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文档简介
,仙灵芝,清水芙蓉,墨牡丹,胭脂点雪,植物的组织培养,课题1菊花的组织培养,1、说明植物组织培养的基本原理。2、学习植物组织培养的基本技术。3、掌握实验操作过程中使用的无菌技术。(重、难点)4、进行菊花或其他植物的组织培养。,学习目标,预习初知:答案展示,植物组织培养的相关概念:,(1)细胞分化:形态、结构和生理功能,选择性表达,(2)细胞的全能性:已经高度分化,完整个体,(3)愈伤组织:细胞分裂,疏松而无规则,高度液泡化,无定形,薄壁,(4)脱分化:已经分化,愈伤组织,(5)再分化:愈伤组织,根或芽,知识深化:我问你答,胡萝卜的组织培养示意图,1、植物组织培养的基本原理是什么?,植物细胞的全能性,2、细胞为什么具有全能性?,构成生物体的细胞内含有该物种生长发育所必需的全部遗传物质,即具有完整的细胞核,3、实现细胞全能性,首先做的是?,在一定的时间和空间条件下,基因选择性表达;具有不可逆性,离体,选材:生长旺盛的嫩枝;,这些部位的细胞相对幼嫩,细胞分化程度低,细胞分裂能力强,细胞的全能性较高,更易诱导进行脱分化和再分化。,知识深化:我问你答,4、实现细胞的全能性,除了离体外,还需要哪些条件?,(1)离体(前提条件)(2)一定的营养物质(3)植物激素(4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等,条件:,大量元素,有机物,微量元素,提供无机盐,甘氨酸、维生素等:,蔗糖:,(1)离体(前提条件)(2)一定的营养物质(3)植物激素(4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等,营养物质,MS培养基,作为碳源提供能量,维持细胞渗透压(必要成分),满足离体细胞特殊的营养需求,注意:MS培养基以无机养料为主,而微生物培养基以有机养料为主。,(2)一定的营养物质(成分?作用?),知识深化:我问你答,4、要实现细胞的全能性,除了离体外,还需要哪些条件?,(1)离体(前提条件)(2)一定的营养物质(3)植物激素(4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等,条件:,(3)植物激素(种类?影响因素?),植物激素:生长素(IAA或NAA等)、细胞分裂素(BA)等,A、激素的浓度,B、使用的先后顺序,C、用量的比例,知识深化:我问你答,结合生长素/细胞分裂素用量比例的影响思考:,在进行植物组织培养时,至少需配制几种培养基?,几种培养基的作用及顺序分别是?,比值适中时,诱导愈伤组织的形成;,比值低时,诱导发芽;,比值高时,诱导生根。,至少三种,知识深化:我问你答,4、要实现细胞的全能性,除了离体外,还需要哪些条件?,(1)离体(前提条件)(2)一定的营养物质(3)植物激素(4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等,条件:,(4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等,菊花组织培养过程中,pH控制在5.8,温度控制在1822,每天光照12h。,一般情况下,脱分化过程是否需要光照?再分化过程呢?,光照条件下,利于诱导细胞分化,,脱分化过程是通过细胞分裂形成愈伤组织,,需要进行避光处理,,再分化过程需要适宜光照,叶绿素的形成必须要有光。,知识深化:我问你答,实验操作流程包括:,1、制备MS固体培养基,问题探究:实验操作,1制2消3接4培5移6栽,【思考及讨论】利用手中的小纸片,模拟制备过程,注意各成分的添加顺序。,(1)配制各种母液:,(2)配制培养基:,(3)灭菌:,常温保存。使用时根据母液的浓缩倍数,计算用量,加水稀释。,灭菌方法是高压蒸汽灭菌(温度121,时间1530分钟),蒸馏水800ml,蔗糖30g,大量元素母液,琼脂10g,微量元素母液,有机物母液,植物激素母液,定容至1000ml,调节PH,分装到各锥形瓶(50或100ml/个),实验操作流程包括:,2、外植体消毒,1制2消3接4培5移6栽,【思考及讨论】熟读外植体消毒的流程,总结出口诀或顺口溜。,消毒液:70%酒精;0.1%氯化汞(又称升汞,有毒),注意:在此消毒过程中,强度是不是越大越好,为什么?,考虑药剂的消毒效果以及植物细胞的耐受能力,问题探究:实验操作,实验操作流程包括:,1制2消3接4培5移6栽,【注意】通过视频学习:3接种;4培养;5移栽;6栽培四步,特别注意实验操作方法。,用70%酒精将工作台擦拭,然后点燃酒精灯。,(1)接种前,如何进行消毒灭菌?,(2)插入外植体时,为什么不能倒插?,插入外植体时,形态学上端在上,更利于茎段下部生根,吸收矿质元素和养料。(生长素的极性运输;生长素/细胞分裂素比值高,利于根的分化),所有的接种操作必须在酒精灯火焰旁进行,,并且每次使用器械后,都要用火焰灼烧灭菌。,(3)接种时每瓶接种68块外植体。只接种1块,行不行?为什么,避免偶然性误差,平行重复原则,问题探究:实验操作,实验难点探究:,2、如果某一步灭菌不彻底,组织培养能否成功?如果设计对照实验,来验证无菌操作是植物组织培养成功的关键环节,你的设计思路是?实验中的因变量是?,实验组:严格控制无菌条件,1、实验操作中如何实现无菌条件?,(1)培养基的灭菌(高压蒸汽灭菌),(2)外植体的消毒(70%酒精、0.1%氯化汞),(3)接种中的无菌操作(70%酒精、酒精灯、火焰灼烧),(4)无菌箱的培养,定期消毒。,(5)移栽至消过毒的环境中,对照组:某一步灭菌不彻底,对照原则,因变量:外植体的生长情况,在植物组织培养过程中,属于引起外植体被污染的原因有()培养基灭菌不彻底;外植体消毒不彻底;接种中被杂菌污染;锥形瓶密封性差等。ABCD,习题训练,D,菊花的组织培养,基本原理,细胞的全能性,基本过程,脱分化,愈伤组织,再分化,影响因素,材料选择、营养物质、植物激素、环境条件,操作流程,配制MS固体培养基,外植体的消毒,接种,培养,移栽,栽培,知识小结,把胡萝卜的单个韧皮部的细胞放入配制的培养基上培养,获得了完整的植株。这种细胞工程技术和繁殖方式分别属于()A细胞杂交技术和有性生殖B植物组织培养和无性生殖C细胞拆合技术和有性生殖D细胞培养和无性生殖,习题训练,B,在外植体脱分化形成愈伤组织的过程中,下列哪个条件是不需要的()A消毒灭菌B适宜的温度C充足的光照D适宜的养料和激素,习题训练,C,1某株名贵花卉用种子繁殖会发生性状分离。为了防止性状分离并快速繁殖,可以利用该植株的一部分器官或组织进行离体培养,发育出完整的植株。进行离体培养时不应采用该株的()A茎尖B子房壁C叶片D花粉粒2某园艺场经过长期精心选育,培养出一株形态优美的兰花,如果要保持母本的优良性状,
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