酶工程各种酶

酶工程，文献综述，下列酶的用途，活性测定的原理和方法：1。超氧化物歧化酶2。糖化酶3。植酸酶4。蛋白酶，超氧化物歧化酶，参考文献：1。袁钦生主编超氧化物歧化酶华东理工大学出版社，2009.05.2。王文君主编熊海荣；王海英，郭晓华，张华山副总编辑；王海英，吴元熙，王文君等编委会生物工程专业实验教程华中科技大学出版社，2012.04。用法：1)抑制心脑血管疾病：人体衰老与体内氧自由基的产生和积累密切相关，超氧化物歧化酶能消除体内过多有害的氧自由基，是有益健康的有效成分。2)抗衰老作用：随着年龄的增长和一些外部因素的影响，人体和皮肤组织产生的自由基会超过人体正常清除自由基的能力，从而对皮肤组织造成损伤，导致衰老。3)自身免疫性疾病：超氧化物歧化酶对各种自身免疫性疾病有一定疗效，如红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎等。4.肺气肿：超氧化物歧化酶也可用于肺气肿患者，但应在病变初期肺弹性纤维未受损时使用，且疗效较好。5)放射病及辐射防护：本品可用于治疗膀胱炎、皮肌炎、红斑狼疮、白细胞减少症及其他因放射治疗引起的疾病，也可注射超氧化物歧化酶作为对可能接触电离辐射者的预防措施。6)老年性白内障：应定期服用抗氧化剂或在进入老年前定期注射超氧化物歧化酶。活力测定原理邻苯三酚能在碱性条件下快速自氧化，释放氧离子形成有色中间体。反应开始后，反应溶液首先变成黄棕色，几分钟后转录，几小时后变成黄色，这是生成的中间产物连续氧化的结果。在本实验中，确定了在邻苯三酚自氧化过程的初始阶段，中间产物的积累在停留30 45秒后与时间呈线性关系。一般来说，线性关系保持在4分钟的范围内，中间产物在420纳米波长下具有很强的光吸收。当超氧化物歧化酶存在时，它能催化O2-和H的结合产生O2和H2O2，从而防止中间产物的积累。因此，超氧化物歧化酶的活性可以通过计算来计算。活性测定方法，1。邻苯三酚自氧化反应速率的测定实验是在25下进行的，按以下酶活性测定样品表(表1-2-1)的顺序和用量向1cm厚的比色池中加入预热到25的缓冲溶液、超氧化物歧化酶样品溶液、重蒸馏水和邻苯三酚溶液(用10 mmol/l盐酸代替邻苯三酚作为测定对照)，加入邻苯三酚溶液立即启动秒表计时，每30S用分光光度计在420nm波长处测量吸光度，共测量10个数据。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，根据线性关系部分的斜率计算自氧化反应速率( A420/min)。邻苯三酚溶液的用量应适当改变，以使自氧化反应速度为0.02/min。2.酶抑制下的自氧化反应速率的测定过程与邻苯三酚自氧化反应速率的测定过程相同，只是待测的超氧化物歧化酶样品溶液加入到反应体系中。应适当增加或减少超氧化物歧化酶样品溶液的稀释度或剂量，使酶抑制下的自氧化反应速度为0.007 0.013/min，即只有35% 65%的自氧化反应能被抑制(超过此范围，自氧化反应的抑制程度与酶的量不成比例)。葡糖淀粉酶，参考文献：1。张树正主编酶制剂工业下册科学出版社，1984年7月，第1版2。李江华主编发酵工程实验高等教育出版社，2011.06。用途。糖化酶的主要用途是作为淀粉糖化剂。酸水解工艺有许多缺点：需要耐酸耐压的设备；(2)应以精制淀粉为原料；淀粉浓度低，只有20%左右；水解后中和，色泽深，精制成本高；淀粉对葡萄糖的产率低，不超过90%淀粉酶糖化没有上述缺点，可使用粗淀粉原料，进料浓度可高达50%(以干重计)，糖产量高(100公斤淀粉约10公斤葡萄糖)。由于不需要中和等工序，杂质含量低，可直接通过喷雾干燥制备糖粉。该方法的简单步骤是制作30-40%的淀粉浆，在pH6时加入-淀粉酶。0-6.5，在约90液化直至碘反应消失，冷却至55-60。在pH 4.5-5时，加入糖化酶保温糖化48小时左右，几乎所有的淀粉都转化为葡萄糖，经脱色、浓缩、结晶或喷雾干燥后得到产品，DE值可达98%以上。活性测定原理糖化酶广泛分布于所有能直接以淀粉为营养来源的生物中。葡糖淀粉酶催化淀粉水解并分解-1，4糖苷键产生葡萄糖。葡萄糖分子含有醛基，可以被碘酸钠氧化。过量的碘酸钠被酸化以沉淀碘，碘用硫代硫酸钠标准溶液滴定以计算糖化酶活性。活力测定法，在a和b两个50毫升比色管中，分别加入可溶性淀粉溶液25毫升和pH4.6醋酸缓冲液5毫升，摇匀后在40恒温水浴中预热5分钟。向试管a(样品)中加入2mL待测酶溶液，立即摇匀，在此温度下准确反应30分钟，立即分别加入0.2毫升200克/升的氢氧化钠溶液，摇匀。取出两个试管后，迅速冷却，将2mL待测酶溶液加入试管b(空白)。从试管A和试管B中各吸取5mL反应液，分别放入碘容量瓶中，准确加入10毫升0.1摩尔/升碘溶液，加入15毫升0.1摩尔/升氢氧化钠溶液，摇匀，塞紧，在黑暗中反应15分钟。取出，加入2mL 1mol/L硫酸溶液，立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定，直到蓝色刚好。植酸酶，参考文献：1。吴、周琦，主编；干辛主持酶工程技术华中师范大学出版社，2009年12月2日。王芙蓉主编。专业教材生物工程分析与检验中国轻工业出版社，第一版，2005年6月。饲料中添加植酸酶不仅可以提高谷物和饲料中磷的吸收和利用率，还可以减少植酸对微量元素的螯合，显著提高动物对矿物质的吸收，提高动物对植物蛋白和氨基酸的利用率。添加植酸酶可以替代无机磷的使用，提高植物饲料的营养价值，降低养殖成本，增加养殖收入，具有显著的经济效益。植酸酶的应用还可以减少畜禽粪便中磷的排泄，减轻磷对环境特别是水体的污染，对我国农业的可持续发展和生态环境的保护具有重要意义，具有巨大的生态和社会效益。植酸酶在饲料工业中的应用具有安全、环保、高效、经济、社会和生态效益好的特点。因此，植酸酶在大多数欧洲国家被强制使用，在韩国和日本也被推广。由于经济发展水平和其他原因，中国饲料企业以前对环境问题关注较少。因此，在推广植酸酶产品时，企业不会大量使用植酸酶，因为它们可以减少磷和氮的排放，减少环境污染。起初，与使用磷酸氢钙相比，饲料企业使用植酸酶并没有降低成本，饲料企业使用植酸酶主要是为了增加磷。植酸酶是一种能将植酸分解成磷酸和肌醇的酶，存在于各种微生物和植物器官(如种子和块茎)中。植酸在自然界中以钙、镁和钾盐的形式存在于豆类和谷类中，并与食物中的铁、锌和其他金属离子形成不溶性化合物，从而使人体难以吸收这些元素。此外，植酸还可以与蛋白质形成稳定的复合物，从而降低产品如豆类中蛋白质的效价。植酸酶能分解植酸，已被成功地用作家禽和家禽饲料的添加剂植酸酶分解植酸释放无机磷。在酸性条件下，无机磷和钼酸铵形成黄色磷钼酸铵。用比色法定量测定和计算植酸酶的活性。活性测定方法如下：(1)取6个试管，分别加入标准磷溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1，绘制标准曲线。然后分别加水至1毫升。向每个试管中加入8毫升显色溶液，并充分混合。加入0.8毫升柠檬酸溶液，混匀，反应液为黄色，波长415纳米，以0管为空白，测量吸光度。标准曲线以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标。(2)待测酶液的制备：称取酶粉1-29，精确至0.00029，用少量缓冲液溶解，用玻璃棒研磨，小心将上清液倒入容量瓶，向沉淀部分加入少量缓冲液，反复研磨3-4次，最后全部转移至容量瓶，用缓冲液定容至刻度(酶液浓度稀释至待测溶液吸光度在0.25-0.44范围内通过四层纱布过滤，滤液用于测定。(3)酶活测定：吸取0.9毫升底物溶液，在37水浴中保温5分钟，准确加入0.1毫升稀释的酶溶液，混匀。将其放入37水浴中精确保温10分钟，立即加入8毫升显色溶液，并充分混合。加入0.8毫升柠檬酸溶液，混合均匀。此时，反应溶液是黄色的。另取0.1毫升煮沸的灭活酶溶液。在415nm波长下用与上述空白相同的操作测量吸光度。从标准曲线中找出相应磷的质量。蛋白酶，参考文献：1。姜西丽，段钢，周鸿伟主编酶制剂应用技术问答中国轻工业出版社，2008.4.19第2页。张春红主编食品酶制剂及应用中国计量出版社，2008.63。李江华主编发酵工程实验高等教育出版社，2011.06。用途：1。用于水解蛋白质、制备调味料、啤酒的耐寒性、改善烘焙产品的品质、嫩化肉类、制作干奶的凝乳等。2.它可以用来改变饼干中的面筋，减少面团的制粉时间，但不超过面粉量的0.25%。3.酒精饮料中酵母生长的氮源。4.酸性蛋白酶可用作消化剂、消炎剂和啤酒澄清剂，也可用于毛皮软化工业。活力测定原理，采用燧石-酚试剂法。福林酚试剂在碱性条件下可还原成酚类化合物，呈蓝色。由于蛋白酶分子含有含酚基的氨基酸，蛋白质及其水解产物可进行上述反应，因此蛋白酶活性可通过该方法测定。通常以酪蛋白为例，在一定温度和酸碱度下与酶溶液反应，一段时间后终止酶反应，离心或过滤除去酪蛋白沉淀，取上清液，用碳酸钠碱化，加入福林酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中产生的酪氨酸量成正比，用分光光度计在660纳米波长下测定酪氨酸含量，计算酪蛋白含量。活力测定法，酪蛋白溶液放40恒温水浴预热5分钟。空白试管：加入1毫升酶溶液，在40水浴中搅拌后加入2毫升三氯乙酸，摇匀，加入1毫升酪蛋白溶液，摇匀，取出静置10分钟，用滤纸过滤。取1毫升滤液、5毫升碳酸