cm5.0cm的空格作为采样部位） 、 21 / 39 下载文档可编辑 无菌棉签、无菌接种环 （3）试验所需要用的菌种 本次试验主要是验证该消毒剂对物体表面微生物的消毒效果， 故选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌作为试验菌 （4）试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间 0.2%的优洁消毒液作用30s （5）试验所需要用到的场所 微生物实验室阳性间 （6）试验的操作步骤（以浓度为0.2%的消毒剂对金黄色葡萄球菌作 用30s为例） 菌悬液：浓度为5105cfu/ml-5106cfu/ml 试验组：取大小合适的无菌呼吸袋作为试验样本，将无菌规格 板按压在样本上，用无菌棉签沾以菌悬液均匀涂抹被试验表面的6区 块（各区块25cm2） 。用0.2%的消毒剂对三个区块表面进行喷雾消毒， 喷雾的距离约为10cm，以尽量使喷到样本上的雾粒大小和数量一致， 消毒后，将无菌棉签在5ml的中和剂试管中沾湿，分别对3个消毒区 块进行涂抹采样，每区块横竖往返各8次。采样后以无菌操作方式将 棉签剪入原中和剂试管中，电动混匀器上混匀20s，吸取1.0ml上述 洗液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管接种2个平皿，作为 试验组，必要时进行稀释。 阳性对照组：从6个区块中选取其他3个区块，用磷酸盐缓冲液 代替消毒剂对三个区块表面同法操作，之后将无菌棉签在5ml的中和 剂试管中沾湿，分别对3个区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各8 22 / 39 下载文档可编辑 次。采样后以无菌操作方式将棉签剪入原中和剂中，电动混匀器上 混匀20s，吸取1.0ml上述洗液，按活菌培养计数法测定存活菌数， 每管接种2个平皿，作为阳性对照组，必要时进行稀释。 阴性对照组：用一只棉签，分别蘸取同批纯化水，以无菌方式 将棉签采样端剪入0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中，在混匀器上震 荡20s，做适当稀释后，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管接 种2个平皿，作为阴性对照。 培养：所有试验样本均在30-35培养箱中培养，培养48h观察 最终结果。 （7）试验要求及计算 试验须重复三次，计算各组的活菌数（cfu/片） ，并换算为对数 值（N） ，然后按计算公式杀灭对数值KL=对照组平均浓度的对数值 （N0）-试验组活菌浓度对数值（NX） （8）试验的判断标准 阴性对照组应无菌生长，阳性对照组菌数符合要求，所有样本 的杀灭对数值均3.00，即判定结果合格。 （9）试验的记录 表表5-145-14 消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第一次试验记录消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第一次试验记录 验证菌种验证菌种 C C0 0(cfu(cfu / /片片) ) N N0 0 C CX X(cfu(cfu / /片片) ) N NX X KL(NKL(N0 0- - N NX X) ) 可接受可接受 标准标准 结果判结果判 断断 金黄色葡 萄球菌 8.11 05 5. 91 12 1.0 8 4.833.00 合格 23 / 39 下载文档可编辑 大肠埃希 菌 8.41 05 5. 92 005.923.00 合格 表表5-155-15 消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第二次试验记录消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第二次试验记录 验证菌种验证菌种 C C0 0(cfu(cfu / /片片) ) N N0 0 C CX X(cfu(cfu / /片片) ) N NX X KL(NKL(N0 0- - N NX X) ) 可接受可接受 标准标准 结果判结果判 断断 金黄色葡 萄球菌 8.21 05 5. 91 105.913.00 合格 大肠埃希 菌 7.91 05 5. 88 45 1.6 5 4.233.00 合格 表表5-165-16 消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第三次试验记录消毒剂对物体表面模拟现场鉴定试验第三次试验记录 验证菌种验证菌种 C C0 0(cfu(cfu / /片片) ) N N0 0 C CX X (cfu/(cfu/ 片片) ) N NX X KL(NKL(N0 0- - N NX X) ) 可接受可接受 标准标准 结果判结果判 断断 金黄色葡 萄球菌 3.21 05 5. 51 005.513.00 合格 大肠埃希 菌 4.81 05 5. 68 33 1.5 2 4.163.00 合格 （10）试验结论 浓度为0.2%优洁消毒剂三次物体表面模拟现场鉴定试验（作用 0.5min）均符合标准，故判定合格。 5.6.2 消毒剂对物体表面消毒现场鉴定试验 24 / 39 下载文档可编辑 （1）试验所需要用的试剂 Rodac 碟培养基平板、无菌生理盐水、TSA培养基、纯化水 （2）试验所需要用的仪器 计时器、培养箱； （3）试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间 0.2%的优洁消毒剂作用0.5min （4）试验所需要用到的场所 抗肿瘤粉针车间 （5）试验操作的步骤（以彩钢板为例） 选择抗肿瘤粉针车间的洁净区表面的彩钢板，选择不易清洁的 部位，取一块洁净区医用无菌抹布，用试验浓度的消毒剂，对其表 面进行喷洒消毒（按车间消毒规程进行） 。消毒后，使用Rodac碟进 行取样（对于消毒后的不同时间的采样，应于首次采样的部位比较 接近） 培养：所有试验样本均在30-35培养箱中培养，培养三天观察 最终结果。 （6）试验的判断标准 不同级别区域内的不同消毒对象，每次采样三个点，本次试验 重复进行3次，结果与下表进行对比，见表5-11。 表表5-175-17 菌落数的合格标准菌落数的合格标准 洁净级别洁净级别 表面菌落数（非表面菌落数（非 地面）地面） 表面菌落数（地表面菌落数（地 面）面） 设备表面标准设备表面标准 25 / 39 下载文档可编辑 A 级3cfu/皿5cfu/皿1cfu/皿 B 级5 cfu/皿5 cfu/皿5 cfu/皿 C 级25 cfu/皿25 cfu/皿25 cfu/皿 D 级50 cfu/皿50 cfu/皿50 cfu/皿 （7）试验结果的记录 表表5-185-18 消毒剂对表面消毒现场鉴定试验第一次试验记录消毒剂对表面消毒现场鉴定试验第一次试验记录 培养时间采样区域采样区域 及象及象 取样点取样点 第一天第二天第三天 判断标 准 结果判结果判 断断 取样点 1 000 合格 取样点 2 000 合格 （A）级 面 取样点 3 000 3 合格 取样点 1 002 合格 取样点 2 001 合格 （A）级 地面 取样点 3 000 5 合格 取样点 1 000 合格 取样点 2 000 合格 （A）级 设备 取样点 3 000 1 合格 取样点 1 000 合格 取样点 2 000 合格 （B）级 墙面 取样点 3 000 5 合格 取样点 1 002 合格（B）级 地面取样点 2 001 5 合格 26 / 39 下载文档可编辑 取样点 3 001 合格 取样点 1 000 合格 取样点 2 010 合格 （B）级 设备 取样点 3 000 5 合格 取样点 1 101 合格 取样点 2 110 合格 (C)级墙 面 取样点 3 011 25 合格 取样点 1 101 合格 取样点 2 01414 合格 (C)级地 面 取样点 3 01414 25 合格 取样点 1 100 合格 取样点 2 110 合格 (C)级设 备 取样点 3 023 25 合格 取样点 1 333 合格 取样点 2 010 合格 (D)级墙 面 取样点 3 000 50 合格 取样点 1 000 合格 取样点 2 010 合格 (D)级地 面 取样点 3 000 50 合格 取样点 1 000 合格 取样点 2 100 合格 (D)级清 洗 取样点 3 000 50 合格 由于第二次、第三次试验结果相同，均合格，故此处略去表格。 27 / 39 下载文档可编辑 （8）试验的结论 浓度为0.2%优洁消毒剂对物体表面消毒（作用0.5min）现场鉴 定试验共进行三次，结果均符合规定。 5.7 消毒剂消毒效果验证结论 经过本次确认，浓度为0.2%浓度优洁消毒剂可用于车间无菌手 套表面和物体表面消毒（作用0.5min） ，0.2%优洁消毒剂作用0.5min 不可用作人员裸手消毒。 6.6. 验证主要依据验证主要依据 6.1药品生产验证指南（2003年版） 6.2消毒技术规范（2008年版） 6.3中国药典（2010年版） 7.7. 验证合格标准验证合格标准 7.1 判断标准 在试验结束后，通过判定标准来确定是否合格，判定标准是： 在悬液定量杀灭试验中，细菌各次试验的杀灭对数值均应5.00时， 可判定细菌消毒合格；真菌各次试验的杀灭对数值均应4.00，可 判定真菌污染物消毒合格；在载体定量杀灭试验中，各次试验的杀 灭对数值均3.00，可判定消毒合格。 7.2 现场考察试验合格标准 表表7-17-1 菌落数的合格标准菌落数的合格标准 洁净级别洁净级别表面菌落数（非表面菌落数（非表面菌落数表面菌落数设备表面标准设备表面标准 28 / 39 下载文档可编辑 地面）地面）（地面）（地面） A级3cfu/皿5cfu/皿1cfu/皿 B级5 cfu/皿5 cfu/皿5 cfu/皿 C级25 cfu/皿25 cfu/皿25 cfu/皿 D级50 cfu/皿50 cfu/皿50 cfu/皿 8.8. 再验证周期再验证周期 8.1当消毒剂的使用浓度和清洁消毒程序发生变更时应进行再验证。 8.2当环境中出现新类型的微生物时，应以该微生物为挑战菌进行再 验证。 8.3当有新的消毒剂被使用时应进行验证。 附录附录 附录一 验证方案会审记录 会审日期：_年_月_日 验证方案名称 验证方案编号 姓 名部 门职 务会审意见修改内容 质量副总同意 不同意 生产副总同意 不同意 29 / 39 下载文档可编辑 质保部 部门负责 人 同意 不同意 质保部质保员同意 不同意 质检部部门主管同意 不同意 生产二部部门经理同意 不同意 设备部部门经理同意 不同意 附录二 验证方案修改申请及批准书 验证方案名称 验证方案编号 修改内容 修改原因及依据 30 / 39 下载文档可编辑 修改后方案 起草人_部门经理_ 年 月 日 验证委员会审批 验证委员会： 年 月 日 附录三 漏项和偏差处理记录 验证方案名称 验证方案编号 漏项和偏差内容 漏项和偏差原因 31 / 39 下载文档可编辑 漏项和偏差修改后内容 验证委员会审批 附录四 悬液法定量杀灭试验记录 表表5-25-2 悬液法定量杀灭试验第一次试验记录悬液法定量杀灭试验第一次试验记录 验证验证 菌种菌种 作用时作用时 间间 C C0 0(cfu/(cfu/ ml)ml) N N0 0 Cx(cfu/Cx(cfu/ ml)ml) NxNx KL(NKL(N0 0- - Nx)Nx) 接受标接受标 准准 判断标判断标 准准 15s006.43 合格 30s006.43 合格 45s006.43 合格 2.5min006.43 合格 5min006.43 合格 金黄 色 葡萄 球菌 7.5min 2.710 6 6.4 3 006.43 5.00 合格 15s006.67 合格 30s006.67 合格 45s006.67 合格 大肠 埃希 菌 2.5min 4.710 6 6.6 7006.67 5.00 合格 32 / 39 下载文档可编辑 5min006.67 合格 7.5min006.67 合格 15s106.49 合格 30s30 1.4 8 5.01 合格 45s2 0.3 0 6.19 合格 2.5min006.49 合格 5min006.49 合格 铜绿 假单 胞菌 7.5min 3.1 106 6.4 9 006.49 5.00 合格 15s006.57 合格 30s006.57 合格 45s006.57 合格 2.5min006.57 合格 5min006.57 合格 洋葱 伯克 霍尔 德菌 7.5min 3.710 6 6.5 7 006.57 5.00 合格 15s005.45 合格 30s005.45 合格 45s005.45 合格 2.5min005.45 合格 5min005.45 合格 白色 念珠 菌 7.5min 2.810 5 5.4 5 005.45 4.00 合格 15s004.34 合格 33 / 39 下载文档可编辑 表表5-35-3 悬液法定量杀灭试验第一次试验记录悬液法定量杀灭试验第一次试验记录 验证菌验证菌 种种 作用时作用时 间间 C C0 0 (cfu/m(cfu/m l)l) N N0 0 Cx(cfu/Cx(cfu/ ml)ml) NxNx KL(NKL(N0 0- - Nx)Nx) 接受标接受标 准准 判断标判断标 准准 15s006.36 合格 30s006.36 合格 45s006.36 合格 2.5min006.36 合格 5min006.36 合格 金黄色 葡萄球 菌 7.5min 2.31 06 6. 36 006.36 5.00 合格 15s006.75 合格 30s006.75 合格 45s006.75 合格 2.5min006.75 合格 大肠 埃希菌 5min 5.61 06 6. 75 006.75 5.00 合格 30s2 0.3 0 4.04 合格 45s004.34 合格 2.5min004.34 合格 5min004.34 合格 霉 7.5min 44 004.34 合格 阴性对照组 00 合格 34 / 39 下载文档可编辑 7.5min006.75 合格 15s006.72 合格 30s006.72 合格 45s006.72 合格 2.5min006.72 合格 5min006.72 合格 铜绿 假单胞 菌 7.5min 5.2 106 6. 72 006.72 5.00 合格 15s006.15 合格 30s006.15 合格 45s006.15 合格 2.5min006.15 合格 5min006.15 合格 洋葱伯 克霍尔 德菌 7.5min 1.41 06 6. 15 006.15 5.00 合格 15s005.32 合格 30s005.32 合格 45s005.32 合格 2.5min005.32 合格 5min005.32 合格 白色 念珠菌 7.5min 2.11 05 5. 32 005.32 4.00 合格 15s004.34 合格 30s2 0.3 0 4.04 合格黑曲霉 45s 2.21 04 4. 34 004.34 4.00 合格 35 / 39 下载文档可编辑 2.5min004.34 合格 5min004.34 合格 7.5min004.34 合格 阴性对照组 00 合格 表表5-45-4 悬液法定量杀灭试验第一次试验记录悬液法定量杀灭试验第一次试验记录 验证验证 菌种菌种 作用时作用时 间间 Co(cfu/Co(cfu/ ml)ml) NoNo Cx(cfu/Cx(cfu/ ml)ml) NxNx KL(No-KL(No- Nx)Nx) 接受标接受标 准准