药物分析15章甾体激素类药物的分析.ppt

药物分析,第十五章:甾体激素类药物的分析,CompanyLogo,甾体激素类药物的分析,甾体激素类药物,环戊烷并多氢菲母核的激素类药物,发现史,SteriodHormones,CompanyLogo,甾体激素类药物的分析,1.甾体激素是在研究哺乳动物内分泌系统时发现的内源性物质,发现史,2.1932年至1939年间，从腺体中获得雌酮(1932)、雌二醇(1932)、睾酮(1935年)及皮质酮(1939)等的纯品结晶。,3.随后，发明用薯蓣皂甙(Diosgenin)为原料进行半合成生产甾体药物，使生产规模扩大，成本降低,4.发现肾上腺皮质激素治疗风湿性关节炎及其在免疫调节上的重要价值，使甾体药物成为医院中不可缺少的药物,5.甾体口服避孕药的研究成功，使人类生育控制达到了新水平,CompanyLogo,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,分类,CompanyLogo,Contents,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,母体结构,（环戊烷并多氢菲）,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,母体衍生结构,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,一、肾上腺皮质激素,3,11,17,20,21,氢化可的松(hydrocortisone),醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate),16-甲基,21-酯化,17-羟基,9-氟,3-酮,1,2-双键,11-羟基,20-酮,CompanyLogo,CompanyLogo,本类药物结构特征,A环4-3-酮基,为共轭体系,在波长240nm附近有紫外吸收,部分药物在C1-C2之间有双键,也有紫外吸收,CompanyLogo,本类药物结构特征,C17位上为-醇酮基,具有还原性.多数药物有C17-羟基,部分药物-醇羟基与酸成酯.,CompanyLogo,本类药物结构特征,部分药物的C6或C9位由卤素取代,呈相应的卤化物反应,CompanyLogo,本类药物结构特征,部分药物C11位上有羟基或酮基取代,CompanyLogo,二、雄性激素及蛋白同化激素,第一节基本结构与性质,甲睾酮(methyltestosterone),丙酸睾酮(testosteronepropionate),苯丙酸诺龙(nandrolonephenylpropionate),17-羟基,CompanyLogo,甲睾酮(methyltestosterone),A环4-3-酮基,C17位上为羟基,部分药物的羟基被酯化,雄性激素上的母核为19个碳原子,蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基,母核只有18个碳原子,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,三、孕激素,黄体酮(progesterone),醋酸甲地孕酮(megestrolacetate),米非司酮(mifepristone),CompanyLogo,第一节基本结构与性质,四、孕激素,炔诺酮(norethisterone),左炔诺孕酮,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,三、孕激素,黄体酮(progesterone),A环4-3-酮基,C17位上有甲酮基或乙炔基.,多数在C17位上羟基部分药物的羟基被酯化,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,四、雌性激素,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,四、雌性激素,有些药物在C17位上有乙炔基,构成19-去甲孕甾烷母核,A环为苯环,C3位上有酚羟基,有的药物C3位上的酚羟基成酯,C17位上有羟基有些药物C17位羟基成酯.,CompanyLogo,第一节基本结构与性质,总结如下,CompanyLogo,第二节Identification,物理常数的测定化学鉴别法制备衍生物测定熔点UVIRTLCHPLC,理化性质与鉴别试验,CompanyLogo,第二节Identification,一、物理常数的测定,1.熔点,CompanyLogo,第二节Identification,CompanyLogo,第二节Identification,二、化学鉴别法,2.比旋度3.吸收系数,1.与强酸的呈色反应,CompanyLogo,第二节Identification,2.官能团的反应,C17-醇酮基还原性,CompanyLogo,第二节Identification,C3酮基和C20酮基,CompanyLogo,甲酮基或活泼亚甲基,第二节Identification,卤素酚羟基,CompanyLogo,乙炔基,第二节Identification,酯基,CompanyLogo,黄体酮,三、UV四、IR,第二节Identification,酚羟基,醇羟基,炔键,羰基,苯环骨架振动,CompanyLogo,第二节Identification,五、TLC,制剂分析对照品法,炔诺酮,六、HPLC,CompanyLogo,第三节PurityTest,一、TLC,地塞米松磷酸钠中杂质检查,CompanyLogo,第三节PurityTest,氢化可的松中其他甾体检查,CHCl3-MeOH(9:1)溶剂硅胶GF254二氯甲烷-乙醚-甲醇-水385:60:15:2展开后晾干105干燥10min碱性四氮唑蓝显色,CompanyLogo,二、HPLC,第三节PurityTest,黄体酮中有关物质检查,供试品溶液的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于对照液的主峰面积的3/4,CompanyLogo,第三节PurityTest,三、硒的检查,来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,四、溶剂残留,甲醇和丙酮(GC),0.3%,0.5%,CompanyLogo,第三节PurityTest,五、游离磷酸盐检查,740nm，UV,CompanyLogo,第四节Assay,HPLCUV比色法,非水溶液滴定法,CompanyLogo,第四节Assay,一、HPLC,己烯雌酚,黄体酮,CompanyLogo,第四节Assay,二、UV,醋酸地塞米松,CompanyLogo,第四节Assay,三、比色法,比色法是指供试品在紫外-可见光区没有强吸收，或在紫外光区虽有吸收，但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色的测定方法。由于显色时的影响因素较多，应取供试品和对照品平行操作，采用对照品比较法测定，比色时采用试剂空白。,CompanyLogo,第四节Assay,比色法,2,3,5-TriphenyltatrazoliumchlorideTTC(RedtatrazolineRT),甲潜(Formazan),深红色max480490nm,CompanyLogo,第四节Assay,BluetetrazolineBT,BT-单甲潜,BT-双甲潜,蓝色max525nm,CompanyLogo,氢化可的松软膏的含量测定,第四节Assay,精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25的暗处放置40min45min，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得,CompanyLogo,第四节Assay,（1）基团对反应速度的影响,（2）溶剂、水分的影响,无水乙醇(无醛),CompanyLogo,第四节Assay,（3）O2与光线的影响,（4）碱的种类及加入顺序,反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳,（5）温度与时间,t甲瓒分解%,CompanyLogo,(二)异烟肼法(Isonicotinicacidhydrazide),第四节Assay,CompanyLogo,第四节Assay,影响因素,专属性强,无水,CompanyLogo,第四节Assay,(4)酸、异烟肼的量,盐酸:异烟肼=2:1,样品:异烟肼=1:8,CompanyLogo,第四节Assay,(三)Kober反应比色法,CompanyLogo,第四节Assay,采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量,CompanyLogo,第四节Assay,四、非水滴定米非司酮,五、生物样品中的甾体激素的分析,刺激剂麻醉剂-阻断剂利尿剂遮蔽剂合成类固醇及2激动剂肽类激素,内源性,CompanyLogo,兴奋剂检测特点,色谱方法是理想的检测手段。1976年使用气相色谱-质谱联用手段检测甾体，1980年开始用毛细管气相色谱法检测，至1984年大体基本定型。,药物及其代谢物的种类多，变化大，禁用的百余种药物以原体或一个或多个代谢产物的形式存在与人体体液中，因此，需要检测和确证的化合物多达几百种。除此以外，用药后的不同时间，这些化合物的浓度不断的发生变化，直到排出体外。药物在人体体液中的浓度很低，药物在人体体液中的浓度常常是ng级或更低的水平，因此对检测的灵敏度要求很高。要求准确的定性和定量，不能有丝毫的疏漏和差错。检测者要对每一种药的药物代谢动力学及光谱分析有全面娴熟的了解及足够的分析参考资料,CompanyLogo,检测基质,1.尿液,尿样检测是兴奋剂检测的理想样本。其优点在于：取样方便；对人无损害；尿液中的药物浓度高于血液中的药物浓度；尿液中的其他干扰少。,2.血样,补充尿样分析方法的不足，目前尚处于研究探索阶段，目前仅用于血液回输，红细胞生成素，生长激素，绒毛膜促性腺激素，睾酮等的测量。,CompanyLogo,3.头发,在法医，毒性分析中已有较长历史，但在兴奋剂研究中是才兴起研究方向。有采样容易，无损伤，不易作弊的特点，备受关注。皮质类固醇在体内消除很快，如果赛前停药，尿液分析就检测不到，而发样分析仍可检出。,4.体液,CompanyLogo,检测步骤,一、筛选方法（1）挥发性含氮化合物组：主要检测刺激剂。这类药物多以游离形式排出。（2）难挥发含氮化合物组：主要检测麻醉阵痛剂和-阻断剂。这两类药物多以结合形式排出，因此需先水解，使之游离，再进行衍生化后检测。（3）利尿剂组：药物经提取后用高效液相色谱法分析检测，此组同时检测2种兴奋剂、咖啡因和匹莫林。（4）甾体同化激素组：此类药物有的以游离形式，有的以结合形式排出，我们所用的方法为同时检测。,CompanyLogo,二、确证方法经筛选判为阳性的尿样，需进一步加以确证，根据规定，确证结果须给出药物或其代谢物的质谱图，因此在确证方法中均使用气相色谱法-质谱联用仪，确证时的分组同筛选方法中所述。（1）挥发性含氮化合物组方法同筛选，最后之提取物浓缩后进样于GC/MSD。（2）难挥发含氮化合物组方法同筛选，最后之衍生化产物取小量进样于GC/MSD。（3）利尿剂组此组药物需衍生化，然后进样于GC/MS（4）甾体同化激素组方法同筛选，唯最后得出全质谱图作为确证。,检测步骤,CompanyLogo,中国兴奋剂检测中心座落在北京国际奥林匹克体育中心内,自1989年得到国际反兴奋剂机构(WADA)的承认后，连续15年通过资格考试。该中心掌握了目前最先进的检测技术，包括高分辩率质谱、同位素质谱、EPO血检、尿检等方法，同时承担WADA赛外检测任务和周边国家的抽样检测任务，检测数量达到每年8000份.,ThankYou!,CompanyLogo,合成类固醇及2激动剂,共27种。合成类固醇又称为甾体同化激素，是雄性激素衍生物。这类药物有增长肌肉的作用，为很多运动员口服或注射使用，但副作用也很严重，会干扰人体的自然激素平衡，男人服用