小鼠MCAO总结

鼠标MCAO模型一、实验设备：1.手术器械：眼科剪刀1，显微镜剪刀1，钩针镊子1，镊子1，显微镊子2，止血钳1，针固定器1，缝合线(2-0/5-0)，缝合线，麻醉剂：10%2.云形线：0.18mm(2025g)，0.20mm(25 30g)；在插头10mm处显示黑色标记。75%酒精清洁后，在1:50单位肝素盐水中备用。3.其他物品：酒精棉签、75%酒精、食盐水、注射器(1ml、2ml)、黑色记号笔、固定鼠用粗绳、鼠标板二、步骤：泽拉隆加线螺栓法1.麻醉：10% chloral aldehyde腹腔注射(350mg/kg)术前准备：仰卧位固定大鼠，皮肤消毒准备3.分离血管和连接线：1)胸骨柄到下颌骨的长度约为1厘米中间切口。请参照颌下腺，两侧分开。(2)见右侧肩胛骨舌骨肌、胸骨舌骨肌、双腹肌形成的三角区，在此三角区内暴露右颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、内颈动脉(ICA)。3)首先卸下CCA，然后挂上1。(4)将ECA血管及其分支向头部分离，在ECA中，在头部和尾部各挂2，3条线。5)然后去除CCA分支脂肪，观察ECA分支与ICA的关系，分离ICA和ECA分支，并在上面挂4号线；(6)避免迷走神经、舌咽神经、气管损伤，小心过度拉血管，引起严重位移或破裂。结：结：线1，2；节点：线4；解除绑定：线36.插入剪裁：1)逆时针旋转鼠台90度，从ECA到1.5mm微调所有嘴。2)使用此切口将显示的导线螺栓插入到CCA中。3)再次转动鼠带，从CCA上分支的稍端拔下线，右手将刀痕推到ICA上，右手打开线4结，继续插入ICA，有阻力的时候进入一厘米深，到达大脑中动脉和前方交通之间。4)夹好后，将线4绑牢，从线3中减去多馀部分。6.懒汉皮7.术后：鼠标趴着的姿势下，头部略微升高，温度和湿度适合环境。三、注意事项：1.雌鼠对拉动等操作反应更强，因此最好选择雄鼠作为实验对象。2.大鼠解剖变异：一般Fisher-344大鼠MCA解剖变异较小，闭塞后形成的梗死体积吻合较好。Wistar-Kyoto大鼠的变异相对最大。Sprague-Dawley老鼠在其间。3.麻醉：10% chloral aldehyde腹腔注射(30ml/kg)，通常1-1.5h可持续。根据标准体重的麻醉容量效果不好的话，可以追加使用总使用量的10%。要注意多次或过多的追加会导致动物死亡，或者醒着，因延期影响再灌注前分数，再灌注不能统一为2h。Chloral hydrate可以将动物的呼吸周期减少50%左右，但一般来说，动物不会窒息而死。密切观察手术中动物的呼吸频率、深度及无痰叫声。4.分离气管前肌肉时，注意甲状腺和甲状旁腺的保护。甲状腺是鲜红色，紧挨着气管前壁，甲状腺位于甲状腺外部，颜色有点浅。将血管放在原位，使用电凝器，小血管的出血明显减少，可以明确手术。特别是肌肉内的血管和ECA的一些小分支不能在不明确的时候随意摘下。结扎血管需要注意力和方向。血管被膜分离后，血管表面相当光滑，如果结扎不正常，就会发生难以控制的出血。手术中要注意与血管密切相关的神经的保护，注意神经的颜色、反射性、轻轻触碰时的感觉，不要受伤或分离。吸引迷走神经后，可以看到动物的呼吸明显减慢，甚至血液呈深紫色，肢端青色症。如果不能进行辅助通风，必须停止工作。一般来说，动物的呼吸在麻醉后可以恢复到稳定的状态，使血液的颜色恢复正常，继续手术更安全。PPA文献的结扎与否还不一致。可以沿ICA分离，直到看到开颅和PPA分叉，观察线螺栓状态并成功插入长度约1厘米的线螺栓，无需操作PPA即可固定线螺栓。如果只进入5毫米左右就出现明显的阻力，焦炭很可能进入PPA，疏散到ECA/ICA，抬起PPA，kake将沿着ICA进入两个内部，最终阻止MCA。6.据报道，科米等1986年首次在没有开颅的情况下，通过CCA用尼龙线螺栓引起了MCA阻塞。之后，Longa等经过了改进，在ECA中插入和重新灌注样条线时，将样条线拉回ECA，实现通过CCA的重新灌注。koz umini使用的线末端均匀包装，硅胶路直径接近30%到40%，插入后肯定切断大脑动脉存档(ACA)近端、ACA和前方交通动脉，同时切断MCA和后方交通动脉入口，完全切断MCA及所有侧支供应血管，供应部位完全缺血，因此区域梗塞区域大、均匀，动物差异小Longa中使用的4-0尼龙线末端球形扩张不是直接阻断MCA，而是通过结扎同侧ICA及其球形扩张端扩展到ACA腔，通过前交通动脉阻断另一侧ACA上的血流形成局部脑缺血，但不会阻断后交叉动脉侧支的供给，效果因室末端延伸到ACA室的位置而有很大变化，因此形成的梗塞面积较小，每个动物的差异很大。宋洪松等建议采用铜锣米方式。丁香花园：1.注意不要损伤颈外分叉下的交感神经节。2.栓剂进入后颈动脉后，可以逐渐插入。有时插入到最后很好，但有时从中间怎么也进不去。因为血管通过头骨时有狭窄或角度。因此，触摸这种明显的阻力时，不能强行插入力，插头的前面会变得更好，容易损伤血管。此时正确的方法是把更多的螺栓拿出来。可能有一定程度的动脉血流。不要惊慌，沿血管调整线路角度，使其柔软，一般可以进入。不能再尝试几次，最好换根螺栓。也许前端也会被变形角度改变！我的颈动脉向内，可以用眼和镊子夹起钓丝插上，但是进去后要小心不要太用力。为了避免血管爆裂3.栓剂不能在血管里持续后退。否则，蛛网膜下腔出血容易被误解为模型的成功。因为此时神经功能的变化也很明显，但不是因为栓塞4.在老鼠仰卧时，ICA是ICA的延伸，从CCA向下(后侧)约5毫米除以2个a，进入乳养气泡(Mastoid bulla)。翼状胬肉a的方向与盆地前面的ICA几乎相同，ICA的延伸是向头部方向改变，因此插入线时自然进入腭a。进入线内时，用镊子将ICA轻轻推向头部，连接ICA和延长的树枝，同时线原封不动地插入，就可以很容易地进入颅内。或者，只要将样条线弯曲到一定程度，并保证样条线向屋顶方向弯曲，通常可以像颅内一样将线塞进去，决不会进入翼状胬肉a。5.注意手的感觉，慢慢推进，直到感觉到阻力(遇到阻力，可以再次看到连接线弯曲)。可能有人说，插上血管也感觉不到阻力或线被打断后的弯曲。一个原因是线太硬，另一个主要原因是螺栓从血管切口插入后，为了防止血液从这里流出，必须结扎细线，这条线的结扎是非常重要的，因为这条线的结扎必须尽量放松，不流血，进入时容易感觉到阻力。后者很重要，请体会。6.螺栓进入ACA后，上述细线应适当拧紧(“一般”在再灌注时影响老鼠的生死存亡很重要)，此时最重要的动作是柔软。不能让ICA没有任何拉力。否则，螺栓会退出ACA，导致缺血性障碍。血管外的栓剂不要留得太长，不要缝在皮肤外，老鼠醒来后自己拔出来。7.如果使用的是中长期麻醉剂，则在成功插上线后，必须固定明珠室，然后做俯卧撑，稍微提高脖子，才能确保模特的成功。8.手术后一定要注意保暖。9.插入线要柔软熟练，尽快防止血管内血栓形成。10.术后分数的主观因素很大，5分和11分制有用，我个人认为使用5分制更准确。11.以大鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型为例，梗塞体积出现的最小时间点可能为2h，大小随时间增加，到12h大体趋于稳定12.整个考试是非常昂贵的动物。虽然有15-30%的辍学率(如果做得好)，但要注意严格控制自己淘汰的动物(记录具体情况)。13.除了刚才说的蛛网膜下腔出血外，老鼠肺出血明显，肺部全部呈暗红色，我也不知道原因，不知道是不是医学临床上说的脑肺综合症。14.术后治疗：术后动物还没有意识，所以护理也很重要。但是为了确保螺栓的成功，预计的切断时间、螺栓脱落，暂时把动物放在手术台上，不要因为孤军奋战而使螺栓掉得太早，但是要监视体温，注意保暖。再灌注后，动物可以放进笼子里。另外，笼子是干燥的，没有积水或灰尘，要防止动物误吸窒息。实验中，一些模型的症状不寻常或完全没有出现，是因为动物醒来后，试图过早地掉螺栓。术后大鼠生存期可满足常规实验要求，一般栓塞和再灌注损伤时间较长，死亡率会提高。老鼠在手术后24到48小时之间最容易死亡，这种死亡是由严重的脑缺血损伤引起的，更直接的因素是脑水肿。使用抗栓建立持续局部脑缺血模型时，术后用庆大霉素的肌肉注射预防感染。如果动物模型想存活一周以上，为了防止脑水肿引起的动物短期死亡，需要进行快速尿血。手术后在饮用水中添加葡萄糖，确保在动物术后实验要求时间内有足够的能量。舍去标准：栓剂深度小于18毫米，神经功能不明显，或症状轻微的老鼠插入。(2)蛛网膜下腔出血、MCA起始部或附近Willis环动脉有凝血部位的老鼠。因为这是永久性脑缺血损伤，而不是