药物分析08第八章杂环类药物分析

第八章杂环类药物的分析AnalyticalofHeterocyclicdrugs,本章简介,本章介绍五类：1、吡啶类：异烟肼、尼克刹米和硝苯地平2、喹啉类：硫酸奎宁、奎尼丁、盐酸环丙沙星等3、托烷类：硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱等4、吩噻嗪类：氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静和盐酸硫利达嗪等5、苯并二氮杂卓类：地西泮、奥沙西泮和氯氮卓等,杂环化合物：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化合物，其中非碳原子称为杂原子，一般为O、S、N等。在化学合成药中，已成为现代药物中应用最多、最广的一大类。,第一节吡啶类药物,一、典型药物的结构与主要化学性质（一）典型药物的结构,吡啶（pyridine）,异烟肼（isoniazid）,（二）主要化学性质1.弱碱性吡啶环上的氮为碱性氮原子，吡啶环的pKb值为8.8（水中）。尼可刹米除了吡啶上氮外，位上被酰氨基取代。酰氨基化学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。,2还原性异烟肼的吡啶环位上被具有还原性酰肼取代，可被氧化剂氧化，可与含羰基的化合物发生缩合反应。3吡啶环的特性异烟肼和尼可刹米的吡啶环、位未取代，而或位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶环、位被甲酸甲酯所取代，其吡啶环可发生开环反应。,二、鉴别试验,（一）吡啶环的开环反应本反应适用于吡啶环的、位无取代基的异烟肼和尼可刹米。,1.戊烯二醛反应（kning反应）,尼可刹米+溴化氰,H2O,戊烯二醛衍生物,苯胺,黄色,（黄色黄棕色）,2二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）,吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯,紫红色,无水条件,采用本法鉴别异烟肼、尼可刹米时，需适当处理，即将酰肼氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。如异烟肼鉴别：,异烟肼不经处理的反应：,异烟肼+2，4-二硝基氯苯,乙醇,OH-,紫红色,（二）酰肼基团的反应,1还原反应,异烟肼+AgNO3,异烟酸银,+,N2,+,Ag,(白色）,银镜,异烟肼+亚硒酸,硒,（红色）,2缩合反应异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔点，可用以鉴别。ChP和BP均采用本法鉴别.,异烟腙黄色结晶mp为228231,-NH2活性-CH2-,+1，2-萘醌-4-磺酸,OH-,红色,（三）形成沉淀的反应具有吡啶环的结构，可与重金属盐类及苦味酸等试剂形成沉淀。如,尼可刹米+CuSO4+硫氰酸铵,草绿色,尼可刹米异烟肼,+HgCl2,白色,（四）分解产物的反应,使湿润的红色石蕊试纸变蓝,尼可刹米异烟肼,+,无水Na2CO3Ca(OH)2,吡啶臭,尼可刹米+NaOH,二乙胺,（五）紫外吸收光谱特征本类药物的分子结构中均含有芳杂环，在紫外光区有特征吸收，其最大、最小吸收波长及百分吸收系数可供鉴别。本类药物的紫外特征吸收鉴别方法见下表。,本类药物的紫外特征吸收鉴别方法药物溶剂max（nm）min（nm）E1cm1%异烟肼HCl（0.01mol/L）265约420水266234378尼可刹米HCl（0.01mol/L）263285NaOH（0.1mol/L）255840260860硝苯地平无水乙醇333140,（一）异烟肼中游离肼的检查1.TLC法Ch.P中异烟肼及其注射,采用TLC法中杂质对照法。对照品：硫酸肼0.20mg/ml（相当于游离肼50g）薄层板：硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备）展开剂：异丙醇-丙酮（3：2）显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液检测结果：供试品主斑点前方，不得显黄色斑点,三、有关物质检查,BP的检查方法：供试品溶液制备:取异烟肼1.0g，加丙酮-水(1:1)制成10ml.对照溶液制备:取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀释至100ml；量取10ml，加供试品溶液0.2ml，加丙酮-水(1:1)稀释至100ml。薄层板：硅胶GF254薄层板展开剂：醋酸乙酯-丙酮甲醇水(50:20:20:10)显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液,检测结果：于254nm紫外光下检测，供试品中的杂质斑点强度应小于对照溶液中异烟肼色谱斑点；再喷以对-二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下检视，对照溶液中硫酸肼斑点的强度大于供试液中的杂质斑点。,2比浊法JP（14）采用样品中加水杨醛的乙醇溶液观察混浊的方法来控制游离肼的限量。此法专属性差，因异烟肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。,3.差示分光光度法,肼异烟肼,+对-二甲氨基苯甲醛,黄色缩合物对-二甲氨基苯甲醛连氮(max=456nm有最大吸收),形成的缩合产物对-二甲氨基苄叉(于max=456nm波长处无吸收),可在456nm波长处测定并计算二者的差示吸收度A456，同时以对照品比较法计算游离肼含量。,具体测定法：对照品溶液：硫酸肼CR1g/ml5ml+丙酮max=456nm测A1+对-二甲氨基苯甲醛(A456A2A1)AR5mlmax=456nm测A2供试品溶液：异烟肼C2mg/ml游离肼CX=As/ARCR1份+丙酮max=456nm测A1+对-二甲氨基苯甲醛(A456A2A1)As2份max=456nm测A2,(二)尼可刹米中有关杂质检查因有关杂质的化学结构不明，故Ch.p采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。,(三)硝苯地平中有关物质检查硝苯地平遇光分子内部发生光化学歧化作用，降解为4-（2-硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亚硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（B）。其化学结构如下:,具体方法1。供试液和的制备2。有关杂质对照品液和的制备3.色谱条件与灵敏度调节填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：甲醇-水（3：2）；检测波长：235nm。取对照品溶液20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使杂质A和B组分色谱峰的峰高为满量程的20%；杂质A和B组分之间，杂质B与硝苯地平之间的分离度均符合规定。,4.有关物质检测取供试液和对照液各20l，分别进样记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试液如出现与对照液中杂质A和B相对应的峰，其峰面积不得大于对照液中杂质A和B的峰面积；如出现除杂质A和B以外的其他杂质峰，其峰面积不得大于对照液中硝苯地平的峰面积；各杂质总量不得大于0.5%。供试液中小于对照液中硝苯地平峰面积的10%以下的杂质峰忽略不计。,一、基本结构与化学性质（一）典型药物的结构硫酸奎宁硫酸奎尼丁（quininesulfate）(quinidinesulfate),第二节喹啉类药物,盐酸环丙沙星(ciprofloxacinhydrochloride),（二）主要化学性质1.碱性喹啉环上的氮原子具有碱性，与强酸形成稳定的盐。环丙沙星与盐酸成盐，奎宁和奎尼丁可与二元酸成盐，结构中喹核碱含脂环氮，碱性强，可与硫酸成盐；而喹啉环系芳环氮，碱性较弱，不与硫酸成盐。奎宁pKb1为5.07，pKb2为9.7，饱和溶液的pH值为8.8。奎尼丁pKb1为5.4，pKb2为10。,2.旋光性硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-237o至-244o；硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为+275o至+290o；而盐酸环丙沙星无旋光性。3.荧光特性硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。,（一）绿奎宁反应（Thalleioquin）绿奎宁反应是奎宁和奎尼丁的特殊鉴别反应。其反应如下：Ch.P收载方法,二、鉴别试验,（二）光谱特征1.UVCh.P采用本法鉴别盐酸环丙沙星。2.荧光光谱特征硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均显蓝色荧光，盐酸环丙沙星则无荧光，可用于本类药物的鉴别。3.IRCh.P中硫酸奎宁和盐酸环丙沙星均采用红外光谱的方法进行鉴别，而硫酸奎尼丁未采用此法。,（三）无机酸盐,硫酸奎宁、硫酸奎尼丁硫酸根氯化钡白色沉淀盐酸环丙沙星盐酸根硝酸银白色沉淀,（一）硫酸奎宁中特殊杂质检查1.酸度主要控制药物中酸性杂质。用pH计测定,pH为5.76.6。2.氯仿-乙醇中不溶物主要控制药物中不溶性杂质或无机盐类.3.其他金鸡纳碱主要控制硫酸奎宁中其他生物碱，因没有合适的对照品，因此采用薄层色谱中的高低浓度对比法进行检查。,三、特殊杂质检查,（二）盐酸环丙沙星中特殊杂质的检查1。酸度主要控制药物中酸性杂质。用pH计测定,pH为3.04.5。2.溶液的澄清度与颜色主要控制本品中不溶性物质和有色杂质。3.有关物质主要控制本品中可能引入结构不清的有关杂质，采用HPLC法中归一化法进行检查，其检查方法如下：,色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱流动相：0.05mol/L枸橼酸-乙腈(82:18)用三乙胺调节pH值3.检测器：UV检测波长为277nm；按盐酸环丙沙星峰计算n2000;盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度R1.5.测定方法：取本品适量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的2-4倍，记录时间应为主成分峰保留时间的2倍。按面积归一化法计算，杂质总量不得超过1.5%。,一、基本结构与化学性质（一）典型药物的结构硫酸阿托品氢溴酸东莨菪碱（atropinesulfate）(copolaminehydrobromide）,第三节托烷类药物,（二）主要化学性质1。水解性本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇()和莨菪酸()。,2.碱性阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有叔胺氮原子,具有较强的碱性,易与酸成盐。如阿托品的pKb1为4.35。,3.旋光性氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左旋体，比旋度为-24至-27，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。,（一）托烷生物碱一般鉴别试验,二、鉴别试验,生物碱,水解,莨菪酸,发烟硝酸,三硝基衍生物,KOH（C2H5OH）,固体KOH,有色的醌型产物（深紫色）,（二）氧化反应本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重铬酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。其反应式为：,(三)沉淀反应本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。如：阿托品+氯化汞醇试液黄色沉淀东莨菪碱+氯化汞醇试液白色沉淀,硫酸阿托品：水溶液加氯化钡生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解；加醋酸铅试液也生成白色沉淀，在醋酸铵或氢氧化钠试液中溶解。氢溴酸东莨菪碱：水溶液加硝酸银试液，生成淡黄色凝乳沉淀，能在氨试液中微溶，但在硝酸中几乎不溶；滴加氯试液，溴即游离，加氯仿振摇，氯仿层显黄色或红棕色。,（四）硫酸盐与溴化物反应,1.酸度东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱形成的盐，通过其5%水溶液的pH值为4.05.5，来控制本品中的酸性杂质。2.其他生物碱,三、氢溴酸东莨菪中特殊杂质检查,本品水溶液+氨试液,不混浊,合格,混浊,存在其他生物碱,+KOH试液,混浊（东莨菪碱）,3.易氧化物主要是检查本品在生产中可能引入的阿扑阿托品及其它含有双键的有机物质，可使KMnO4溶液褪色。,第四节吩噻嗪类药物,一、基本结构与化学性质（一）结构特点与典型药物,R:-H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R:具有23碳链的二甲或二乙胺基，或含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍生物,奋乃静,癸氟奋乃静,盐酸氟奋乃静,盐酸三氟拉嗪,（二）主要化学性质1.紫外和红外吸收光谱特征硫氮杂蒽母核为共轭三环系统三个最大吸收峰别在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。硫氮杂蒽母核的硫为二价，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。另外，取代基R和R的不同，则可产生不同的红外光谱,2.易氧化呈色二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同的颜色。3.与金属离子络合呈色本类药物中未被氧化的硫，可与钯离子形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。,（一）紫外特征吸收和红外吸收光谱本类药物可用UV和IR鉴别，Ch.P中UV鉴别实例如下：药物名称溶剂浓度（g/ml）max（nm）AE1%1cm盐酸氯丙嗪盐酸（91000）52540.46915306盐酸异丙嗪盐酸（0.01mol/L）6249883937奋乃静无水乙醇72580.65癸氟奋乃静乙醇10260盐酸氟奋乃静盐酸（91000）10255553593盐酸三氟拉嗪盐酸（120）10256630盐酸硫利达嗪乙醇8264与315,二、鉴别试验,（二）显色反应1.与氧化剂的显色反应药物名称硫酸硝酸过氧化氢盐酸氯丙嗪显红色,渐变淡黄色盐酸异丙嗪显樱桃红色,放置生成红色沉淀,加热即溶解,后颜色渐变深溶液由红色转变为橙黄色奋乃静显深红色;放置后红色渐褪去盐酸氟奋乃静显淡红色,温热后变成红褐色盐酸三氟拉嗪生成微带红色的白色沉淀;放置后,红色变深,加热后变黄色盐酸硫利达嗪显蓝色,2.与钯离子络合显色反应利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。,(一)盐酸异丙嗪中特殊杂质检查主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺异构体和结构不清的分解产物。因此采用TLC法中的高低浓度对比法控制上述这些杂质的限量。(二)盐酸硫利达嗪中有关物质检查本品遇光不稳定，在生产和贮藏过程中易引入有关物质，因其结构不清，因此也采用TLC法中的高低浓度对比法控制杂质的限量。,三、特殊杂质检查,第五节苯并二氮杂卓类药物,一、结构特征与典型药物,地西泮阿普唑仑奥沙西泮氯氮卓(diazepam)(alprozolam)(oxazepam)(chlordiazepoxide),碱性：非水溶液滴定法测定含量水解：在强酸性溶液中，形成二苯甲酮衍生物，具有的特性可用于鉴别和含有测定,二、化学性质,(一)化学鉴别试验1。沉淀反应氯氮卓橙红色沉淀阿普唑仑盐酸氟西泮KBiI4也生成橙红色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀颜色变深，因此可以相互区别。,三、鉴别试验,阿普唑仑+遇硅钨酸白色沉淀，药典中也用于鉴别。,2.水解后呈芳伯胺反应氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：,3.硫酸-荧光反应本类药物溶于硫酸/稀硫酸后，在紫外光（365nm）下，显不同颜色的荧光。例如：,4.分解产物的反应本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。Ch.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。5.氯化铜焰色反应分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧发出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。,（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱药物名称溶剂浓度（g/ml）max（nm）A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242约0.51282约0.23366氯氮卓盐酸溶液(91000)7245,308阿普唑仑盐酸溶液(91000)12264盐酸氟西泮硫酸甲醇(136)102392,2842比值1.952.503622氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液102392,3072奥沙西泮乙醇10229,3152(较弱)红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。,（三）TLC法1.常用的五种苯并二氮杂卓类药物的TLC法按常规法点样10l于硅胶G薄层板上，以苯-丙酮（3：2）为展开剂,饱和15min，用上行法展开15cm，挥发溶剂，用稀硫酸喷雾，于105干燥30min，置紫外灯下检视荧光斑点，结果见表8-6。,2.酸水解产物的TLC法利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的专属性较差。（三唑仑、阿普唑仑等经水解后不产生二苯甲酮衍生物，可以区别）。,1.地西泮中有关物质的检查地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质，可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。2.氯氮卓中有关物质的检查USP(24)用TLC法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得过0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。,四、特殊杂质检查,3.氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法色谱条件：色谱柱为250mm2.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；n=3000；流动相为甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氢氧化钠溶液调pH为6.0；流速为1ml/min;紫外检测器波长为254nm。检测结果：氨基物（）的tR为12.0min、氧化物（）的tR为4.3min，痕量杂质（、）的tR为13.8、3.6、4.7min。,(二)降解产物的检查地西泮注射液列入此项检查，因本品在贮藏过程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等杂质。采用HPLC法进行检查。,一、非水溶液滴定法(一)基本原理,第六节含量测定,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。,BH+A-,+,HClO4,BH+ClO4,+,HA,游离碱类盐,被置换出的弱酸,因此，要根据不同情况采用相应测定条件。,(二)一般方法,供试品,+,冰醋酸,10ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml,结果,高氯酸滴定液滴定,以空白试验校正,(三)问题讨论1.适用范围主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为813的弱碱性药物采用本法滴定。一般来说：Kb为10-810-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；药物的Kb为10-1010-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb10-12时，应用醋酐作为溶剂。另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。,2.酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2量不足终点不明显，结果偏低。2BHX+Hg(Ac)22BHAc+HgX2,过量(13倍)不影响测定结果,3.滴定剂的稳定性非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致，温差未超过10时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：p3064.终点指示方法常用电位法和指示剂法。Ch.P收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。,(四)应用实例1.游离弱碱性药物测定异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。药物名称取样量(g)溶剂指示剂终点颜色尼可刹米0.15冰醋酸10ml结晶紫蓝绿色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml结晶紫绿色氯氮卓0.3冰醋酸10ml结晶紫蓝色,2.氢卤酸盐类药物测定当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，对测定有干扰，必须先加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下：药物名称取样量(g)溶剂加入醋酸汞试液(ml)指示剂终点颜色盐酸氯丙嗪0.2醋酐10ml5橙黄玫瑰红色盐酸异丙嗪0.3冰醋酸10ml4结晶紫蓝色盐酸氟奋乃静0.3冰醋酸20ml5结晶紫蓝绿色盐酸环丙沙星0.2冰醋酸25ml5橙黄粉红色氢溴酸东莨菪碱0.3冰醋酸20ml5结晶紫纯蓝色盐酸硫利达嗪0.3丙酮100ml5电位滴定法,3.硫酸盐类药物测定硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成SO42-，但在非水介质中，只显示一元酸解离为HSO4-，即只供给一个H+，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。,（1）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以简写为(BH+)2SO42-，用高氯酸直接滴定时的反应式为：,(BH+)2SO42-+HClO4(BH+)ClO4-+(BH+)HSO4-,可根据1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的关系计算其含量。,（2）硫酸奎宁测定：奎宁为二元碱，其中喹核碱的碱性较强，可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1mol的硫酸奎宁消耗3mol的高氯酸。其反应式如下：(C20H24N2H+)2SO4+3HClO4(C20H24N22H+)2ClO4-+(C20H24N22H+)HSO4-ClO4-Ch.P和USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。,(3)硫酸奎宁片的测定：硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高氯酸标准溶液直接滴定。此时1摩尔的硫酸奎宁可消耗4摩尔的高氯酸，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不同。,4.硝酸盐的测定硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而用电位法指示终点。,5.磷酸盐与有机酸盐磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接滴定。,（一）硝苯地平的测定基本原理硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示：终点时:微过量的Ce4+将指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终点的到达。,二、铈量法,（二）吩噻嗪类药物的测定,药物,Ce(SO4),-e,红色,Ce(SO4),-2e,红色消退,自身指示终点或电位法、永停法指示终点,(一）酸性染料比色法1.基本原理,三、比色法,2.影响因素(1)水相最佳pH值的选择：本法中水相的pH应使有机碱性药物均成阳离子(BH+)，而酸性染料应电离足够的阴离子(In-),阴阳离子才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料完全保留在水相中，才能保证定量的测定。(2)酸性染料及其浓度：常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即可。,(3)有机溶剂的选择有机碱药物应对离子对提取率高，不与水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)水分的影响：严防水分混入有机溶剂中，水相中过量有色酸性染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混入的水分。,3.应用示例Ch.P中硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片和氢溴酸山莨菪碱片等，采用本法测定含量测定。,（二）钯离子比色法,优点：钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定。,（一）直接分光光度法供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。1.奥沙西泮原料的测定在229nm，采用标准对照法测定。2.盐酸异丙嗪片的测定在249nm，采用E1cm1%910测定。3.盐酸异丙嗪注射液的测定测定波长的选择：注射液处方加VC作抗氧剂，可还原异丙嗪红色氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。VC在盐酸异丙嗪最大吸收波长249nm处有吸收，干扰注测定。因此选用299nm波长测定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素C在此波长处则不产生干扰,但E1cm1%108。,四、紫外分光光度法,(二)萃取后分光光度法,盐酸氯丙嗪注射液,盐酸氯丙嗪,氨水碱化,氯丙嗪,乙醚提取,乙醚层,盐酸提取,盐酸氯丙嗪,max2541nm处测定A，E1cm1%915,（三）萃取-双波长分光光度法本法是USP（24）收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。测定原理利用氯丙嗪的最max为254nm，其氧化物在此波长也有吸收，同时在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得A计算氯丙嗪含量。,五、气相色谱法,（一）硫酸阿托品片的含量测定USP(24)采用的方法。以后马托品作为内标,采用标准对照法。测定方法(1)内标溶液的制备：(2)供试品溶液与对照品溶液的制备：(3)色谱系统：色谱柱为1.8m2mm的玻璃柱；担体为与碳酸钠混合于900熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定相为3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；载气为氮气，流速为25ml/min；检测器为氢火焰离子化检测器。,(4)系统适用性试验：取对照品溶液1l，进样6次，所得的对照品和内标峰面积之比的RSD不大于2.0%；对照品峰和内标峰的分辨率Rs4.0；T2.0。,(5)测定方法：取供试液和对照液各进样1l，记录各峰面积，用下式计算所取片粉中硫酸阿托品(C17H23NO3)2H2SO4H2O的重量:(C17H23NO3)2H2SO4H2O的重(mg)=(694.85/676.83)(W/10)(Ru/Rs)（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力学研究,(一)反相高效液相色谱法1.地西泮注射液的反相HPLC法地西泮注射液曾用萃取后分光光度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测定有干扰，故中国药典自1995版改用HPLC法。此法操作简便，可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为99.4%，相对标准偏差为0.8%。(1)色谱条件与系统适用性试验：ODSC18；流动相为甲醇-水(70:30)；检测波长为254nm。n1500，R1.5。(2)内标溶液的制备：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲