质粒转化、细胞转染步骤_第1页
质粒转化、细胞转染步骤_第2页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

转化：将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内使之获得新的遗传特性。转染（transfection）:将含有目的gene的载体转到真核cell内转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程。有时也指在真核cell之间通过逆转录病毒转移和获得cellDNA的过程。1.质粒转染（transfection） 6-well-plate 每well 60-70%时transfection 接种时2.5105个/ml/well质粒DNA 转染液 优化培养基opti-MEM步骤：2.5ug质粒DNA + 200ul opti-MEM + 6ul转染液 混匀室温静置15min 待转染cell换优化培养基 opti-MEM 1.3ml，切记要轻轻加培养基，勿冲起cell 把transfection complex(200ul)轻轻均匀滴入cell培养基中，十字形摇晃plate,混匀 37，CO2培养箱培养 2.转化：外源DNA(质粒作为载体)导入受体细胞（大肠杆菌感受态cell） 步骤：50ul感受态cell（一管）加入12ul质粒DNA轻柔混合 冰浴30min 42热激90s迅速冰浴2min向管中加入培养基，混匀后37震荡培养（225rpm）
人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论