实验五-新生儿溶血病PPT课件

.,1,实验五新生儿溶血病,（Hemolyticdiseaseofthenewborn，HDN）,.,2,新生儿溶血病的定义,HDN是指因母、婴血型不合而引起的胎儿或新生儿同种免疫性溶血，出现黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大，甚至死胎、新生儿死亡等溶血病的症状和合并症。,.,3,HDN的分类,ABO-HDNRh-HDN其他血型系统-HDN,.,4,ABO-HDN和Rh-HDN的区别,ABO-HDNRh-HDN病因ABO血型不和Rh血型不和母亲血型O型多见Rh阴性婴儿血型A、B、AB型Rh阳性发病率3-5%较低免疫刺激不需孕产史、输血史首发胎数第一胎第二胎（外祖母学说除外）直抗-1+1+以上放散液制备冷冻、热放散乙醚放散换血治疗O型RBCRh血型同母亲AB型血浆ABO血型同婴儿型或O型血,.,5,新生儿溶血病检测的方法及原理,新生儿ABO及Rh血型鉴定“三项试验”：直抗试验游离试验释放试验,.,6,1、准备：离心分离血清和RBC，生理盐水洗涤RBC3次，取少量RBC配成35的RBC悬液。血清和洗好的压积RBC备用。2、新生儿ABO及Rh血型鉴定:试管法。3、直接抗球蛋白试验:,实验方法,35%RBC1滴抗球蛋白试剂2滴,3000rpm离心15s,凝集：阳性,无凝集,加阳性对照细胞,凝集：阴性,无凝集：抗球蛋白试剂失效,.,7,游离试验,原理检测新生儿血清中是否存在针对新生儿RBC血型抗原的IgG血型抗体。检测出A型抗AB型抗BAB型抗A、抗B或抗A、BRh阳性抗D。,.,8,游离试验（抗球蛋白卡法）,ABO-HDN游离试验A型RBCB型RBCO型RBC婴儿血清Ac管50l25lBc管50l25lOc管50l25lRh-HDN游离试验1号细胞2号细胞3号细胞婴儿血清150l25l250l25l350l25l37孵育15min，以1030rpm离心10min。观察结果。,.,9,ABO-HDN游离试验结果判断AcBcOc意义+-存在游离的抗A抗体-+-存在游离的抗B抗体+-存在游离的抗A、抗B抗体或抗A、B抗体+/-+/-+存在游离的ABO血型系统以外抗体-没有游离抗体只有当血清中检出相应抗体，同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为游离试验是阳性。Rh-HDN游离试验结果判断：任何一管出现凝集则血清中存在不规则抗体（抗D?进一步做抗体鉴定)。3管均不出现凝集则血清中不存在不规则抗体。,.,10,放散试验,原理利用特殊的方法将致敏在新生儿红细胞上的抗体放散下来，然后再检测放散液中的抗体。,.,11,放散液制备,1.热放散2.乙醚放散：,1份RBC1份盐水2份乙醚,振摇1min（排气）离心3min,上层乙醚中层RBC基质下层放散液,吸管吸出放散液，置37水浴中30min，除尽乙醚，然后鉴定抗体。,取洗涤压积RBC1份（1ml左右）,生理盐水1份,上清液即为放散液,56水浴轻摇7分钟立即离心,+,.,12,放散液中抗体的检测（卡法）,ABO-HDN放散试验酶处理AC酶处理BC酶处理OC放散液酶A管50l25l酶B管50l25l酶O管50l25lRh-HDN放散试验酶处理1号细胞2号细胞3号细胞放散液150l25l250l25l350l25l37孵育15min，以1030rpm离心10min。观察结果。,.,13,释放试验结果判断,ABO-HDN放散试验结果判断酶处理Ac酶处理Bc酶处理Oc意义+-释放出IgG抗A抗体-+-释放出IgG抗B抗体+-释放出IgG抗A、抗B抗体或抗A，B抗体+/-+/-+释放出ABO血型系统以外抗体（加做谱细胞）-未释放出抗体只有当放散液中检出相应抗体，同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为释放试验是阳性。Rh-HDN放散试验结果判断：任何一孔出现凝集则放散出不规则抗体（抗D？抗体鉴定)。3孔均不出现凝集则没有放散出不规则抗体。,.,14,新生儿溶血病检测的结果判断,直抗试验游离试验释放试验结论-不能证实为由血型抗体引起的新生儿溶血病+-可疑为新生