洁净区环境监测标准操作规程

1、1. 目的建立洁净区环境监测规程，规范洁净区沉降菌、浮游菌、悬浮粒子、表面微生物、温湿度、压差、换气次数及风速的测试，保证产品在规定的洁净级别内进行生产。2. 范围本标准适用于洁净区环境的监测。3. 责任3.1. 设备工程部：负责协助环境监测异常结果的分析与处理。3.2. 生产部：负责生产洁净区的使用、消毒灭菌、日常维护保养，负责生产洁净区日常环境监测项目。3.3. 质保部：负责洁净区的环境监控，负责跟踪洁净区不合格项的整改；负责实验室洁净区的使用、消毒灭菌、日常维护保养。4. 内容4.1. 名词定义：A. 洁净区：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的功能间或区域。其建筑结构、装备及其使用均

2、具有减少对该区域污染源的介入、产生和滞留的功能。B. 洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。C. 局部空气净化：仅使室内工作区域特定的局部空间的空气含悬浮粒子浓度达到规定的空气洁净度级别，这种方式称局部空气净化。D. 洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径悬浮粒子的允许统计数。E. 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。F. 单向流：沿着平行流线，以一定流速、单一通路、单一方向流动的气流。G. 垂直单

3、向流：与水平面垂直的单向流。H. 水平单向流：与水平面平行的单向流。I. 非单向流（曾称为乱流）：具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。J. 静态测试：功能间净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，功能间内没有生产人员的情况下进行的测试。K. 动态测试：功能间已处于正常生产状态下进行的测试。L. 置信上限（UCL）：从正态分布抽样得到的实际均值按给定的置信度（此处为95%）计算得到的估计上限将大于此实际均值，则称计算得到的这一均值估计上限为置信上限。4.2. 无菌医疗器具洁净室（区）环境要求及监测监测项目技术指标监测方法监测频次100级（A级）10000级

4、（C级）级（D级）级温度，（无特殊要求时）1828JGJ7119901次/班相对湿度，%45651次/班风速，m/s水平层流0.4垂直层流0.31次/月换气次数，次/h2015121次/月静压差，Pa不同级别洁净室（区）及洁净室（区）与非洁净室（区）之间51次/月洁净室（区）与室外大气101次/月尘埃数个/m30.5m3500GB/T1629220101次/季5m20002000060000浮游菌数，cfu/m35100500GB/T1629320101次/季沉降菌数，cfu/皿131015GB/T1629420101次/周表面微生物物体表面cfu/碟125502020版中国药典1次/月人员手

5、套cfu/手12550说明：无菌医疗器具洁净室（区）在静态条件下检测的尘埃数、浮游菌数或沉降菌数、换气次数（100级层流风速）、静压差、温度、相对湿度必须符合规定，应按监测频次对上述参数进行动态测试。4.3. 日常温湿度的监测A. 车间班组长或指定人员应在当班生产前确认生产洁净区的温湿度，并记录在洁净区温湿度监测记录表中（见附表1），若温湿度偏离指标要求，应及时告知生产负责人及现场QA，通知设备工程部协助调查原因采取相应措施。B. 实验员应在每次做生物实验前确认实验室的洁净区温湿度，并记录在洁净区温湿度监测记录中。若指标偏离，应及时告知质保部负责人，通知设备工程部协助调查原因采取相应措施。4.

6、4. 日常压差的监测A. 车间班组长或指定人员应在当班生产前确认生产洁净区的各个主要功能间的压差，并记录在洁净区压差监测记录表中（见附表2），若压差偏离指标要求，应及时告知生产负责人及现场QA，通知设备工程部协助调查原因采取相应措施。B. 实验员应在每次做生物实验前确认实验室的洁净区压差，并记录在洁净区压差监测记录表中。若指标偏离，应及时告知质保部负责人，通知设备工程部协助调查原因采取相应措施。4.5. 风速的监测：4.5.1. 仪器和设备：风速仪，严格按照风速仪标准操作规程操作。4.5.2. 测试步骤A.在A级层流工作台正常运转不少于30min后进行测量；B.将主过滤器或扩散板下游10cm的

7、平面的面积分成不得少于十二等分的面积，各面积中心即为风速测试点（见图1），各测试点的间距不得大于25cm。C.将各测试点的测量结果记录于洁净区风速监测记录表中（见附件3）D.结果计算：将各测试点风速值计算出界面风速平均值。平均值应达到4.2中风速指标要求。（图1风速测点布置图）4.6. 换气次数的监测：4.6.1. 仪器和设备：风量仪，严格按照风量仪标准操作规程操作。4.6.2. 测试步骤A.在空调系统正常运转不少于30min后，宜将风量仪紧贴在高效过滤器的送风口上，记录测得的风量值。B.房间中所有的送风口都需要测量。C.将测量结果记录于洁净区换气次数监测记录表中（见附件4）D.换气次数结果计

8、算：将房间中所有送风口测量的风量值相加，然后除以该房间的体积即可。计算的换气次数需满足4.2中换气次数的指标要求。4.7. 静压差的监测：4.7.1. 仪器和设备：手提式压差表，严格按照静差压计标准操作规程操作。4.7.2. 测试步骤A. 在空调系统正常运行不少于30min后，将待测房间门关闭，压差计显示归零后，人员在待测房间外将压差计的正极一端管子从房门底部塞入待测房间内（注：若待测房间与外是负压差，则将压差计的负极一端插管塞入房间进行测量），待压差计显示数值稳定后读取数值，并记录在洁净区静压差监测记录表中（见附件5）。4.7.3. 按房间布局从里到外的顺序进行测量。各房间的静压差需满足4.

9、2中静压差的指标要求。4.8. 悬浮粒子的监测：4.8.1. 仪器和设备：尘埃粒子计数器，严格按照尘埃粒子计数器操作标准规程操作。4.8.2. 测试步骤4.8.2.1.测试条件：测试之前首先检查被测试区域的温度、湿度、压差、空气换气次数是否符合要求。如在规定范围内方可进行测试。4.8.2.2.测试状态：静态测试，人员不得多于2人。测试报告中应明确测试时所采用的状态及测试人员数。4.8.2.3.测试时间A. 对于正常生产的车间进行监测：一般在生产现场清理合格，空气净化系统运行一段时间后，生产之前进行测试。B. 对新建或改造后车间的空气系统，应在车间安装完成，经过数次清理，空气系统调试风平衡，各区

10、间压差达到要求后进行测试。C. 对单向流，测试应在空气净化系统正常运行时间不少于15分钟后开始；对非单向流，测试应在空气净化系统正常运行时间不少于30分钟后开始。4.8.3. 采样点数目及其布置A.在空态或静态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应力求均匀，并不得少于最少采样点数目。在动态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置。最少采样点数目如下：最少采样点数目面积（）洁净级别A级C级D级30万级102-322210204222204082224010016422采样点的布置 B.采样点位置：一般在离地0.8m高度的水平面上均匀布置，并避开回风口。测试人员应在采样

11、口的下风侧。C.采样次数的限定：对于任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，每个采样点至少采样3次。最小采样量洁净度级别采样量L/次0.5m5mA级5.668.5C级2.838.5D级2.838.530万级2.838.54.8.4. 测试结果警戒限度及纠偏措施：A. 悬浮粒子测试结果警戒限度和行动限度：洁净级别静态警戒限静态行动限动态警戒限动态行动限0.5m5m0.5m5m0.5m5m0.5m5mA级粒/m32816-3168-2816-3168-C级粒/m3232026102320026100D级粒/m32320026100未规定未规定30万级粒/m36960078300未

12、规定未规定B. 洁净区悬浮粒子测试时，若单次采样结果超过对应级别警戒限，应对该点重新采样两次，若两次重新采样结果均较好，则按两次测试结果的均值计数，若两次测试结果中有一次或两次均超过警戒限，则及时通知使用岗位，使用岗位针对检测结果确定改进措施及实施时间。如检测结果超过行动戒限，则通知使用岗位立即停止使用，采取纠正措施（高效过滤器补漏或更换高效过滤器等），在措施实施后再次采样检测，测试结果低于警戒限，方可使用该区域。4.8.5. 将测试结果记录于洁净区悬浮粒子监测记录表中（见附件6）。4.8.6. 结果判定4.8.6.1.悬浮粒子测试结果判定4.8.6.2.判断所测试区域悬浮粒子是否符合规定，计

13、算结果必须满足下述二个条件：A. 每个采样点的平均粒子浓度必须低于或等于规定的级别界限，即Ai级别界限。B. 全部采样点的粒子浓度平均值的95%置信上限必须低于或等于规定的级别界限，即UCL级别界限。C. 洁净区悬浮粒子测试不合格的处理：如测试结果不合格，被测试单位应立即停止使用，对该区域重新进行处理（清洁消毒等），处理完毕后重新采样检测，测试结果低于警戒限，方可使用该区域。同时需追踪本次测试过程中生产的和测试之前连续四天生产的产品，通知QC扩大面积取样检测微生物限度，如不合格继续向前追踪，直至连续四天生产的产品全部合格，不合格的按不合格品处理。4.9. 沉降菌的监测4.9.1. 仪器和设备：

14、高压消毒锅、恒温培养箱、胰酪蛋白胨琼脂培养基（TSA成品培养基：D90A）或沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA成品培养基D90E）。4.9.2. 测试步骤A. 对单向流，如A级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于15min后开始；对非单向流，如C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始；B. 测试前将成品培养基脱去外包装周转进入洁净区；C. 按照采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中；D. 培养基暴露时间为30分钟以上；E. 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。采用D90A培养皿经采样后在3035下

15、培养，时间不少于2天。采用D90E培养皿经采样后在2025下培养，时间不少于5天。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养；F. 菌落计数：用肉眼直接计数，然后用510倍放大镜检查有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。4.9.3. 将培养结果记录于洁净区沉降菌监测记录表中（见附件7）。4.9.4. 沉降菌测试采样点的限定A. 采样点数目及其布置：参照悬浮粒子的采样点数目。B. 工作区采样点的位置：一般离地0.81.5m左右（略高于工作面）；可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。C. 最少培养皿数：在满足最

16、少采样点数目的同时，还应满足最少培养皿数。最少培养皿数洁净度级别最少培养皿数（90mm）A级2C级2D级230万级2D. 采样次数：每个采样点采样一次。4.9.5. 沉降菌测试结果判定4.9.5.1.洁净区内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。4.9.5.2.洁净区沉降菌测试不合格的处理：如测试结果不合格，被测试单位应立即停止使用，对该区域重新进行处理（清洁消毒等），处理完毕后重新采样检测，测试结果低于警戒限，方可使用该区域。同时需追踪本次测试过程中生产的和测试之前连续四天生产的产品，通知QC扩大面积取样检测微生物限度，如不合格继续向前追踪，直至连续四天生产的产品全部合格，不合格的按不合格品

17、处理。4.10. 浮游菌的监测4.10.1. 仪器、设备和培养基：FKC-1型浮游菌采样器，严格按照浮游菌采样器标准操作规程操作，胰酪蛋白胨琼脂培养基（TSA成品培养基：D90A）或沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA成品培养基D90E）、恒温培养箱。4.10.2. 测试步骤A.测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。采样器进入被测房间前先用消毒剂消毒，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。采样者

18、应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。B.仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。置采样口于采样点后，依次开启 采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。C.培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。在3035培养箱中培养，时间不少于48h。每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。4.10.3. 菌落计数:用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用510倍放大镜

19、检查，有否遗漏。若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。4.10.4. 将培养结果记录于洁净区浮游菌监测记录表中（见附件8）。4.10.5. 浮游菌测试采样点的限定A. 采样点位置：采样点位置可以同悬浮粒子测试点；工作区测点位置离地0.81.5m左右(略高于工作面)；送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。B. 采样次数：每个采样点一般采样一次。C. 采样注意事项：1 对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上；2 布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上；3 采样时，测试

20、人员应站在采样口的下风侧。D. 采样点数量及其布置：浮游菌测试的最少采样点数目及其布置参照悬浮粒子的采样点数目。4.10.6. 浮游菌测试结果判定A. 用浮游菌平均浓度判断洁净区空气中的微生物。B. 每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定的评定标准中关于菌落浓度的界限。C. 洁净区浮游菌测试不合格的处理：如测试结果不合格，被测试单位应立即停止使用，对该区域重新进行处理（清洁消毒等），处理完毕后重新采样检测，测试结果低于警戒限，方可使用该区域。同时需追踪本次测试过程中生产的和测试之前连续四天生产的产品，通知QC扩大面积取样检测微生物限度，如不合格继续向前追踪，直至连续四天生产的产品全部合格，不合

21、格的按不合格品处理。4.11. 表面微生物的监测4.11.1. 概述：本方法采用接触碟法检测。即通过收集洁净区表面的生物性粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室(区)的洁净度。本法采用动态监测。 4.11.2. 仪器与培养基：一般采用55mm无菌接触碟：胰酪蛋白胨琼脂培养基D55A。4.11.3. 采样点的选择：参考空调系统验证的结果；房间的用途；与产品的距离；人流物流方向。(对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点

22、)。随机抽验洁净区生产人员，用接触碟接触生产人员的手部，左手和右手分别采样。4.11.4. 测试步骤：A. 取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒，再盖上碟盖，做好标记。B. 取样后：需要立即用消毒剂擦拭取样表面，以去除残留琼脂。C. 培养：收好的接触碟在3035培养72小时。以所有采样点的平均值总和为最终结果。每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。D. 将培养结果记录于洁净区表面微生物监测记录表中（见附件9）。4.12. 年度回顾审核与数据趋势分析4.12.1. 质保部

23、每年对通过质量回顾对监测数据收集并经评价，用统计分析图将趋势直观地反映出来，在图中标出警戒限度及纠偏限度。4.12.2. 根据趋势分析结果可对环境控制区的微生物学质量做出评估，并对警戒和纠偏限度做出相应调整，并通知相关部门。5. 记录洁净区温湿度监测记录表洁净区压差监测记录表洁净区风速监测记录表洁净区换气次数监测记录表洁净区静压差监测记录表洁净区悬浮粒子监测记录表洁净区沉降菌监测记录表洁净区浮游菌监测记录表洁净区表面微生物监测记录表监测点分布图6. 相关文件洁净区管理规程 HYT/SMP-CF-SB-005尘埃粒子计数器操作标准规程 HYT/S0P-EQ-ZB-001浮游菌采样器操作标准规程

24、HYT/S0P-EQ-ZB-002 静压差计操作标准规程 HYT/S0P-EQ-ZB-003风速仪操作标准规程 HYT/S0P-EQ-ZB-004风量罩标准操作规程 HYT/S0P-EQ-ZB-0057. 参考文献医药洁净室（区）沉降菌的测试方法 GB/T16294-2010医药洁净室（区）浮游菌的测试方法 GB/T16293-2010医药洁净室（区）悬浮粒子的测试方法 GB/T16292-2010药品GMP指南-无菌药品 2010版洁净厂房施工及验收标准 JGJ71-19902020版中国药典8. 修订历史序号生效日期文件编号及版本号修订性质及原因修订内容及具体条款附件1：洁净区温湿度监测记

25、录表编号： HYT/SOP-CF-ZB-001测试地点：车间： 实验室房间编号年份月份温湿度计编号计量有效期至监测标准：洁净区温度要求：1828；对湿度要求：4565%日期时间温度（）相对湿度（%）记录人时间温度（）相对湿度（%）记录人备注附件2：洁净区压差监测记录表编号： HYT/SOP-CF-ZB-001测试地点：车间： 实验室房间编号年份月份压差计编号计量有效期至监测要求：不同级别洁净区及同一个洁净区不同房间压差5pa，洁净区与非洁净区压差10pa日期时间压差（pa）记录人时间压差（pa）记录人备注附件3：洁净区风速监测记录表编号： HYT/SOP-CF-ZB-001 测试地点设备名称设

26、备编号监测状态静态层流模式水平层流 垂直层流监测仪器热敏风速仪计量编号计量有效期测试时间监测标准水平层流0.4m/s，垂直层流0.3m/s采样点12个监测依据JGJ71-1990洁净室施工及验收标准监测数据（单位：m/s）采样点编号监测数据采样点编号监测数据172839410511612平均数结果判定符合要求 不符合要求备注检验人/日期： 复核人/日期：附件4：洁净区换气次数监测记录表编号： HYT/SOP-CF-ZB-001 测试地点：车间： 实验室监测仪器风量仪仪器编号计量有效期测试时间监测状态动态 静态监测依据JGJ71-1990洁净室施工及验收标准监测标准洁净级别C级D级30万级换气次

27、数20次/h15次/h12次/h监测数据区域名称洁净级别风量值m3/h房间体积(m)换气次数（次/h）结果判定符合要求 不符合要求备注：检验人/日期： 复核人/日期：附件5：洁净区静压差监测记录表编号： HYT/SOP-CF-ZB-001 测试地点：车间： 实验室监测仪器手提式压差表仪器编号计量有效期测试时间监测状态动态 静态监测依据JGJ71-1990洁净室施工及验收标准监测标准不同级别洁净区及同一个洁净区不同房间压差5pa；洁净区与非洁净区压差10pa监测数据区域名称洁净级别静压差Pa合格打“”不合格打“”结果判定符合要求 不符合要求备注检测人/日期： 复核人/日期：附件6：洁净区悬浮粒子监测记录表编号： HYT/SOP-CF-ZB-001 测试地点：车间： 实验室监测仪器尘埃粒子计数器仪器编号计量有效期测试时间监测状态静态温度湿度%监测依据GB/T16292-2010医药洁净室（区）悬浮粒子的测试方法监测标准（警戒线）洁净级别A级 粒/m3C级 粒/m3D级 粒/m330万级 粒/m30.5m28165m023202320069600监测数据房间名称洁净级别粒径采样点编号123平均值95%置信上限值（UCL）合格打“”不合格打“”0.5m采样点15m采样点20.5m采样点15m采样点20.5m采样点15m采样点2