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文档简介

溶菌酶活力测定,掌握溶菌酶的活力测定的原理和方法,溶菌酶活力的测定,酶活力测定原理溶菌酶又叫胞壁质酶，N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。能催化某些细菌（革兰氏阳性菌）细胞壁多糖的水解，从而溶解这些细菌的细胞壁，起到杀死细菌的作用。测定溶菌酶活力时，可用某些细菌细胞壁做底物，细胞壁溶解，细菌解体后，菌悬液浊度降低，因此，可以通过分光光度法测定菌悬液浊度变化，计算溶菌酶活性。本实验以溶壁微球菌为底物，通过测定细菌悬液浊度的变化（OD450）来测定溶菌酶的活性。溶壁微球菌为革兰氏阳性；生长最适温度为25-30。,溶菌酶活力测定,实验仪器、材料及试剂（一）仪器分光光度计（二）材料及试剂溶菌酶，0.1mol/LpH6.2磷酸缓冲溶液，溶壁微球菌干粉,烧杯，玻璃棒，量筒,溶菌酶活力测定,操作步骤1、溶菌酶液配制：准确称取干溶菌酶粉5mg,用0.1mol/L磷酸缓冲液5ml溶解成1mg/ml的酶液，再用0.1mol/L磷酸缓冲液稀释4倍，即为酶应用液。2、底物配制：取干菌粉5mg加缓冲液少许，在乳钵中（或匀浆器中）研磨2分钟，倾出，稀释到1525ml，此时在光电比色上的吸光度最好在0.50.7范围内。,溶菌酶活力的测定,3酶活力的测定将酶液与底物悬液分别置于25水浴中保温1015min,吸取底物悬浮液3mL放入比色杯中测底物悬液的OD450值,作为对照。然后加入酶液0.2mL,迅速摇匀。从加酶时开始记时,每30s测1次OD450值,共测3次。按下列表格记录是按结果：,溶菌酶活力的测定,实验数据处理酶活力单位（U）的定义是：在25，pH6.2，波长为450nm时，每分钟引起吸光度下降0.001为1个活力单位。酶的活力单位数=A450/t0.001比活力：每毫克酶蛋白所具
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