细菌分离鉴定实验原理及操作注意事项(实验员)

细菌分离鉴定实验的原理和操作注意事项，我国最专业的规模化养殖场健康检查服务机构，确立了、细菌分离鉴定实验的意义*无菌概念，了解无菌操作，*常规病原菌分离过程*病原菌分离鉴定实验原理，*细菌药敏试验*细菌学实验操作注意事项，1， 2、3、意义、细菌分离检定实验，超耐药菌，健康养殖，确诊疾病，诊疗方案，无菌观念的确立，无菌无菌，在没有活菌的意义上，是生物技术的重要概念。 在培养基、发酵设备等无菌的前提下，微生物接种后，可以实现纯培养，最终得到所需的产品。接种方法、曲线划线法、区划划线法浇注法、涂布法(细菌计数)斜面接种法(生化鉴定、保存菌种)穿刺培养法(生化鉴定、保存菌种)液体培养基接种法)、病原菌的分离鉴定、细菌的分离培养主要是临床发病动物组织器官、粪便中的细菌，通过分离使细菌分散生长成平板，单个菌株1 .基本条件(1)接种器具：棉棒、接种环、接种针、酒精灯(2)培养箱：普通恒温培养箱(3)无菌室和超清洁台(4)培养基：营养琼脂、麦考康琼脂、SS琼脂2 .接种方法区划划划线法用棉棒将标本涂敷在平板的第一区划线数次，然后在二、三区依次接种环状盘每划定一个区域，就要烧灼接种环，冷却后再划定区域。 各区域划分为接触线与前区域接种线接触23次，菌量逐渐减少，形成单一菌落。 刻划结束后，盖上平板，倒置，在适当的培养条件下培养。 (2)液体培养基接种法(增菌法)在棉棒和接种环中选择病材和菌落，在试管壁和液面的边界轻轻研磨，将菌团混合到液体培养基中。 (3)注入的平板法主要是将用水质(饮水)的细菌计数适量稀释了灭菌生理盐水(通常稀释10-1-10-4 )的水质1ml放入灭菌皿中，注入用灭菌溶解并冷却至50左右的培养基15ml进行混合，等待冷却后倒置。 在37的恒温培养箱中培养后，计算培养基内菌落数，乘以稀释倍数，即可计算出每毫升被检体的细菌数。 大肠杆菌分离，黑色有金属光泽，圆形隆起，粉红色或品红色，圆形隆起，光滑湿润，边缘齐全的沙门氏菌细菌分离，圆形，微凸，边缘齐全，直径12mm小菌落，菌落为无色透明，淡黄色透明或外周透明中心为黑色、蓝色或蓝色菌落， 硫化氢菌株菌落中心为黑色，实验室分离，链球菌在血液琼脂中生长为无色透明、圆形、光滑、隆起的露滴状小菌落，生物杆菌在血液平板中生长为淡灰白色、发光的露滴状小菌落，进行形态学检查，检查染色标本，对标本的涂膜和染色进行细菌形态、 通过观察大小、序列、染色特性、荚膜、鞭毛、芽胞、异染粒子等结构，有助于细菌的初步识别和诊断。 1 .涂层：从肉汁或平板中选择菌液或菌落，涂在滴有生理盐水的玻璃板上，涂层厚度适当。 2 .固定：涂膜干燥后，快速通过火焰3次，加热固定。 3 .染色：滴下染液复盖菌膜。 4 .脱色：乙醇是最常用的脱色剂，70%乙醇和无机酸的脱色能力强。 5 .复染：复染使脱色的细菌再着色。 常用染色方法：最常用染色方法(1)染色工序结晶紫初染：结晶紫染色1.5min，水洗，甩干碘液介质染：碘液染色2min，水洗，甩干酒精脱色： 95%乙醇脱色，2030s，脱色、水洗，甩干碳酸复红染色1(2)结果革兰阳性蓝紫色，革兰阴性紫红色。 大肠杆菌形态鉴定、沙门氏菌形态鉴定、细菌形态鉴定、链球菌形态鉴定、葡萄球菌形态鉴定、病原菌生化鉴定、糖类发酵试验原理：含有发酵不同细菌糖类的酶，分解糖的能力不同，代谢物不同，细菌为各种糖葡萄糖代谢类型鉴别试验原理：又称氧化/发酵试验，观察细菌在葡萄糖分解过程中是利用分子氧(氧化性)，还是利用无氧发酵(发酵型)，还是不分解葡萄糖(碱性)。 生物化学鉴定、细菌药敏试验、抗菌药敏试验(AST、药敏试验)用于测试抗菌药物在体外是否对病原微生物有抑制作用。 常用最低抗菌浓度(MIC )表示体外可抑制细菌生长的最低药物浓度。 方法：扩散法(纸片法)稀释法(琼脂稀释法和液体稀释法)、快速药敏试验：病材直接涂布药敏试验和病原菌分离同时进行(16-24h )，可根据药敏结果进行初步治疗。 前增菌法药敏试验：选择组织培养后菌落，放入灭菌肉汤培养液中，涂抹药敏试验8-12h，观察结果。 传统法药敏试验：时间长(23天)，常规养殖场定期监测病原菌及其敏感性，可采用此方法。 可较好地分离病原菌，病原菌纯培养后进行药敏试验，所得数据准确反映病原菌对某些药物的敏感性。 试验方法，(1)样品处理：用灭菌棉棒取组织内部，打开装有增菌液(营养肉汁)的管子，将增菌液和棉棒充分混合，盖上盖子做记号，放入恒温槽中37培养12-24小时，将该肉汁菌液作为前增菌液。 (2)细菌分离培养：取出病变组织灭菌棉棒试管，观察营养肉汤中细菌的混浊。 混浊时用接种环采集菌液，无菌操作接种麦考康琼脂、SS琼脂，37培养12-24h，观察细菌有无生长，初步判定感染病原菌的种类。 操作过程，前增菌药敏试验，(3)涂板，密封片：用灭菌棉棒稀释培养液，在管壁上多次接触，去除多馀的水分，均匀涂抹在营养琼脂平板上，多次旋转平板60度，最后沿周边卷2次，保证均匀涂抹，贴上药敏片，37下8-18h 操作过程，(4)结果观察、判定标准、抗菌环：应用游标卡尺从平板背面准确测定各抗菌环直径(准确到0.01mm )，抗菌环边缘以肉眼无明显细菌生长为限。 原料药的判定按照抗微生物药物敏感性试验执行标准2010产品药的判定标准