GBT 14700-1993 饲料中维生素B1测定方法_第1页
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文档简介

中华人民共和国国家标准饲料中维生素 14700一93of , in 测定方法。本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、维生素预混料中维生素B,的测定。萃取液的浓度范围为。 引用标准682实验室用水规格3方法原理试样中的维生素B,(即硫胺素C,H稀酸消化、酶分解、吸附剂的吸附分离提纯后,在碱性条件化钾氧化生成荧光色素硫色素,用正丁醇萃取。硫色素在正丁醇中的荧光强度与试样中维生素B,的含量成正比,依此进行定量测定。为蒸馏水或相应纯度的水。4. 1盐酸溶液,0. 1 :将8.5 B 622)用水稀释至1 000 . 2硫酸溶液,0. 05 2. 8 B 625)加入水中,稀释至1 000 mL 3乙酸钠溶液2. 0 :取164 B 694)或272 3H,93)释至1 000 g/L:用2. 0 乙酸钠溶液(浮10 相当活性的其他磷酸酷酶),稀释至100 用当日制备。4. 5纵化钾(46)溶液,250 g/L,8.5 ,并稀释至1 000 . 7氢氧化钠(29)溶液,150 g/L,B 644)溶液,10 g/1。. 0 氢氧化钠溶液(4. 7)混合使之成100 液4. 10冰乙酸(76)溶液,30 ,60用前必需活化,方法如下:将适缝人造沸石置十大烧杯中,加入10倍容积的热乙酸溶液(用玻璃棒均匀搅动10 沸石在乙酸溶液中悬浮,待沸石沉降后,弃去上层乙酸液。重复上述操作两次。换用5倍其容积的热抓化钾溶液(动清洗两次,每次15 用热乙酸溶液洗10 14700一93无诫离子(用10用布氏漏斗抽滤,1000烘十,贮于磨口瓶中备用。使用前,需重新活化沸石。酸硫胺素纯品(中国药典参照标准),于五氧化二磷干燥器中干燥24 h,称取。. 050 0 g,溶解于. 53的20% (V /V)乙醇溶液中并定容至500 于棕色瓶中低温保存该溶液每毫升含。.1 2硫胺素贮备液。:取硫胺素贮备液工(0 醇溶液定容至100 盛于棕色瓶中低温保存。该溶液每毫升中含10 硫胺素标准工作液:取贮备液1 (4. 5 合,用水定容至100 用现配。该溶液每毫升中含。. 13硫酸奎宁(Q/2取硫酸奎宁。硫酸(4. 2)溶解并定容i 1 000 溶液混浊则需重新配制。该溶液每毫升中含0. 1 2硫酸奎宁工作液:取贮备液( 05 硫酸定容至1 000 于棕色瓶中,低温保存。该溶液侮毫升中含。. 3 . 14正丁醇(其荧光强度不超过硫酸奎宁工作液的4%,否则需用全玻璃蒸馏器重蒸馏,取114馏份4. 15无水硫酸钠(5仪器、设备5门荧光分光光度计,备1 . 2电热恒温水浴。5分析天平:感量。000 1 g 0 长235 径5 70 部吸附管8 130 端35 塞离心管25 少500 g,四分法缩减至100 g,磨碎,过。28 匀,装入密闭容器中,避光低温保存备用。取单索预混料0. 25一。饲料、配合饲料或浓缩饲料1-2 g(约含硫胺素4精确至。,)01 确至0. 000 1 g,置于100 B/T 。.1 5 ,经沸水浴加热30 始加热5防结块。或于121 15磅高压釜中加热30 酶解:冷却容量瓶至50以下,加5 摇匀。该试液的4. 5,将容量瓶于4550 出冷却调整. 5,用水稀释至100 3过滤:将试液通过无灰滤纸过滤弃去初滤液5 集滤液于锥形瓶中。预混料提取液需逐级稀释,使之含硫胺素约为。. 2 Kg/3门制备吸附柱:取1. 5 于50 入3%乙酸溶液(泡。将脱脂棉置于吸附柱底部,用玻璃棒轻压。然后将乙酸浸泡的沸石全部洗入柱中(勿使吸附柱脱水),过柱流速镇1 mL/用10 吸25 3 ),慢慢加入制备好的吸附柱中,弃去滤液,用每份5 60酸性氯化钾(4. 6 )分三次连续加入吸附柱,收集洗脱液子25 却后用酸性氯化钾定容,混匀。4同时用25 为外标。下操作避免紫外光照射)记作A,B,再向轻轻旋摇。依次立即向烈地振摇15s,再向同振摇90 s,静置分层。各反应管加入约2旋摇,待测。4),置入另两只反应管,相应地记作C,D,4. 整荧光仪,使其稳定于一定数值,作为仪器工作的固定条件7. 5. 2于激发波长365 射波长435 7. 4. 3)和(i一算公式硫胺索(维生素B)含量以mg/g/示,按下式计算:硫胺素(mg/兴一一,一一, ,一一硫胺素标准工作液浓度,pg/, 0 mg/得超过平均值的15%在硫胺素含量大于5. 0 mg/得超过平均值的10

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