蛋白酶产生菌的筛选

蛋白酶产生菌的筛选组：组*。班级：生产*班级成员： *指导老师： *一、实验目的学习与自然界分离的蛋白酶产生菌二、实验内容蛋白酶产生菌的分离三、实验原理许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是最常见的蛋白酶产生菌。 本实验对土壤样品悬浮液进行加热处理，杀死芽孢杆菌和其他微生物后，进行划线分离，得到芽孢杆菌，将其接种到奶粉培养平板中培养，根据奶粉平板的水解圈做成初筛。 将初筛产蛋白酶菌放入产酶培养基中振荡培养，测定蛋白酶活力，最终得到产蛋白酶芽孢杆菌。 将细菌直接接种到奶粉培养平板中培养，也可以分离筛选其他蛋白酶产生菌。四、实验材料和工具1 .材料：土壤样品2 .试剂：牛肉糊胨培养及平板、奶粉培养基平板、45mL无菌水(带玻璃珠)、芽孢染色液、3 .仪器及器具：紫外分光光度计、显微镜、恒温水浴锅、摇床、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒、容积瓶、漏斗、试剂瓶、漏斗、载玻片、滤纸、镜纸。五、操作步骤(一)制备必要的培养基；按以下配方制备必要的培养基牛肉糊精培养基：牛肉糊0.5g、糊1g、NaCl 0.5g、琼脂1.52.0g、水100ml、pH 7.2调制200mL奶粉培养基：牛肉糊0.5g，胨1g，NaCl 0.5g琼脂2.0g，水100ml，pH 7.07.2配制脱脂奶粉3g，200mL(2)分离1 .取土壤样品，用无菌水植被1:10土壤悬浮液。取1:10土壤悬浊液5 mL，注入灭菌的试管中，将该试管放入7580的水浴中热处理10min，杀死芽孢细菌。3 .采集经过加热处理的土壤悬浊液100200L，涂布接种到牛肉糊的胨培养平板上后，将平板倒置，在3032下培养2448h4 .对生长的单菌落进行编号，表面干燥、粗糙、不透明的菌落，选取少许菌苔涂片，进行芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。(三)筛选1 .从判定为芽孢杆菌的菌落中分别选取少许菌苔，接种奶粉斜面培养基，转移到奶粉培养基的平板上，在3032下培养2448h。2、选取水解轮直径与菌落直径比较大的菌，放入牛肉糊的蛋白质培养基中，在30-32下振荡培养48小时，过滤或离心发酵液，清夜检测蛋白酶活性筛选。六、实验结果：相关图像：(2)菌株的分离根据菌落大小、形状、表面光泽、隆起程度、透明度、边缘性状和菌落颜色的不同，最终从培养基中筛选出23个菌落。(3)将分离的菌株分别接种到含脱脂奶粉的培养基中，在32下培养60小时，在室温下观察有无产生细胞外蛋白酶，分解培养基中的脱脂牛奶，进而产生肉眼可见的水解透明环。 结果显示，接种的23株菌落中，有18株用细胞外蛋白酶分解脱脂牛奶，形成肉眼可见的透明环。 从中筛选出9株水解圈与菌落直径比较大的菌株。 请参阅下表菌株号123456789比率说明：“”表示水解圈与菌落直径之比约为3:1；”表示水解圈与菌落直径大于3:1。六、结果分析在奶粉培养基的平板上，被孢子生成的蛋白酶水解蛋白质，形成透明的环(参照实验相关照片)。 不同种类微生物产生的蛋白酶的种类和活力各不